洪江市疾病预防控制中心检验科 湖南洪江市 418116
摘要：目的 总结性探讨分析快速检测纸片应用于食品微生物检测中的实效性。方法 将快速检测纸片和传统的检测方法进行对照检测。结果 快速检测纸片方法检测结果的敏感性和准确度均较高。结论 快速检测纸片的方法具有敏感性高，准确度高，且轻便快速的优点，在未来的食品微生物检测中具有良好的前景。
关键词：快速检测纸片；微生物；实效性
在现代社会中，食品的安全问题受到的重视越来越多，微生物对食品造成的污染问题在社会上的关注度也相当高，在食品的销售、运输、储存、加工、生产等环节中均有污染微生物的可能，微生物的感染不仅可以导致食品的腐败变质，还可以引起食物中毒和食源性感染，尤其是近年来环境污染越来越严重以及生态平衡破坏程度的加深，使人类感染越来越多的致病菌种，因此，对食品中的微生物进行快速、准确的检测变得越来越重要[1]。
1 材料
1.1样品
糕点食品
1.2检测试剂
快速检验纸片由广东环凯微生物科技有限公司生产，Petrifilm测试片由美国3M公司发明。
2检测方法与结果
2.1以滤纸为载体的测试片
2.1.1菌落总数测试片法
筛选良好的滤纸，滤纸裁剪大小为4.0cm X 5.0cm。把灭菌的TTC改变为无菌的培养基后，把无菌滤纸放入无菌的培养基，滤纸的培养基吸附量要依照需要配制，干燥温度要适宜，分装于无菌的聚乙烯塑料袋中备用。TTC为一种氧化还原指示剂，可通过计算滤纸上红点的数量来计算细菌的数量。TTC的用量要适宜，使用时在纸片上加入1ml待测液，压平并在培养箱中37度下培养约17个小时，然后计数，将国标方法和快速试片法进行比对，两种测试方法的结果并无显著性差异[2]。
2.1.2大肠杆菌、大肠菌群纸片荧光法
该测试片的研制单位是上海医科大学预防医学研究所，其中的酶为细菌代谢所产生。通过对两种菌落产生的有关酶的活性进行检测，来进行计数，两种测试片可以对大肠杆菌和大肠菌群分别进行检测，培养温度均为37度，荧光波长为365nm，检测的最低量为0~4cfu/ml，此种方法的定量、定性结果和AOAC方法并无明显的差异[3]。
2.2以Petrifilm为载体的测试片
是由美国3M公司发明的一种水合物干膜，可再生，主要是用来计算菌落的数量，是由上下两层的膜构成的，下层的膜为聚乙烯材质，覆盖有培养基而且有网格，培养基中含有微生物生化和生长的试剂和营养，上层膜的材质为聚丙烯，培养基是通过凝胶剂附养在两层膜上，此种凝胶剂具有冷水可溶性，果阿胶、洋豆胶和黄原胶为常用的凝胶剂，生化试剂主要有抗生素和特异性的显色物质，通过调查许多实际样本试验得知Petrifilm测试片法和传统方法的差异并不具有统计学意义[4]。
2.2.1菌落总数测试片法
拿起覆盖的胶片，把样品悬液约1mL滴于纸片中央后，放下覆盖，采取压板轻轻的按压，使样品在培养基上均匀的覆盖。静置时间大概有lmin。把培养基中的凝胶固化。测试片的培养条件为37度恒温箱，48±3h培养后的红色菌落数则为细菌总数，此种方法也可用来测定乳酸菌[5]。
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2.2.2大肠杆菌、大肠菌群检测纸片
该测试片含有葡萄糖苷酸酶指示剂和改良的VRB培养基，大部分大肠杆菌可以产生能够和培养基中的指示剂发生反应的葡萄糖什酸酶，并产生围绕在大肠杆菌菌落的蓝色沉淀，表面覆盖的胶膜使发酵乳糖产生的气体保留，形成由气泡相连的深蓝色和蓝色菌落，大肠菌群菌落在测试片上生成酸，可以导致培养基改为暗红色，大肠菌群是红色菌落周围有气泡的菌落，因此，一次检测就可以检测出大肠菌群和大肠杆菌，大肠杆菌群为红色的带气泡的菌落，大肠杆菌为蓝色的带气泡的菌落[6]。
3 讨论
