【摘要】目的：分析肺炎支原体对大环内酯类抗生素的耐药分子机制。方法：对500例咽拭子标本开展肺炎支原体分离培养，采用聚合酶链反应（PCR）对肺炎支原体特异基因进行有效扩增，通过体外药敏试验对耐药分子机制进行分析和研究。与此同时，采用全自动检测仪对扩增产物实施测序处理，将其与标准株基因序列排列进行详细比较。结果：500例咽拭子标本中，成功分离出73株肺炎支原体，分离率达到14.6%。其中，敏感株8株，耐药株65株。同时，肺炎支原体对氟喹诺酮类抗生素具有敏感性，对大环内酯类抗生素具有耐药性；肺炎支原体对大环内酯类抗生素的耐药分子机制主要为“23SrRNA基因”，位点可由A突变至G。结论：肺炎支原体对大环内酯类抗生素存在较强耐药性，23SrRNA基因位点改变是产生耐药性的主要机制。
【关键词】肺炎支原体；大环内酯类抗生素；耐药分子机制
【引 言】
肺炎支原体（MP）是社区获得性肺炎（CAP）及小儿社区获得性呼吸道感染疾病中主要病原体，对其抗生素耐药分子机制进行研究，可为患者治疗提供更加安全合理的用药方案。权威文献报道，肺炎支原体对大环内酯类抗生素具有较强的耐药性，为此本研究对500例咽拭子标本开展MP分离培养，了解其耐药分子机制，现总结如下。
1资料与方法
1.1一般资料
严格按照随机方法选取所在医院2014年5月——2015年12月500例社区获得性肺炎患者，所有患者均符合疾病相关诊断及治疗标准，且对相关治疗情况知情同意。500例患者中，男性311例，女性患者189例，患者年龄5-15岁，平均年龄（9.52±0.13）岁。500例患者中，门诊患者426例，住院患者74例。
1.2排除标准
本研究符合所在医院伦理委员会相关标准及要求，病例排除标准为：（1）发病时间超过7d者；（2）合并严重免疫抑制性疾病者；（3）入组前接受过或正在接受免疫抑制剂治疗者；（4）无法定监护人者；（5）多种因素致无法配合研究者。
1.3研究方法
（1）标本收集、培养：患者入院后，对其咽拭子进行采集，并将其置放在盛放MP保存液的试管中，在零下80摄氏度的环境中进行保存。同时，采用相应方法对MP进行培养，取200μL变色培养基添加到标本中，在37摄氏度的环境中培养，时间控制在14-42d，发现颜色由澄清红演变委屈澄清黄时，即可判定为阳性。针对培养出来的阳性菌，要进行聚合酶链反应鉴定。
（2）药敏试验机序列测定：对几种常见的大环内酯类抗生素最低抑菌浓度进行测定，如阿奇霉素、克拉霉素、红霉素，同时 测定环丙沙星、氟罗沙星、左氧氟沙星等喹诺酮类抗生素进行药敏试验。采用聚合酶链反应测量法对MP全序列排列情况进行测定，并与标准株基因序列进行比较。
1.4指标观察
对500例咽拭子标本分离情况进行总结，同时统计分离情况，探讨肺炎支原体对大环内酯类及奎锘酮类抗生素的耐药性，将药敏试验结果分为：（1）敏感（S）；（２）中介（I）；（３）耐药（R）[1]。
1.5数据统计
文中数据采用spss20.0软件进行处理，计数资料以（%）表示，采用x2值进行检验，P＜0.05认为差异具有统计学意义。
2结果
500例咽拭子标本中，成功分离出73株肺炎支原体，分离率达到14.6%。其中，敏感株8株，耐药株65株，结果见表1。
3讨论
肺炎支原体是肺炎疾病的主要病原体，在全球范围内均有分布。权威文献[2]报道认为，30%左右的CAP患者由肺炎支原体病菌感染引发，不仅能够导致患者出现多器官损伤，同时由于患者年龄较小，疾病会对其身心健康及生活质量产生严重影响。目前，采用抗生素是治疗肺炎支原体感染的主要方法。
为进一步提高用药安全性及合理性，要对MP病菌对抗生素的耐药性及耐药机制进行探究。本研究结果显示：肺炎支原体对氟喹诺酮类抗生素具有敏感性，对大环内酯类抗生素具有耐药性。出现这种差异的主要原因在于肺炎支原体无细胞壁，对头孢菌素、青霉素及喹诺类抗生素耐药性较弱。但是，MP可对大环内酯类抗生素均会产生较强的耐药性，主要原因为出现大环内酯类抗生素可产生一定药物灭活酶[3]。
研究结果显示，耐药机制为23SrRNA基因，位点可由A突变为G，说明主要耐药机制为靶位变化，并受到主动排外机制的制约和影响。同时，23SrRNA基因改变后，可减弱药物结合力，造成抗生素高度耐药现象。
终上所述，肺炎支原体对大环内酯类抗生素耐药性较强，23SrRNA基因位点改变是出现耐药性的主要机制。临床在为患者进行用药治疗时，要减少大环内酯类抗生素的应用，充分减少用药不良反应，保证用药安全。
【参考文献】
[1]刘艳，刘丹，朱翠明，等.突变敏感性分子开关检测肺炎支原体对大环内酯类抗生素的耐药性研究[J].中国人兽共患病学报，2015，31（05）：479-484.
[2]赵茂茂，宋波，蒲增惠，等.肺炎支原体对抗菌药物敏感性及对大环内酯类的耐药机制研究[J].中华医院感染学杂志，2014，24（20）：5027-5029.
[3]戴月华.肺炎支原体对大环内酯类抗生素的耐药分子机制研究[J].中国医药指南，2015，13（33）：43.
论文作者:杨琴
论文发表刊物:《名医》（学术版）2016年3期
论文发表时间:2016/9/20
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