【摘 要】目的 研究硫酸软骨素合用阿魏酸钠对兔膝骨关节炎的修复作用。方法 健康大白兔40只，随机分为四组。B～D组兔左膝通过关节注射木瓜蛋白酶制作为关节炎模型。造模2周后各组兔关节腔注射及灌胃相应药物或生理盐水，连续4周。4周后测定超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA），取各组兔关节软骨行肉眼、光镜观察并进行评分。结果 与B组比较，C、D组的兔膝关节软骨的磨损、退变、增生均减轻，C、D组的兔膝关节液及血浆中的SOD活性明显高于B组，MDA含量明显低于B组，Mankin’s评分明显低于B组，D组变化更明显（P＜0.05）。结论 硫酸软骨素联合应用阿魏酸钠的效果优于单独应用硫酸软骨素的效果。
【关键词】硫酸软骨素；阿魏酸钠；兔膝骨关节炎；丙二醛
膝骨关节炎（knee osteoarthritis KOA）是一种主要以软骨细胞和基质的退行性改变为表现的疾病。硫酸软骨素（chondroitin sulfate ChS）是软骨的正常成分，常从牛或猪的软骨中提取，在美国ChS常被用作改善KOA的膳食补充剂[1]。阿魏酸钠（sodium ferulate SF）是当归水溶液的主要单体成分阿魏酸的钠盐，具有抗氧化、清除自由基等多种生理功能。本研究旨在探讨ChS联合SF对兔KOA的修复作用，为进行临床试验提供动物实验资料。
1 材料和方法
1.1 材料
新西兰大白兔（华兰生物疫苗有限公司，SCXK（豫）2015-0001）；硫酸软骨素（中国索莱宝）；SF（中国索莱宝）；
1.2 模型制备与分组
选取健康雄性新西兰大白兔40只，随机分为空白对照组（A组）、模型对照组（B组）、ChS组（C组）、ChS＋SF组（D组）。4组兔用20g/L戊巴比妥钠麻醉，将配制好的20g/L木瓜酶水溶液通过关节腔注射将B～D组兔左膝建立膝关节炎模型，每只兔注射0.3ml。A组兔同法注射生理盐水0.3ml。
1.3 给药方法
造模2周后开始，C 组用灌胃法每天给予100mg/kg Chs，并且每周1次用生理盐水0.15ml进行关节腔注射；D 组除100mg/kg/天 ChS灌胃外，每周1次用2g/L SF 0.15ml进行关节腔注射，A～B 组每一天同一时间段给予等量蒸馏水灌胃及每周同一时间段进行生理盐水关节内注射，四组均连续进行4 周。
1.4.取材和处理
（1）SOD、MDA水平检测：采集兔耳缘静脉血3ml，肝素抗凝离心取血浆，处死后采取关节滑液0.3ml，测定SOD、MDA水平，严格按照试剂盒说明书进行操作。（2）膝关节腔肉眼观察：处死后逐层切开受试关节，肉眼观察关节腔和软骨表面。
期刊文章分类查询,尽在期刊图书馆（3）膝关节软骨光镜下观察：切下股骨内髁，完全脱钙后依次脱水、固定、透蜡、包埋，切成5μm的薄片，然后分别经苏木精－伊红（HE）和甲苯胺蓝染色。光镜下观察软骨组织结构、细胞数量、甲苯胺蓝染色和潮线完整性，并按 Mankin’s评分标准对其退变程度进行评分。
1.5.统计学处理
所有数据均采用SPSS 21.0软件进行统计学处理，统计结果以x±s表示，SOD、MDA水平、Mankin’s评分均采用单因素方差分析（One-way ANOVA），组间比较采用LSD（Bonferoni）检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1.SOD、MDA水平
A组血浆及关节液中的SOD活性明显高于B组，MDA含量明显低于B组（P＜0.05），表明造模成功。而C、D组血浆中的SOD活性均高于B组（P＜0.05），C、D组关节液中的SOD活性均高于B组（P＜0.05）；C、D组血浆中的MDA含量低于B组（P＜0.05），C、D组关节液中的MDA含量低于B组（P＜0.05），以D组更明显。
2.2关节腔肉眼观察
A组关节软骨表面正常，光滑，无裂痕、软骨缺失；B组关节软骨表面粗糙，磨损较重，有裂痕、部分软骨缺失；C组关节软骨表面欠平滑，部分区域有软骨缺失；D组关节软骨表面欠平滑，无明显的软骨缺失。C、D 组关节软骨退变程度、粗糙程度均明显低于B组，以D组更明显。
2.3.光镜观察
A组结构清晰，细胞排列规则，潮线完整，甲苯胺蓝染色均匀；B组结构紊乱，细胞减少，排列混乱，潮线模糊，甲苯胺蓝染色重度失染；C组结构紊乱，细胞弥漫性增生，甲苯胺蓝染色欠均匀；D组结构欠清晰，细胞排列欠规则，甲苯胺蓝染色欠均匀。B组的Mankin’s评分显著低于A组（P＜0.05），表明造模成功。C、D组Mankin’s评分明显低于B组，差异均有统计学意义（P＜0.05），以D组更明显。
3 讨论
膝骨关节炎（KOA）是临床中比较常见的一种以膝关节疼痛、运动障碍为主要表现的疾病，其发病机制目前仍不明确。目前研究结果表明，KOA以关节软骨细胞退变和软骨细胞外基质降解为主要特征[3]。
SF是当归水溶液的有效单体成分，化学名称为3－甲氧基－4－羟基－苯丙烯酸钠。SF对软骨细胞的修复有较好的效果，其作用与抑制一氧化氮等某些炎性因子表达，降低（MDA）含量，提高SOD活性有关。而且通过关节腔注射的方式给药，可以使药物直达病灶，能够更快的起效。
本研究结果显示，C、D组血浆及关节液中SOD活性均较B组增强，MDA含量均较B组降低，以D组更明显；代表 ChS能够提高KOA兔血浆及关节液中的SOD活性，降低MDA水平从而达到保护软骨的效果，而且ChS、SF联合给药能够更好的减轻自由基对软骨及细胞基质的损伤，从而对KOA起到较好的治疗效果。本实验结果为临床用药提供了动物实验依据，但其最佳配比仍需进一步研究。
参考文献：
[1]Wang Q，Huang S Q，Li C Q，et al. Akkermansia muciniphila May Determine Chondroitin Sulfate Ameliorating or Aggravating Osteoarthritis[J]. Frontiers in Microbiology，2017，8：1955.
[2]韦健，周建飞，杨学义，洪定钢. 玻璃酸钠联合阿魏酸钠对兔膝骨关节炎的修复作用[J]. 青岛大学医学院学报，2016，52（06）：672-675.
[3]胡阿威，喻爱喜，吴刚等.兔骨关节炎中基质金属蛋白酶-1、3与白细胞介素-1β表达及关节软骨细胞凋亡的研究[J].中华实验外科杂志，2012，29（11）：2277-2279.
论文作者:王冰舰1,张明生2（通讯作者）
论文发表刊物:《中国医学人文》(学术版)2018年5月上第9期
论文发表时间:2018/11/22
标签：软骨论文; 关节论文; 骨关节炎论文; 阿魏论文; 血浆论文; 细胞论文; 膝关节论文; 《中国医学人文》(学术版)2018年5月上第9期论文;