（双鸭山矿务局总医院门诊检验科 黑龙江双鸭山 155100）
【摘要】目的：探讨痰液及支气管分泌物标本的采集及检验方法。方法：对100例痰液及支气管分泌物标本及检验方法及结果进行分析。结果：100例标本中，涂片合格标本83例（83%），不合格标本17例（17%）。在涂片合格的标本中，63例检出75株细菌，细菌检出率为75.9%。在17例涂片不合格的标本中，5例痰标本检出7株细菌，细菌检出率为29.4%。结论：痰液及支气管分泌物标本的细菌学检验作为诊治呼吸道感染的初步依据，为临床提供了及时、准确的诊疗信息，不断提高医疗诊断水平。
【关键词】痰液；支气管分泌物标本；细菌学检验
【中图分类号】R473.6 【文献标识码】A 【文章编号】1007-8231（2017）08-0284-02
上呼吸道是指正常人喉以上部位，上呼吸道定植有大量的正常菌群，而喉以下包括气管、支气管和肺泡称为下呼吸道，正常无菌。呼吸道感染的病原体有细菌、病毒、衣原体、支原体、真菌、立克次氏体和原虫等。目前采集痰标本的方法自然咳痰法、吸痰留取法、雾化诱导排痰法、纤支镜毛刷刷片法等。逐步实现全程操作的科学化、规范化和标准化，增强细菌培养和涂片检查结果的可靠性与报告应用的有效性。
1.材料与方法
1.1 对象
选取我院2015年6月-2016年10月收治的我院住院及门诊患者的痰标本。主要选取怀疑有下呼吸道感染疾病患者的痰标本，住院患者痰标本主要选取存在肺炎、慢性支气管炎、支气管扩张等下呼吸道感染的患者的痰标本。
1.2 标本采集
（1）自然咳痰法
尽可能在使用抗菌药物之前采取标本，以晨起第一口痰为好。留取标本前用清水漱口三次或用牙刷清洁口腔及牙齿，用力深咳痰，标本量应≥lml，直接吐入无菌痰杯中。咳痰困难者可用雾化吸入加温至45℃的100g/L NaCl水溶液，使痰液易于咳出。标本应尽快送检，不能及时送检的标本，室温保存≤2h。
（2）上呼吸道标本
采集前患者应用清水反复漱口后，用无菌棉拭子在咽后壁取材，拭子尽量避免接触口腔和舌黏膜。
（3）支气管镜采集法、防污染毛刷采集法、环甲膜穿刺经气管吸引法、经胸壁针穿刺吸引法和支气管肺泡灌洗法。均由医生按操作规程采集，但注意避免咽喉部正常菌群的污染。
（4）标本的验收
遇到不合格标本，应及时与临床联系，报告不合格标本拒收的理由。
1.3 检验方法
（1）肉眼观察
观察痰液的颜色、黏度、有无血丝和是否呈脓性，如）有颗粒存在，则应注意可能与放线菌属及奴卡菌属感染有关。
（2）显微镜下检查
呼吸道细菌学检验的标本均需做涂片镜检。其目的是判定送检的标本是否适合做细菌培养，并初步判定有否病原菌、病原菌的量及类别，有助于初步报告、选择培养基(如真菌)和对培养结果的综合分析。
①涂片细胞学检查。涂片进行革兰氏染色，推荐判别送检的标本是否合格的标准[1]。
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②细菌涂片染色检查法。挑取痰液中脓性或带血部分涂成均匀薄片，革兰氏染色后镜检，观察细菌形态、排列和染色性，可初步推断菌属，涂片中所见细菌的量及吞噬细胞内是否有菌等。如发现酵母样孢子或菌丝，应做出相应的报告和真菌学检查。
③结核分枝杆菌涂片检查。将痰液标本在洁净无划痕玻璃片上涂成厚度适宜的均匀薄膜，待干，火焰固定，进行抗酸染色镜检。如查到形态及染色似结核分枝杆菌时，可报告“查到抗酸杆菌”。如未查到形态及染色似结核分枝杆菌时，则可报告“未查到抗酸杆菌”。查到抗酸杆菌时，以4+、3+、2+来表示。
