倪萍1 阿曼古丽?牙生2 田慧3 贺恺4 李祥4 刘坤4 强鑫4 张春桃5（通讯作者）
（1新疆医科大学基础医学院形态中心 新疆 乌鲁木齐 830011）
（2新疆医科大学第一附属医院感染性疾病中心 新疆 乌鲁木齐 830011）
(3新疆医科大学临床医学2012—4班 新疆 乌鲁木齐 830011)
(4新疆医科大学麻醉2012—2班 新疆 乌鲁木齐 830011)
(5新疆医科大学基础医学院微生物学教研室 新疆 乌鲁木齐 830011)
【摘要】 目的：研究新疆4种维药没食子、石榴皮、玫瑰花、薰衣草对白色念珠菌的体外抑菌作用。方法：60%乙醇分别萃取四种维药，利用K-B纸片扩散法进行体外抑菌试验,试管倍比稀释法测定最低抑菌浓度（MIC）和最低杀菌浓度（MBC）。结果：四种维药醇提物中没食子、石榴皮、玫瑰花对白色念珠菌有明显的抑菌作用，最低抑菌浓度（MIC）分别为15.6mg/ml，62.5mg/ml，62.5mg/ml，最低杀菌浓度（MBC）分别为31.2mg/ml、125mg/ml、125mg/ml。结论：没食子醇提物的抑菌浓度最低，抑菌效果最好，石榴皮和玫瑰花醇提物次之，薰衣草醇提物对白色念珠菌无明显抑菌作用。
【关键词】 维药；白色念珠菌；最低抑菌浓度；最低杀菌浓度抑菌
【中图分类号】R242 【文献标识码】B 【文章编号】2095-1752（2016）04-0333-02
The bacteriostasis research of four uygur troditional drugs to candida albicans in vitro
【Abstract】Objective To study the bacteriostasis of the four uygur troditional drugs in xinjiang: gallnut, pomegranate peel, roses, lavender to candida albicans in vitro.Method Gallnut, pomegranate peel, roses and lavender were extracted by 60% alcohol, respectively. Antibacterial experiment was performed using the K-B paper diffusion method in vitro. The minimum inhibitory concentration (MIC) and minimum bactericidal concentration (MBC) were detected by doubling dilution method.Results Gallnut, pomegranate peel, roses had obvious bacteriostasis and their minimal inhibitory concentration (MIC) were 15.6 mg/ml, 62.5 mg/ml, 62.5 mg/ml, minimum bactericidal concentration (MBC) were 31.2 mg/ml, 125 mg/ml, 125 mg/ml, respectively. Conclusion Gallnut, pomegranate peel and roses have different degrees of bacteriostasis to candida albicans. The best one of bacteriostasis is gallnut. Lavender has no obvious bacteriostasis.
【Key words】Uygur troditional drug; Candida albicans; Minimal inhibitory concentration; MIC; Minimum bactericidal concentration;MBC
白色念珠菌是存在于人体腔道中的正常菌群，也是临床重要的条件致病性真菌，在免疫力低下者(如艾滋病患者、肿瘤患者、结核患者等)可引起浅表性或深部的念珠菌感染，重者引起系统性感染，危及生命。目前临床广泛使用的抗真菌药物多为西药，存在肝肾毒性大、真菌多耐药等缺点[1]。因此，寻找毒性小、药效强的抗真菌药成为当前治疗真菌感染性疾病的重中之重。维吾尔医药在新疆已有几千年的应用历史，其药材来源广泛，易于获取，部分维药具有良好的抗真菌特性。本研究选取4种新疆常用的抗真菌维药没食子、石榴皮、玫瑰花、薰衣草，通过体外抑菌试验对比观察其对白色念珠菌的抑菌作用，为有效治疗念珠菌病提供理论依据。
1.实验材料
1.1 菌株
白色念珠菌标准菌株（由新疆医科大学形态中心提供）和白色念珠菌临床菌株（由新疆医科大学第一附属医院提供）
1.2 实验药材
没食子、石榴皮、玫瑰花、薰衣草（新疆医科大学第一附属医院药房购买）
1.3 培养基
沙氏琼脂培养基、克玛嘉显色培养基、RPMI-1640液体培养基。
2.实验方法
