（湖南省浏阳市人民医院 410300）
摘要：目的 探讨p53和cyclin D1在甲状腺癌组织中的表达及与癌细胞分化的关系。方法 选取我院2016年1月～2017年12月临床诊断明确的30例甲状腺癌存档蜡块作为观察组，另选取同期收治并诊断明确的30例甲状腺瘤瘤旁正常甲状腺组织蜡块作为对照，两组均采用免疫组化分析法对其组织中p53和细胞周期蛋白D1（cyclin D1）表达水平进行检测。结果 30例甲状腺癌组织中的p53、cyclin D1阳性率均明显高于甲状腺瘤瘤旁正常甲状腺组织（P均<0.05）；p53和cyclin D1在不同病理类型甲状腺癌中均呈高水平表达，其中低分化和未分化癌中的p53和cyclin D1阳性表达率明显高于高分化癌（P均<0.05）；相关性分析显示，p53和cyclin D1在甲状腺癌中的表达呈明显正相关性（r=7.91，P<0.05）。结论 p53和cyclin D1在甲状腺癌中均呈高水平表达，且在分化程度较低和未分化的癌细胞中尤为突出，两项指标均可为临床甲状腺癌的分化及恶性程度判断、预后评估提供重要依据。
关键词：p53；cyclin D1；甲状腺癌；癌细胞分化
[Abstract] objective to investigate the expression of p53 and cyclin D1 in thyroid carcinoma and its relationship with cell differentiation.Methods select our hospital from January 2016 to December 2017，clinical diagnosis of clear 30 cases of thyroid cancer archive wax block as observation group and the other during the same period were selected and diagnosed clear of 30 cases of normal thyroid tissue adjacent to tumor of thyroid tumor wax block as a contrast，two groups are using immunohistochemical analysis of p53 in its organization and cell cycle protein D1（cyclin D1）expression level for testing.Results the positive rates of p53 and cyclin D1 in 30 patients with thyroid carcinoma were significantly higher than those of normal thyroid tissue beside thyroid tumor（all P <0.05）.Both p53 and cyclin D1 are highly expressed in different pathological types of thyroid carcinoma，and the positive expression rates of p53 and cyclin D1 in low-differentiated and undifferentiated carcinoma are significantly higher than those in high-differentiated carcinoma（all P <0.05）.Correlation analysis showed that the expression of p53 and cyclin D1 in thyroid carcinoma presented a significant positive correlation（r=7.91，P<0.05）.Conclusion both p53 and cyclin D1 are highly expressed in thyroid carcinoma and are particularly prominent in cancer cells with low degree of differentiation and non-differentiation.Both of these two indicators can provide important basis for the differentiation，malignancy judgment and prognosis evaluation of clinical thyroid carcinoma.
[Keywords] p53；Cyclin D1；Thyroid cancer；Differentiation of cancer cells
近年来随着我国老龄化人口数量和比例的增加，使得甲状腺癌的发病率呈现逐年上升趋势，这与我国居民饮食结构改变、营养比例摄取、生态环境变化以及检测手段更新等皆有相关性[1]。甲状腺癌的发病机制由于目前仍在探讨之中且具有较高的致死率，因此临床早期发现、早期诊断以及早期治疗是最为有效的治疗和干预手段[2]。随着分子生物学的发展和进步，本文试就p53和cyclin D1在甲状腺癌组织中的表达及与癌细胞分化的关系展开观察与研究，现报告如下：
