1.济南市食品药品检验检测中心 250101；2.解放军第八十八医院 271000
摘要：目的：对三株牌歧特生冲剂进行小鼠精子畸形试验，以测定其是否具有遗传毒性。方法：参照《保健食品检验与评价技术规范》（2003年版）中的试验方法。结果：其一，样品剂量组与隐性对照组相比，无统计学意义，判为阴性；其二，样品剂量组与阴性对照组相比，精子畸形率至少为阴性对照组的倍量或经统计有显著意义，并有剂量反应关系，判为阳性；其三，样品剂量组与阴性对照组相比，有统计学意义，但无剂量反应关系，重复试验，结果能重复者判为阳性，否则为阴性。结论：本试验条件下，受试样品剂量组的精子畸形率与阴性对照组（Veh）比较无显著性差异（P>0.05），无剂量反应关系，表明三株牌歧特生冲剂对小鼠精子的精子畸形率未产生明显影响。
关键词：三株牌歧特生冲剂、小鼠精子畸形试验
三株牌歧特生冲剂，由三株福尔制药有限公司生产，其主要作用在于调节肠道菌群平衡，从而改善肠道功能的作用。
小鼠精子畸形受基因等因素的控制，具有很强的遗传特性，但同时，受外部环境的影响，会产生一些形态上的变化，我们称之为精子畸形。小鼠精子畸形试验可检测外部因子对精子的生成和发育的影响，是遗传毒理学评价的主要指标之一[1]。
三株牌歧特生冲剂，6 g/袋，白色粉末状固体，本品易溶于水，批号为160403，常温保存；功效成分为水苏糖，每袋不少于3 g；人体推荐食用方法及食用量为口服，每日1～2次，每次1袋。溶媒为灭菌蒸馏水。
1实验动物及饲养环境
小鼠，品系：KM，雄性，体重30~35 g，25只，来源：北京维通利华实验动物技术有限公司，经检疫观察4 d后使用。饲养环境：屏障系统，5只/笼（同性别、同剂量组），喂食SPF鼠料，自由饮水。温度24.7～26.0 ℃，相对湿度50～60 %，人工光照，明暗12 h/天。
SPF大小鼠生长维持饲料，来源：北京华阜康生物科技股份有限公司。
期刊文章分类查询,尽在期刊图书馆实验动物饮用水为中心提供纯化水，高压蒸汽灭菌。饲养笼种类：PP聚丙烯鼠盒，底铺高压蒸汽灭菌的玉米芯垫料。
2主要仪器和试剂
电子天平、PL-303型电子精密天平、BX51型生物显微镜（日本、OLYMPUS）等，环磷酰胺，来源：SIGMA公司；甲醇，来源：国药集团化学试剂有限公司。
伊红，来源：天津市大茂化学试剂厂。
3方法
试验设样品低（L）、中（M）、高（H）三个剂量组、阴性对照组（Veh）和阳性对照组（Y），每组雄性小鼠5只。本品急性毒性试验未求出LD50，按照高剂量组选择的次序，首选10 g/kg BW，按等比设中、低剂量组，剂量分别为5 g/kg BW、2.5 g/kg BW。
称取样品5 g，加蒸馏水至10 ml，制成0.5 g/ml的高剂量样品溶液，中、低剂量样品溶液由高剂量样品溶液稀释而成。阳性对照组给予环磷酰胺（以蒸馏水配制成2 mg/ml的溶液），剂量为40 mg/kg BW。阴性对照组给予灭菌蒸馏水。
（1）将25只动物按体重采用随机分组的方法分为5组，每组5只。各组小鼠均经口灌胃给予样品，阳性对照组灌胃给予环磷酰胺，灌胃体积均为20 ml/kg，连续给予5 d，于灌胃首次、之后每7 d称一次体重。所有动物于首次给予受试物35 d后颈椎脱臼处死动物，迅速解剖取出两侧附睾尾，放入1 ml生理盐水的小管中，用眼科剪将附睾尾纵向剪1~2次，静置5 min，轻轻摇动，用四层擦镜纸过滤，吸滤液进行精子涂片，平放玻片，自然干燥后用甲醇固定10 min，最后用2 %伊红染色1 h，再用水轻冲，干燥后存放待查。
（2）阅片：在低倍镜下找到背景清晰、精子重叠少的部位，用高倍镜顺序检查精子状态，计数体型完整精子。精子有头无尾、轮廓不清或头部与其他精子或碎片重叠，或明显人为剪碎者均不计算，每只动物检查1000个精子。观察精子是否有畸形以及畸形的种类。畸形的类型可分为无钩、香蕉型、胖头、无定形、尾折叠、双头、双尾等。
4试验数据统计
汇总受试物每个剂量组所有小鼠的7种精子畸形类型和数量，计算出精子畸形率（%），然后分别与阴性对照组进行比较，用Wilcoson秩和检验进行统计学分析。
以?x ? s表示动物体重，SPSS18.0软件进行统计学分析。
5结果
5.1结果判定依据：其一，样品剂量组与隐性对照组相比，无统计学意义，判为阴性。其二，样品剂量组与阴性对照组相比，精子畸形率至少为阴性对照组的倍量或经统计有显著意义，并有剂量反应关系，判为阳性。其三，样品剂量组与阴性对照组相比，有统计学意义，但无剂量反应关系，重复试验，结果能重复者判为阳性，否则为阴性。
5.2结果
试验期间，所有组别动物症状表现正常，未见明显由于给予样品引起的异常症状，未见动物异常死亡。
各剂量组体重与Veh组比较均无显著差异（P>0.05）。
Y组精子畸形率与Veh组比较有明显差异（P＜0.05），其余各组与Veh组比较未见明显差异（P>0.05）。
6 讨论
本试验条件下，受试样品剂量组的精子畸形率与阴性对照组（Veh）比较无显著性差异（P>0.05），无剂量反应关系，表明三株牌歧特生冲剂对小鼠精子的精子畸形率未产生明显影响，试验结果为阴性。
参考文献：
[1]小鼠精子畸形试验，陈似兰、龚幼菊、王茵等，浙江省医学科学院学报，1993.12（16）：24-25
论文作者:郑鹏1,任晓伟1,吴传亮2
论文发表刊物:《健康世界》2017年20期
论文发表时间:2017/11/30
标签：精子论文; 剂量论文; 阴性论文; 畸形论文; 小鼠论文; 样品论文; 对照组论文; 《健康世界》2017年20期论文;