1.邯郸市第一医院056000 2.永年县中医院057150
摘要：目的 观察替罗非班对急性冠脉综合征(ACS)患者过氧化物酶体增生激活型受体γ( PPAR-γ) 与CD40/CD40L通路表达的影响。方法 选择ACS患者120例,随机分为对照组和不同时间段替罗非班组, PCI术后12h、24h、36h分别抽取病人血液，应用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测PPARγ与CD40、CD40LmRNA表达。结果 不同时间替罗非班组与对照组相比, CD40与CD40LmRNA水平明显降低(P<0.05)，并呈时间依赖性；而常规治疗组PPARγmRNA表达量处于低水平状态，应用替罗非班后12h、24h、36h后表达量上升，其作用亦呈时间依赖性。结论PPAR-γ是CD40-CD40L信号通路的上游调节机制，替罗非班能上调PPAR-γmRNA表达, 能抑制CD40/CD40L信号通路的激活,从而具有抑制炎症、稳定粥样斑块作用。
关键词：替罗非班；过氧化物酶体增生激活型受体γ；CD40/CD40L通路；急性冠状综合征
中图分类号： R541.4 文献标识码：A
1 对象和方法
1．1 对象：收集2014年1月至2015年5月本院心内科ACS患者120例,男60例,女60例,年龄在42～75岁。其中1) 有心电图和/或酶谱改变的急性心肌梗死(AMI) 64例( 男35例, 女29例, 平均65.6±10.3 岁；2) 不稳定性心绞痛(UAP) 56 例( 男22 例,女34例, 平均61.2±8.5 岁) , 48小时内劳力性心绞痛加剧并出现静息状态下心绞痛。所有研究对象均无恶性肿瘤、肝脏病变、肾功能不全、血液性疾病、感染性疾病和自身免疫性疾病, 近半年内无重大外伤、手术史。将上述患者随机分组,每组40例,各组年龄分别为( 55.1±8.9)岁vs (52.5 ±9.8)岁,无显著差异。全部病例行常规治疗,包括抗血小板、抗凝、扩冠治疗；常规治疗未应用替罗非班,治疗组加用替罗非班，替罗非班用量根据公斤体重计算,( 起始推注剂量为10μg/kg，在3分钟内推注完毕，而后以0.15μg/kg/min的速率维持滴注,维持量滴注持续36小时(欣维宁,武汉远大制药) 。
1．2 取材及方法：取材：常规治疗组次日清晨抽血，应用替罗非班组12h、24h、36h,分别抽取病人血液标本3ml，立即注入预先加有无菌3.8%柠檬酸钠0.2ml 的抗凝管中备用。方法：（1 分离血单一核细胞: 按文献进行。（2 按Trizol试剂盒说明书提取总RNA，将RNA在-700C保存待测。（3 然后进行逆转录-聚合酶链反应，紫外凝胶图像分析仪进行数据分析,以目的基因mRNA扩增后产物的光密度值与内参照GAPDHmRNA扩增后产物光密度值的比值作为mRNA表达的相对值。（4 PPARγ、CD40、CD40L及内参GADPH的引物序列见表1。
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表 1 引物序列
引物引物序列目的片段（bP）
GADPH上游5’- GTG GGG CGC CCC AGG CAC CA- 3’450bP
下游5’- CTC CTT AAT GTC ACG CAC GAT TC- 3’
CD40上游5’-TGC CAG CCA GGA CAG AAA CT-3’420bP
下游5’-GGG ACC ACA GAC AAC ATC AG-3’
CD40L上游5’-ACA TAC AAC CAA ACT TCT CCC-3’399 bP
下游5’-AGA TGT TGT TTT ACT GCT GGC-3
PPARγ上游: 5’- TCT CTC CGT AAT GGA AGA CC- 3’474bP
下游: 5’- GCA TTA TGA GAC ATC CCC- 3’
1. 3统计学处理
所有数据以X±S表示，数据处理采用SPSS13.0统计软件进行单因素方差分析，多重比较采用SNK法，P<0.05为有统计学意义。
2 结果
替罗非班对CD40、CD40L和PPARγmRNA表达的影响