1 资料与方法
1.1 一般资料
选取我院2016年1月～2017年12月临床诊断明确的30例甲状腺癌存档蜡块作为观察组，其WHO组织学病理分型：乳头状癌16例，滤泡癌7例，髓样癌4例，未分化癌3例。组内病例中男性5例，女性25例，其中年龄最小35岁，最大76岁，平均年龄（40.12±7.45）岁，所有病例术前均未接受过任何放、化疗治疗，其临床TNM分期：Ⅰ期13例，Ⅱ期10例，Ⅲ期4例，Ⅳ～Ⅴ期3例。另选取同期收治并诊断明确的30例甲状腺瘤瘤旁正常甲状腺组织蜡块作为对照，组内病例中男性7例，女性23例，平均年龄（39.87±7.40）岁。
1.2 方法
两组蜡片均采用石蜡切片机修整后做厚度为5?m的连续切片，摊片、捞片并60°烘干后进行免疫组化化学染色，即先将切片脱蜡水化，加5%正常兔血清封闭处理，20min后分别加兔抗人p53一抗、兔抗人cyclinD1一抗，于常规下置放至次日，PBST清洗后加羊抗兔IgG二抗于常温下孵育0.5h，再行PBST清洗，分别经显色、复染、脱水及透明、封片处理后于高倍光镜下进行摄片观察，分别检测两组标本组织中p53和细胞周期蛋白D1（cyclin D1）的表达情况，其中兔抗人p53抗体、兔抗人cyclinD1抗体均由美国EPITOMICS公司提供，以上检测均由同一组医师严格按照实验室规程及试剂操作说明操作完成。
1.3 判断标准
阳性表达标准[3]：以PBS代替一抗做空白对照，以正常血清代替一抗做阳性对照，以p53、cyclinD1定位于细胞浆且胞质被染成棕黄色或呈棕色颗粒状视为阳性。高倍镜下随机观察切片5个不同视野，记录阳性细胞数，以阳性细胞数＞50%为强阳性（＋＋＋），以阳性细胞数25%～50%为中等阳性（＋＋），以阳性细胞数＜25%为弱阳性（＋），以细胞未着色为阴性（－）。
1.4 统计学方法
采用SPSS19.0统计软件进行分析，n或%表示计数资料，进行x2检验；p53和cyclin D1在甲状腺癌中表达的相关性采用直线分析法进行分析，以P<0.05表示具有统计学意义。
2 结果
2.1 两组组织中p53、cyclin D1阳性表达情况比较
注：与乳头状癌比较，△P均<0.05。
2.3 p53和cyclin D1在甲状腺癌中表达的相关性
相关性分析显示，p53和cyclin D1在甲状腺癌中的表达呈明显正相关性（r=7.91，P<0.05）。
3讨论
本研究结果显示甲状腺癌组织中的p53、cyclin D1阳性率分别为60.00%、63.33%，均明显高于甲状腺瘤瘤旁正常甲状腺组织中的3.33%、3.33%；而且p53和cyclin D1在不同病理类型甲状腺癌中均呈高水平表达，其中低分化和未分化癌中的p53和cyclin D1阳性表达率明显高于高分化癌；这与李仕亮[4]以及张伟华[5]等的研究中也获得了证实。虽然野生p53是常见的抑癌基因，但一旦发生基因突变后却反而起到促进细胞增殖的效果；因此与临床常用的影响细胞周期调节因子的cyclin D1在临床各类恶性肿瘤的诊断中均获得了广泛的应用并获得了较高的诊断价值[6]。而且本研究在研究中还发现这两者标志物在甲状腺癌中的表达均呈现正相关，故临床上可以将这两者标志物视为诊断以及预后的重要指标。
综上所述，p53和cyclin D1在甲状腺癌中均呈高水平表达，且随着分化程度的增加，其水平表达越显著；因此临床对甲状腺癌的分化及恶性程度判断、预后评估过程中需要密切关注上述两个指标的变化情况。
参考文献
[1] 董芬，张彪，单广良.中国甲状腺癌的流行现状和影响因素[J].中国癌症杂志，2016，26（1）：47-52.
[2] 张园，姚瑶.江苏地区分化型甲状腺癌诊疗现状及对策[J].中国肿瘤外科杂志，2017，9（4）：211-214.
[3] 李铁志，石彦涛，刘瑞林，等.P16、P38、P53和CyclinD1在食道癌中表达的意义[J].中国病原生物学杂志，2016（1）：73-78.
[4] 李仕亮，孙纷纷，孙林庸，等.Cyclin D1、PTEN蛋白在甲状腺乳头状癌中的表达及临床意义[J].临床肿瘤学杂志，2016，21（11）：976-979.
[5] 张伟华，闫斌，刘可心.CK19、P53在甲状腺癌中的表达及其临床意义[J].中国实用医药，2017，12（1）：79-80.
[6] Solomon M C，Vidyasagar M S，Fernandes D，et al.The prognostic implication of the expression of EGFR，p53，cyclin D1，Bcl-2 and p16 in primary locally advanced oral squamous cell carcinoma cases：a tissue microarray study[J].Medical Oncology，2016，33（12）：138.
论文作者:李曼妮 陈大礼
论文发表刊物:《航空军医》2019年2期
论文发表时间:2019/5/14
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