邯郸市中心医院 056001
摘要 目的：探讨熊果酸（UA）对大鼠全脑缺血再灌注损伤的保护用及其作用机制。方法：采用四动脉结扎法制备全脑缺血再灌注大鼠模型，选取80只模型大鼠随机分为模型对照组、熊果酸（40、80和120 mg/kg）治疗组，并另取20只同龄大鼠做为假手术组；各组大鼠均于插入栓线后立即通过尾静脉注射给药。结果：与模型对照组相比，熊果酸（80、120 mg/kg）能够改善全脑缺血再灌注大鼠学习能力、促进翻正反射和脑电的恢复、降低脑组织含水量、抑制脑组织病理形态学改变；熊果酸（80、120 mg/kg）能够改善脑组织中SOD、CAT活性，降低LDH、MDA含量，降低TNF-α、IL-6含量，其中120 mg/kg 治疗组IL-1β含量显著降低，差异均具有统计学意义（P<0.05，P<0.01）。结论：熊果酸对大鼠全脑缺血再灌注损伤具有剂量依赖性的保护作用，其作用机制可能熊果酸能够有效改善抗氧化酶系统活性、减轻自由基损伤，抑制炎症反应有关。
关键词 熊果酸；全脑缺血再灌注；保护作用；机制
中图分类号：R96文献标识码：A
1 材料与方法
1.1 试验药物与试剂 熊果酸购自陕西慧科植物开发有限公司（批号：120417，纯度≥98%）； LDH、MDA、SOD、CAT试剂盒购自南京建成生物工程研究所；氯化-2, 3, 5-三
苯基四氮唑（TTC）购自中国医药集团上海化学试剂公司；TNF-α、IL-1β、IL-6 EILSA检测试剂盒购自北京博奥森生物技术有限公司；其余试剂均为分析纯。
SCXK（冀）2008-1-003，动物批次号：1307008。
1.3 主要仪器 全自动生化分析仪（武汉精诚伟业医疗设备有限公司）；UV-1200 紫外-可见光分光光度计（上海美谱达仪器有限公司）；BL-420E生物机能实验系统（成都泰盟科技有限公司）；Morris水迷宫（中国医学科学院药物研究所）；IKA T10 高速组织匀浆机（广州仪科实验室技术有限公司）；石蜡切片机（德国SLEE公司）。
1.4方法
1.4.1模型的制备与分组 选取80只大鼠模型随机分为模型对照组和熊果酸（40、80和120 mg/kg）治疗组，每组20只；另取20只同龄正常大鼠作为假手术组，假手术组行手术通路，但不做缺血处理。熊果酸各治疗大鼠均于插入栓线后立即通过尾静脉注射给药，模型对照组和假手术组分别给予等体积的生理盐水。
1.4.2 行为学研究 再灌注6h后，通过Morris水迷宫试验测定各组大鼠学习记忆能力，于水温（21±2）℃中，首先进行训练，分别从4个不同位置放入水迷宫，若大鼠在180s内未找到平台，将其引至平台并停留10 s，则寻台潜伏期记为180 s；然后进行测试，任意选定位置，以寻台潜伏期作为大鼠空间记忆成绩，测定三次，取平均值。
1.4.3翻正反射和脑电恢复时间 再灌注后，观察翻正反射恢复时间，并通过BL-420E生物机能实验系统测定各组大鼠脑电图振幅，观察脑电恢复时间。
1.4.4脑组织含水量的测定 再灌注6h后，断头取脑，去除嗅球、小脑和低位脑干，称定大脑湿重量，然后置于110℃恒温干燥箱中烘烤48h后称定干重量。计算公式：脑含水量=[（湿重量-干重量）/湿重量]×100%
1.4.5脑组织形态学变化的观察 再灌注6h后，参照1.4.4方法取脑组织，置于4%多聚甲醛溶液中进行固定、石蜡包埋、切片，然后行常规HE染色，通过光学显微镜观察脑组织形态学变化。
1.4.6脑组织中LDH、MDA含量和SOD、CAT活性的测定 再灌注6h后，参照1.4.4方法取脑组织，剪碎后进行研磨匀浆，经3000 rpm离心10min后，取上清液，按试剂盒操作步骤，通过生化检测仪测定血清中LDH含量，通过紫外-可见分光光度计测定血清中MDA的含量和SOD、CAT活性。
