【关键词】双靶点突变蛋白；耐药肝癌细胞；体外增殖抑制实验
原发性肝癌是癌症相关死亡率占第二位的恶性肿瘤，我国每年肝癌新发病例及死亡病例约占全球总数的一半[1]。而肝脏肿瘤耐药机制复杂，涉及药物代谢和运输的改变、药物靶基因的突变扩增或药物靶标再激活、替代途径的过度活化、肿瘤微环境相互作用、DNA 修复能力的改变、基因重排导致细胞凋亡受损和自噬、表观遗传学修饰、肿瘤干细胞的存在等[2]。因此本文通过体外耐药肝癌细胞增殖抑制实验，为寻找肝癌新的治疗靶点提供理论依据。
1 材料与方法
1.1 主要制剂
①CCK-8试剂盒。②成都华创生物科技开发有限公司应用组合生物学方法获得的Mur5S4TR蛋白制品。③SK-HeP-1、HePG2、PLC/PRE/5、HeP 3B、QGY-7701、HCCC-9810、RBE、Bel-7402、Li-7、SMMC-7721、HuH6、HuH7共12种耐药肝癌细胞侏。
1.2 体外细胞培养及增殖抑制率
①收集对数生长期细胞并计数，用完全培养基重新悬浮细胞。细胞在37 ℃，100 %相对湿度，5 % CO2培养箱中孵育24小时。②在酶标仪上测定450 nm波长处的吸光度，以650 nm 处吸光度作为参比，计算抑制率。
2．实验结果
2.1 对每种耐药肝癌细胞进行体外增殖抑制实验，显示双靶点突变蛋白Mur5S4TR对12种肝癌细胞侏体外增殖抑制率呈正态分布，增殖抑制结果均表现出较好的诱导凋亡效果(图一)。
3．讨论
肿瘤多药耐药( multidrug resistance，MDＲ) 是指一种药物作用于肿瘤使之产生耐药性后，该肿瘤对未接触过、结构无关、机制各异的多种抗肿瘤药也具有交叉耐药的现象，是肿瘤耐药的主要原因[3］。TRAIL与Smac联合治疗肝癌主要通过两种方式来实现。第一种方式采用小分子Smac结构模拟物与TRAIL单药联合应用。文献发现，单用小分子模拟物SM-164时仅有微弱的诱导肿瘤细胞凋亡作用，但却能导致cIAP-1的完全降解。当SM-164与TRAIL和阿霉素联用时却能明显增强其对肝癌细胞的杀伤能力[4]。第二种方式采用肿瘤靶向病毒载体基因治疗策略。文献显示，后者联合基因治疗能明显增强TRAIL单独应用的疗效，在部分移植瘤模型上观察到肿瘤的完全清除[5]。
本研究采用成都华创生物科技开发有限公司应用组合生物学方法，在原已获得的TRAIL穿膜肽样突变体TRAIL-Mur5的基础上，将序列中的第7-10位氨基酸序列由脯氨酸-谷氨酰胺-精氨酸-异亮氨酸（即PQRV）突变为Smac蛋白N端的4肽丙氨酸-缬氨酸-脯氨酸-异亮氨酸序列（即AVPI）。Mur5S4TR针对的作用靶点明确，采用多靶点组合的作用方式，符合诱导肿瘤细胞凋亡药物设计最新思想，主要针对XIAP高表达的耐药性肝癌，在后续的体内实验中引入生物标记分子的检测和筛选理念，优选最适分子表型的肿瘤进行实验，可望大幅提高临床疗效。
【参考文献】
[1]Torre LA, Bray F, Siegel RL, et al. Global cancer statistics, 2012[J]. CA:A Cancer Journalfor Clinicians, 2015, 65(2): 87-108.
[2]46 Ramos P, Bentires-Alj M.Mechanism-based cancer therapy: resistance to therapy,therapy for resistance[J]. Oncogene, 2015, 34(28): 3617-3626.
[3] MAＲTIN F．Mechanisms of cancer: mutidrug resistance［J］．Drug Discov Today，2004，1(2) : 229－234．
[4]Zhang S, Li G, et al. Smac mimetic SM-164 potentiates APO2L/TRAIL- and
doxorubicin-mediated anticancer activity in human hepatocellular carcinoma cells. PLoS One. 2012;7(12):e51461.
[5]Wang S, Tan Y, Lei W, et al. Complete eradication of xenograft
hepatoma by oncolytic adenovirus ZD55 harboring TRAIL-IETD-Smac gene with broad antitumor effect. Human gene therapy. 2012;23(9): 992-1002.
论文作者:范明1
论文发表刊物:《科技新时代》2017年12期
论文发表时间:2018/1/29
标签：肝癌论文; 细胞论文; 肿瘤论文; 抑制论文; 体外论文; 突变论文; 蛋白论文; 《科技新时代》2017年12期论文;