④假丝酵母菌及熏烟色曲霉菌涂片检查。挑取痰液中脓性或带血部分少许，最好挑取其中带灰白色小薄片的部分，涂于玻片中央，然后滴加100g/L的KOH溶液1滴混合后，加盖玻片，在火焰上稍加温，并轻压盖片使标本变薄易于观察。
最后用显微镜观察未染色形态，观察后再除去盖片，待干，固定，做革兰氏染色后镜检[2]。白色假丝酵母菌在湿片中低倍镜观察可见成群的卵圆形、薄壁的酵母样细胞，生芽或不生芽，革兰氏染色阳性。可报告“找到酵母样真菌，形似白色假丝酵母菌”。熏烟色曲霉菌在湿片中，可见到类似菌丝的碎片和许多小而圆形呈暗绿色的孢子，散在整个视野中。可报告“找到有隔的真菌菌丝及孢子”。
（3）分离培养
①痰标本培养前的处理：不含或含黏液很少的标本，可直接接种，含有大量黏液的标本，应加入等量的液化剂（pH值7.6的10g/L胰酶溶液等），放置35℃待充分液化再行接种。也可加液化剂后用旋转混均器搅拌，3000r/min离心10min，弃上清，取沉淀物接种培养。
②一般细菌培养：将处理后痰标本分别划区接种于血平板、巧克力和中国蓝平板，35℃孵育。血平板及巧克力平板需置5％CO2环境中，18～24h后观察结果。挑取可疑菌落，涂片革兰氏染色镜检。根据菌落及镜检形态特点，得出初步印象，然后按各类细菌的特征做进一步的鉴定和药敏试验。
③嗜肺军团菌培养：将均质化的标本接种于血平板、巧克力平板和BCYE平板，置35℃5％CO2环境中孵育。若24h内有细菌生长，此菌不是嗜肺军团菌。如在BCYE平板上48h后生长，而在血平板、巧克力平板上不生长，此菌可能是嗜肺军团菌，应进一步鉴定。
④真菌培养：白色假丝酵母菌：将痰液标本用生理盐水洗涤后做成悬液，然后取此悬液接种于两管沙保弱培养基上，分别置于37℃及22℃或室温中培养2～7d。如有中等大小、湿润、黄白色乳酪样或浆糊状，具有显著酵母样气味的菌落时可得出初步诊断。再有厚膜孢子及假菌丝，糖发酵反应（葡萄糖+、麦芽糖+、蔗糖+、乳糖-）符合时，即可报告“真菌培养有白色假丝酵母菌生长”。根据本菌的特点如符合鉴定依据的各项，即可报告“真菌培养有熏烟色曲霉菌生长”[3]。一周后若无上述两种菌生长，可报告“真菌培养无白色假丝酵母菌和熏烟色曲霉菌生长”。
2.结果
100例标本中，涂片合格标本83例（83%），不合格标本17例（17%）。在涂片合格的标本中，63例检出75株细菌，细菌检出率为75.9%。在17例涂片不合格的标本中，5例痰标本检出7株细菌，细菌检出率为29.4%。
3.讨论
呼吸道标本易受定植在上呼吸道的正常菌群污染，进行细菌学检验时通常可从送检的标本中分离出多种细菌，确定哪一种细菌是引起呼吸道感染的病原菌，对临床诊断与治疗至关重要。当同一培养基上分离出复合菌时，找出优势菌，当分离优势菌与涂片染色镜检结果相符时，优势菌必须做药敏试验。若分离培养结果与涂片染色镜检结果不符时，可不进行药敏试验，仅报告分离细菌鉴定结果。分离培养的细菌为定植的正常菌群，应报告为“正常菌群”。
【参考文献】
[1]慕小星.痰标本的采集处理方法及可能发现的细菌[J].中国防痨杂志，2003，25(z1).57-58.
[2]陆爱玲，秦志强.肺炎病原体细菌学检查方法的研究进展[J].中国临床新医学，2011，04(6)：588-592.
[3]黄萍.简析痰标本在细菌学检验中的运用效果[J].现代养生b，2015，16(4)：279-279.
论文作者:孔立红
论文发表刊物:《心理医生》2017年8期
论文发表时间:2017/6/6
标签：标本论文; 涂片论文; 细菌论文; 细菌学论文; 真菌论文; 检出论文; 平板论文; 《心理医生》2017年8期论文;