1.4.7脑组织中TNF-α、IL-1β、IL-6含量的测定 取1.4.6所制备的脑组织匀浆液，按ELISA试剂盒操作步骤测定脑组织中TNF-α、IL-1β、IL-6含量。
1.4.8 统计学方法 实验数据均以 形式表示；运用SPSS13.0进行统计分析，采用单因素方差分析进行检验；P<0.05表示差异有统计学意义，P<0.01表示有极显著性差异。
2 结果
2.1各组大鼠学习记忆能力的变化 较假手术组，模型对照组大鼠寻台潜伏期显著升高；而经熊果酸（80、120 mg/kg）治疗后，全脑缺血再灌注损伤大鼠寻台潜伏期显著缩短，且120 mg/kg治疗组优于80 mg/kg治疗组，差异均具有统计学意义（P<0.05，P<0.01），提示熊果酸对全脑缺血再灌注大鼠学习记忆功能具有剂量依赖性的改善作用，结果见表1。
2.2各组大鼠翻正反射和脑电恢复时间的变化 参照假手术组，模型组大鼠于再灌注35 min后翻正反射和脑电波均已基本恢复；而经熊果酸治疗后，对全脑缺血再灌注损伤大鼠翻正反射和脑电恢复时间较模型组均明显缩短，其中80和120 mg/kg治疗组具有显著性差异（P<0.05，P<0.01）。
2.3各组大鼠脑组织含水量的变化 模型对照组大鼠脑组织含水量较假手术组明显升高；而经熊果酸（80、120 mg/kg）治疗后，全脑缺血再灌注损伤大鼠脑组织含水量显著下降（P<0.05，P<0.01），结果见表1。
表1 各组大鼠脑组织含水量的变化( , n=20)
注：与假手术组比较：*P<0.05, **P<0.01；与模型对照组比较：△P<0.05, △△P<0.01
2.4各组大鼠脑组织病理形态学改变 经HE染色并通过光学显微镜观察发现，假手术组大鼠大脑皮层组织未见病理性改变；而模型对照组大鼠脑组织呈现明显的缺血性病变；而经熊果酸治疗后，全脑缺血再灌注损伤大鼠大脑皮层组织病理形态学改变明显减轻，其中以120mg/kg治疗组效果最为显著，结果见图1。
图1 各组大鼠脑组织形态学的变化（HE×400）
A-假手术组；B-模型对照组；C-熊果酸40mg/kg治疗组；D- 熊果酸80mg/kg
治疗组；E-熊果酸120mg/kg治疗组
2.5各组大鼠脑组织中LDH、MDA含量和SOD、CAT活性的变化 较假手术组，模型对照组大鼠脑组织中LDH、MDA含量显著升高，SOD、CAT活性显著降低；经熊果酸（80、120 mg/kg）治疗后，全脑缺血再灌注损伤大鼠脑组织中LDH、MDA含量显著降低，SOD、CAT活性显著升高，差异具有统计学意义（P<0.05，P<0.01）。
2.6各组大鼠脑组织中TNF-α、IL-1β、IL-6含量的变化 模型对照组大鼠脑组织中炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6含量显著升高（P<0.01）；而经熊果酸（80、120 mg/kg）治疗后，全脑缺血再灌注损伤大鼠脑组织中TNF-α、IL-1β、IL-6含量均显著降低（P<0.05，P<0.01）。
结论
熊果酸能够有效改善全脑缺血再灌注大鼠学习能力、促进翻正反射和脑电的恢复、降低脑组织含水量、抑制脑组织病变，提示熊果酸对大鼠全脑缺血再灌注损伤具有剂量依赖性的保护作用，其作用机制可能熊果酸能够有效改善抗氧化酶系统活性、减轻自由基损伤，抑制炎症反应有关。
参考文献
1.卢静, 张博超, 姜伟, 等. 熊果酸抗氧化性能的研究[J]. 食品工业科技, 2009; 30(4): 126-127
论文作者:陈鹏 丁志杰
论文发表刊物:《中国耳鼻咽喉头颈外科》2015年5月第5期供稿
论文发表时间:2015/7/16
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