3.1滤纸和Petrifilm为载体的两种快速测试片检测方法的优点如下：①快速测试片测定样品可以极少，所用制试剂不用配制，所用器皿少，易于操作；易于消毒保存，运输方便，价格低，此外除纸片外没有其他废液废物，使实验后的工作量和对环境的污染减少，在野外、生产现场和实验室中均能使用。②快速测试片可以在取样时同时接种，使显示的细菌数更加准确，避免了因为接种时间的延长导致细菌数量的增多。③常规法的温度是特定的，而且需要的时间长，导致在很多食品企业和单位不能实施，试纸法能够缩短检测时间。微生物测试片的优势是能够对酵母、霉菌、大肠菌群计数、菌落总数进行分别检测，此外，快速纸片法和传统的检测方法有很好的相关性[7]。
3.2 但是由于国内生产和研发的试纸种类少，性能指标不足以达到检测的需要，且稳定性差，苛刻的保存条件，能够保存的时间短，且环境的适应能力差，灵敏度不高，不能达到痕量检测，特异性不好，在检测工作中有出现交叉反应的可能[8]。
3.3由于许多相继合成的高分子聚合物，开发优良的载体和更高效的显色物质十分重要，减少和解决Petrifilm和滤纸应用中出现的问题，可以将特意显色的物质和培养基粘附在薄膜上，主要利用的是一定粘度、高保水性、高吸水性的高分子聚合物，在未来的研究工作中试纸法的研究应该更加倾向于仪器、精准的定量方法、新型的显色剂和显色体系、多元的检测内容和形式、载体材料性能，使试纸的检测范围扩大，检测性能提高，使食品安全的微生物检测中快速试纸法的应用空间更加广阔。
综上所述，在未来的食品微生物检测中，测纸片会变得更准确、有效，有很广阔的前景。
参考文献：
[1]吕肖楠.大肠菌群快速检测方法的研究[D].哈尔滨，东北农业大学，2014
[2]王春华.食品安全微生物快速检测的探讨[J].现代面粉工业，2012（05）；23-24
[3]王峰，潘赢，王学涛等.食品微生物快速检测技术研究进展[J].中国微生态学杂志，2013，25（08）：990-992
[4]黄维雅.食品中菌落总数的国标法测定注意事项及快速检测技术[J].台湾农业探索，2012（03）：56-59
[5]K H A N M A，C O M B S C S，B RU N T E M，e t a l.P o s i t r o n e m i s s i o n t o m o g r a p h y s c a n n i n g i n t h e e v a l u a t i o n o f h e p a t o c e l l u l a r c a r c i n o m a[J].A n n N u c l M e d，2 0 0 9，1 4（2）：1 2 1- 1 2 6
[6]T a b i t C E，C h u n g W B，H a m b u r g N M，e t a l.E n d o t h e l i a l d y s f u n c t i o n i n d i a b e t e s m e l l i t u s：m o l e c u l a r m e c h a n i s m s a n d c l i n i c a l i m p l i c a t i o n s.R e v E n d o c r M e t a b D i s o r d，2 0 1 0，1 1（1）：6 1 - 7 4.
[7]程楠，何景，董凯等.试纸法在食品安全快速检测巾的研究进展[J].食品科学，2015，36（01）：256-261
[8]郝生宏.自制大肠菌群快速检测纸片的应用效果[J].安徽农业科学，2014，40（32）：15685-15696
论文作者:段美君
论文发表刊物:《健康世界》2015年24期
论文发表时间:2016/3/16
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