本实验首先采用K-B纸片扩散法进行药敏实验，初步了解白色念珠菌对4种维药的敏感性，然后采用试管倍比稀释法定量检测4种维药对白色念珠菌的最低抑菌浓度(minimal inhibitory concentration，MIC)和最低杀菌浓度(minimum bactericidal concentration，MBC)。
2.1 维药药液的配制
分别称取4种已粉碎维药30g，以60%乙醇为溶剂，依照体积比1：10进行浸泡24小时，利用旋转蒸发仪40℃以下回流浓缩成30ml药液，最终浓度为1g/ml，作为药液备用。
2.2 药敏纸片的制备
用打孔器将洁净滤纸制成直径为5mm的圆片，经高压蒸汽灭菌后，分别置于4种药液中浸泡12h后取出阴干备用。
2.3 菌液的制备
源于临床的白色念珠菌鉴定后接种于沙氏培养基上，37℃培养24～48小时，选取直径2～3mm独立菌落混悬于0.9%生理盐水中，用散射光细菌浊度仪，调整其浓度为 0.5个麦氏浓度备用。用RPMI-1640培养液稀释菌液至浓度为1～5×105CFU/ml，作为基础菌液用于药敏实验，再稀释成1～5×104CFU/ml用于测定MIC和MBC。
2.4 抑菌活性测定—K-B纸片扩散法
将沙氏固体琼脂培养基溶化后，倾注于9cm培养皿上，每个培养皿15mL，待冷凝后，用移液枪加入菌悬液0.2mL（浓度为1～5×105CFU/ml），菌悬液于平板中央，用无菌L棒均匀涂布。将药敏纸片贴于含菌培养基上，每皿放置4片，各纸片间的距离均等，每一样品重复3次；同时用浸有溶剂的滤纸片做阴性对照。将培养皿置于35℃恒温培养箱中18小时，取出观察，用卡尺测量抑菌圈的直径。根据药理学试验方法抑菌圈直径小于10mm的为抗药，等于10mm的为轻度敏感，11～15mm为中度敏感，大于16mm的为高度敏感[2-3]。
2.5 统计学处理
本研究资料均采用SPSS11.0软件处理，检验均以P<0.05有统计学意义。
2.6 MIC和MBC值的测定
本实验采用对倍试管稀释法进行MIC和MBC的测定。取32支无菌加塞小试管，分为4组（对照组、实验组石榴皮、没食子、玫瑰花），每组8支，并分别标号1～8，在实验组组的2、3号试管中加入0.5ml中药提取液，在3至7号试管中加入0.5mlRPMI-1640液体培养基，利用微量加样器从3号试管至7号试管进行对倍稀释，再将7号试管中液体弃去0.5ml，在1号试管中加入RPMI-1640培养基1.5ml，2至7号试管中加入1.0ml，8号试管中加入2.0ml。分别在实验组的1～7号试管中加入菌液0.5ml，对照组则加入0.5mlRPMI-1640液体培养基，此时2～7号试管中药液浓度分别为：250mg/ml、125mg/ml、62.5mg/ml、31.2mg/ml、15.6mg/ml、7.8mg/ml。1号为阳性对照管，8号为阴性对照管。置于恒温培养箱中培养18小时。在黑色背景下肉眼观察，阴性对照孔溶液应清晰透亮，阳性对照孔均匀浑浊、沉淀或表面形成菌膜生长良好，此时以溶液清晰透亮的最低浓度管中的药物浓度为MIC。经35℃培养18小时用活菌计数法检查沙氏琼脂平板上的菌落，平均数＜5个的最小药物浓度即为此药的MBC[4]。
3.实验结果
3.1 K-B纸片扩散法测试
四种维药中的3种均表现出一定的抑菌作用，其中石榴皮对白色念珠菌抑菌圈＞16mm，高度敏感；没食子和玫瑰花抑菌圈在11～15mm之间，中度敏感；薰衣草无明显的抑菌作用。（如表1）
表1 四种维药对白色念珠菌的抑菌圈直径（x-±s）mm
注：“-”表示基本无抑菌作用（抑菌圈为0 mm），以上样品均平行测定3次。
4.讨论
近年来，维药受到国内外学者的广泛关注，开发和研制维吾尔医药，已成为国内外学者研究的一个重点。本研究所用的的四种单味维药均有不同程度的杀菌抑菌作用，但可能受药液提取方法、体外抑菌实验的影响，与文献所述的MIC值不完全相同。薰衣草和玫瑰花含大量挥发油，其抗菌活性与挥发油有关，可从植物精油方面探寻其抗真菌特性。石榴皮和没食子在本研究中展现出对白色念珠菌良好的杀菌特性，为其临床应用治疗念珠菌病提供了理论依据。
【参考文献】
[1]吴亚，范世英，魏宏莲等.加味玉屏风散及单味中药对假丝酵母菌的体外抑菌作用[J].安徽医药，2015，19（2）：374-376.
[2]左国营，韩峻，余巍等.47种中草药提取物的体外抗菌活性筛选研究[J].中国药房，2006(10) : 798.
[3]周邦靖.常用中药的抗菌作用及其测定方法[M].重庆: 科学技术出版社重庆社，1987:1-356.
[4]M100-S17.Performance standands for antinicrobial susceptibility testing[S].Wayne:Clinical Laboratory Standards Insitiyue，2007.
基金项目：新疆医科大学大学生创新性实验计划（NO.CX2014020）
论文作者:倪萍1,阿曼古丽?牙生2,田慧3,贺恺4,李祥4,
论文发表刊物:《医药前沿》2016年2月第4期
论文发表时间:2016/5/21
标签：新疆论文; 浓度论文; 试管论文; 培养基论文; 抑菌论文; 抑菌作用论文; 念珠菌论文; 《医药前沿》2016年2月第4期论文;