（湖北中医药高等专科学校；湖北荆州434022）
【摘要】目的 对microRNA-375对2型糖尿病相关基因的调控作用进行研究分析，为今后的临床工作提供有价值的参考依据。方法 选择胰岛β细胞MIN6细胞系作为研究对象，分别用含有葡萄糖浓度水平为11.1mmol/L、25mmol/L的培养基对MIN6细胞进行培养，分别定义为正常组和高糖组，48小时后，经光学显微镜对MIN6细胞形态进行观察。构建miR-375基因过表达载体、特异性抑制载体，分成空白对照组、阴性对照组、Mimics-Negative Control、miR-375 mimics、Inhinitor-Negative Control、miR-375 inhibitor,均分别转染到不同糖浓度培养的MIN6细胞中，对细胞中miR-375的表达情况进行检测分析。结果 特异性miR-375过表达、抑制物载体转染到不同葡萄糖浓度组的胰岛β细胞系MIN6细胞中，检测结果证实，miR-375在正常糖浓度过表达组、高糖过表达组中的表达水平均发生显著升高（P＜0.05），正常糖浓度过表达组miR-375表达较高糖过表达组发生显著升高（P＜0.05），正常糖浓度抑制组、高糖抑制组中miR-375表达水平比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。结论 在高糖胰岛β细胞MIN6细胞株中miR-375表达水平下调，会对2型糖尿病的发病产生影响，值得关注。
【关键词】 2型糖尿病 胰岛素抵抗 microRNA-375 靶基因调控
研究与实践证实，2型糖尿病属于胰岛素绝对或者是相对不足造成的慢性内分泌性疾病[1]。发病机制研究显示，骨骼肌、脂肪、肝脏胰岛素抵抗，葡萄糖诱导的胰岛β细胞胰岛素分泌功能缺陷等为主要发病原因。microRNA属于一类非编码小RNA，为19-24个核苷酸组成，对mRNA的表达或者是蛋白质合成进行调控，在多种疾病的发病中具有重要作用[2]。本次研究中，以对microRNA-375对2型糖尿病相关基因的调控作用进行研究分析为目的，展开了以下研究。
1 材料与方法
1.1实验材料
实验中所用细胞株为小鼠胰岛β细胞株MIN6细胞，购自上海奥陆生物科技有限公司。miR-375 micmics和miR-375 inhibitor 购自广州锐博生物科技有限公司。试剂高糖DMEM、低糖DMEM、RPMI Medium l640、Opti-MEM、胎牛血清、青链霉素购自GIBCO，胰蛋白酶、DMSO购自碧云天公司，miR-375 forword primer、GAPDHforword primer、GAPDHreverse primer、靶基因forword primer、靶基因reverse primer、Lipofectamine3000 等购自天根公司。
1.2实验方法
选择胰岛β细胞MIN6细胞系作为研究对象，分别用含有葡萄糖浓度水平为11.1mmol/L、25mmol/L的培养基对MIN6细胞进行培养，分别定义为正常组和高糖组，48小时后，经光学显微镜对MIN6细胞形态进行观察。构建miR-375基因过表达载体、特异性抑制载体，经lipo3000进行分组，分别为：空白对照组、阴性对照组、Mimics-Negative Control、miR-375 mimics、Inhinitor-Negative Control、miR-375 inhibitor,均分别转染到不同糖浓度培养的MIN6细胞中，对细胞中miR-375的表达情况进行分析。
1.3数据处理
采取SPSS20.0统计学软件进行数据处理，计量资料经（±s）形式表示，统计分析采取t检查，计数资料统计分析采取Χ2检验，P＜0.05时，视为差异存在统计学意义。
2 结果
正常糖浓度mimics组和高糖mimics组相对于自身的mimics对照，miR-375的表达量均呈现明显升高(P＜0.05)；正常糖浓度inhibitor组和高糖inhibitor组相对于自身的inhibitor对照，miR-375的表达水均均无明显变化(P＞0.05)，详见下图。
正常组与高糖组比较，正常糖浓度mimic组中miR-375的表达水平显著高于高糖mimic组(P＜0.05)；正常糖浓度inhibitor组和高糖inhibitor组中miR-375的表达水平比较差异无统计学意义（P＞0.05）。详见下图。
3 讨论
研究与实践证实，miR-375属于内源性肿瘤抑制基因，其会对细胞生存能力产生抑制作用，对细胞迁移、入侵造成损害。目前的研究水平显示miR-375已经涉及到多种不同肿瘤，包括胃癌、肺癌、乳腺癌、前列腺癌、肝癌等[3]。曾有文献报道，在miR-375的诸多功能当中，其对2型糖尿病的表达调控作用最为突出。胰岛中miR-375表达丰富，在β细胞中具有多种功能，包括胰岛转录、分泌，β细胞增殖与再生[4]。因2型糖尿病的发病机制十分复杂，miR-375可能利用对胰岛β细胞产生作用，影响胰岛素生物合成分泌，胰岛素抵抗等诸多途径，对2型糖尿病的发生、发展产生重要作用[5]。
本次研究中，以对microRNA-375对2型糖尿病相关基因的调控作用进行研究分析为目的，展开了以上研究，结果发现，在高糖胰岛β细胞MIN6细胞株中miR-375表达水平下调，会对2型糖尿病的发病产生影响，值得关注。
参考文献
[1] 中华医学会糖尿病学分会.中国2型糖尿病防治指南(2014年版)[J].中华糖尿病杂志,2018,10(1):4-67．
[2] 王彦珺,涂晓文.miRNA 在糖尿病肾病中的临床应用进展[J].中国中西医结合肾病杂志,2014,15(2):180-181
[3] 刘玲伶,刘丽荣,王圆圆,等.糖尿病大鼠肾组织中 miR-21和SnoN表达的变化[J].基础医学与临床,2017,37(1):32-37
[4] 冯罡,李军,王晓丽,等.糖尿病肾病患者血清 microRNA-21含量及其与氧化应激指标的相关性[J].中国现代医学杂志,2017,27(1):60-63.
[5] 陈桐,范秋灵,崔靖彬,等.糖尿病和糖尿病肾病患者血清 lncRNA GAS5/miR-21的诊断效能[J].中华肾脏病杂志,2017,33(12):906-913.
论文作者:覃宁玲
论文发表刊物:《医师在线》2019年6月12期
论文发表时间:2019/9/23
标签：细胞论文; 胰岛论文; 浓度论文; 糖尿病论文; 基因论文; 胰岛素论文; 水平论文; 《医师在线》2019年6月12期论文;