替罗非班同时抑制CD40与CD40L的表达, 其作用亦呈时间依赖性。与常规治疗相比,应用替罗非班后12h、24h、36h CD40的表达降低30 %、 68 %和74 %； CD40L的表达降低26 %、 64%和71%，有统计学意义(P <0.05)；常规治疗组PPARγmRNA表达量处于低水平状态，应用替罗非班后12h、24h、36h后表达量上升，与常规治疗相比,表达上升34%、63%和68%，其作用亦呈时间依赖性。
表2 替罗非班对CD40、CD40L和PPARγmRNA表达的影响
分组CD40mRNA相对值CD40LmRNA相对值PPARγmRNA相对值
常规治疗组1.546±0.006 *1.362±0.017*0.489±0.06*
替罗非班12h组0.978±0.071*△1.018±0.057*△0.738±0.04△*
替罗非班24h组0.504±0.023△0.502±0.022△1.302±0.01△
替罗非班36h组0.406±0.007△0.402±0.009△1.489±0.01△
注： △与常规治疗相比P<0.05；*与替罗非班36h比较P<0.05
3 讨论
越来越多的研究提示AS是一个血管受损伤后的炎症反应过程，血管壁的慢性炎症是AS的特征。CD40/CD4OL是一对互补跨膜糖蛋白，是免疫及炎症反应中重要的信号转导系统。近来的研究发现CD40/CD40L相互作用不只局限于免疫炎症细胞的信号传递,还参与斑块内主要炎症细胞反应的调节,对斑块的不稳定性有着重要作用。CD40与CD40L相结合产生一系列反应,包括促进AS内平滑肌细胞、细胞因子等，这些物质参与了AS的发生与发展,促进了ACS 的发生。因此有人认为CD40/CD4OL通路可能是动脉粥样硬化发生发展过程中免疫炎症调节的上层机制。本研究发现替非罗班可明显抑制CD40与CD40L表达，其作用有时间依赖性, 这与已有的报道结果相吻合。与对照组相比，应用替罗非班后12h、24h、36h CD40的表达降低30 %、 68 %和74 %； CD40L的表达降低26 %、 64%和71%，有统计学意义(P <0.05)。通过实验还发现，替罗非班作用后24h与36h后炎症因子sCD40L与MMP-9表达下降最明显，两组比较无统计学意义(P > 0.05)。这表明，替罗非班抑制炎症因子活性、稳定粥样斑块作用的理想时间点在24小时至36小时左右。
过氧化酶增殖物激活受体( PPAR-γ)是一种配体激活的核受体转录因子, 它和视黄醛组成的异二聚体作用于靶基因增强子调节元件, 促进相应的基因转录。PPAR-γ受体激动剂具有多种生理效应。在本研究中常规治疗组PPARγmRNA表达量处于低水平状态，应用替罗非班后12h、24h、36h后表达量上升，与常规治疗相比,表达上升达34%、63%和68%，其作用亦呈时间依赖性，提示我们替罗非班可作为PPARγ受体的激动剂，其表达可降低患者血浆炎症因子CD40、CD40L的活化，因此在心血管病的治疗中发挥重要作用。吴歆华等发现PPARγ激动剂吡格列酮降低动脉粥样硬化大鼠巨噬细胞CD40及CD40L表达。还有研究明另一种PPAR-γ激动剂罗格列酮能降低2 型糖尿病和冠脉疾病患者血清sCD40L的浓度。这些研究均提示PPAR-γ激动剂能抑制CD40/CD40L炎症信号通路。因此我们推测PPAR-γ受体是CD40-CD40L信号通路的上游调节机制，替罗非班能上调PPAR-γmRNA表达, 因此能抑制CD40/CD40L信号通路的激活,从而阻断与炎症有关的血管损伤, 具有抑制炎症、稳定粥样斑块作用，这为我们临床上治疗急性冠脉综合症提供了新的思路。
参考文献
[1]沈关心,周汝麟主编.现代免疫学实验技术.湖北科学技术出社,1998
[2]张利峰,杨志明，柴婵娟。阿托伐他汀对THP-1源性巨噬细胞CD40和MMP-9的抑制作用。中西医结合心脑血管病杂志 2009,01 (7): 66-68
[3]吴歆华,吴宗贵,张华.辛伐他汀和吡格列酮对动脉粥样硬化大鼠CD40 和CD40L表达的影响.上海医学, 2005,28(5):281- 283
论文作者:朱国英1 , 张利峰1*，王献忠1，申子路1， 杨淑英2
论文发表刊物:《解放军预防医学杂志》2015年第12期供稿
论文发表时间:2016/2/24
标签：炎症论文; 受体论文; 常规论文; 激动剂论文; 作用论文; 依赖性论文; 班后论文; 《解放军预防医学杂志》2015年第12期供稿论文;