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摘要：评估long interspersed nuclear element type 1（LINE-1）去甲基化水平作为肝癌风险检测指标的有效性。通过检索文献数据库，使用随机效应模型和亚组分析对LINE-1去甲基化水平进行评估。纳入的7项研究2135例样本中，肝癌的LINE-1去甲基化水平显著高于对照组，组织和血液样本分析显示LINE-1的去甲基化水平存在差异，其中，血液样本间存在显著差异。不同的检测法研究显示LINE-1的去甲基化水平存在差异。研究仅对样本来源和检测方法与肝癌LINE-1去甲基化进行分析，为不同样本来源和检测方法分析LINE-1甲基化提供了新证据。
关键词：肝癌，长散布核元件，甲基化；Meta分析
中国是肝癌高发地区之一，其肝癌病例数占全球50%以上。大量的研究显示癌症既是一种遗传性疾病也是一种表观遗传性疾病[1]。表观遗传学变化包括DNA甲基化、组蛋白修饰和染色体重塑等。LINE-1是一种分散在基因组中的重复序列，约占整个基因组的17% [2]。一些研究认为LINE-1的甲基化与基因组的甲基化有关，LINE-1的去甲基化与癌变过程中的遗传学变化有关[2]。因此，很多研究都假设LINE-1甲基化作为潜在通用肿瘤检测标志物[3]。
1 资料与方法
1.1检索策略
两名研究人员独立以（carcinoma、hepatocellular、hepatic cancer、hepatocarcinoma、liver carcinoma、hepatomas、liver cell carcinoma、liver cancer）和（methylation、hypermethylation、hypomethylation）和（Long Interspersed Nuclear Element-1、LINE-1）作为检索词，检索PubMed、EMBASE、Cochrane Library和web of science等数据库。从合格研究文献和相关文献的参考资料中查找符合入选标准的文献。
1.2 纳入和排除标准
纳入标准：2014年8月份之前发表的关于LINE-1甲基化与肝癌关系的研究文献，其中LINE-1的甲基化数据以平均值±标准误表示；文献语种为英语；若有重复发表的文献，只纳入最近期或最完整的研究；对照组为健康人或慢性肝病患者。
排除标准：无法进行数据质量评估和提取的文献；资料交待不清或不全等的文献；综述和评论；非临床或病例研究。
对纳入的结果出现疑问时，通过讨论或咨询第三方专家进行筛选。
1.3 数据提取
提取以下信息：文献作者和样本类型；病例和对照组样本数量；甲基化的检测方法；LINE-1的平均去甲基化率。
1.4 统计学方法
所有的数据使用stata软件和随机效应模型（95% confidence interval，95%CI）进行分析，不考虑环境因素对效应的影响。对可能造成LINE-1去甲基化检测异质性的样本类型和检测方法进行亚组分析。使用Q检验确定研究之间的异质性，P<0.1为显著的统计学异质性。利用I2对异质性进行量化，分别设定I2=0，25%，50%，75%为无异质性，低度异质性，中度异质性和高度异质性的分界点。利用tau2进行研究间差异性分析。
2 结果
2.1 纳入研究的概况
共有7项研究2135例样本纳入研究，其中401例组织样本（肝癌206例，正常的癌旁组织195例），1734例血液样本（肝癌患者血样440例，健康人群血样1294例）（见表1）[3-9]。4项研究使用了肝癌和正常的癌旁组织样本进行甲基化分析，3项使用肝癌和健康人群血液样本进行甲基化分析。对1例仅提供了男和女肝癌/癌旁组织的研究和1例仅提供了混合性肝癌和单纯肝癌的肝癌/癌旁组织的研究进行了合并[3，5]。57.14%（4/7）的研究使用Pyrosequencing法和42.86%（3/7）使用COBRA法进行甲基化检测。
表1 纳入研究的文献资料
2.2 统计分析结果
本研究使用随机效应模型和glass分析法进行数据评估。在肝癌样本中LINE-1的去甲基化水平显著高于对照样本（SMD：3.215，95%CI：1.741，4.689；P=0），各项研究间的异质性差异显著（I2=97.8%），因此，对样本来源和检测方法进行亚组分析。
样本来源分析时，组织和血液样本的LINE-1去甲基化水平存在差异（SMD：5.503；95%CI：2.309，8.696；p=0和SMD：0.984；95%CI：-0.265，2.234；p=0），其中，血液样本间，组织和血液的样本间分别显示显著的异质性差异（I2= 97.8%和94.3%）。
检测方法分析时，COBRA法和Pyrosequencing法检测的LINE-1去甲基化水平存在差异（SMD：1.269；95%CI：0.845，1.694；p= 0.247和SMD：5.297；95%CI：1.697，8.896；p=0），其中，Pyrosequencing法存在显著的异质性差异（I2= 98.8%），COBRA法存在中度异质性差异（I2=28.4%）。分别使用Egger法和Begg法检测，显示各项研究间存在偏移。
3讨论
对纳入的研究进行分析发现，肝癌组织和肝癌患者血液的LINE-1去甲基化水平显著高于正常的癌旁组织和健康人群的血样，与Barchitta等的研究类似。Saito等认为，肝癌和癌旁组织的恶性化进程中DNMTs升高，会造成基因组的甲基化状态变化[9]。由于肝癌组织的基因组甲基化状态呈现复杂性，而血液中甲基化状态相对稳定性，当肿瘤组织的DNA进入外周血，通过检测血液LINE-1的甲基化水平可为肝癌的甲基化状态分析、早期诊断和预后提供帮助[2]。
由于COBRA法通过甲基化PCR扩增对产物酶切分析，其只可能已知的甲基化位点进行分析，存在假阴性；而Pyrosequencin通过甲基化PCR扩增进行产物测序，可对50bp左右的甲基化位点进行分析[11]。本研究发现COBRA检测肝癌/癌旁组织和患者血样/正常人血样的LINE-1去甲基化水平存在中度的异质性差异，而Barchitta等研究显示存在高度异质性；Pyrosequencin检测肝癌/癌旁组织和患者血样/正常人血样的LINE-1去甲基化水平存在显著差异性，和Barchitta等研究类似。因此，对不同类型肝癌样本的LINE-1甲基化分析时，使用COBRA法检测均一性较好，使用Pyrosequencin法检测应选用健康人群对照进行分析。
总之，通过本研究提示了不同来源肝癌的LINE-1甲基化分析可能需要不同的检测方法。建议在对肝癌的标志物LINE-1甲基化分析时，应当结合标本类型选用不同的检测方法。
参考文献：
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[10]张海燕，赵洪斌，田亚平等. DNA甲基化检测技术与应用前景[J].标记免疫分析与临床. 2013，20（5）：348-351.
论文作者:侯志伟,李文丽,罗慧旗,范舒舒
论文发表刊物:《中国误诊学杂志》2018年7月22期
论文发表时间:2018/9/11
标签：肝癌论文; 甲基化论文; 样本论文; 组织论文; 血样论文; 异质论文; 水平论文; 《中国误诊学杂志》2018年7月22期论文;