（中山大学孙逸仙纪念医院 广东 广州 510120）
【摘要】 目的：探讨HPLC法对依诺沙星及其制剂有关物质的测定。方法：选用Agilent HC C18色谱柱，磷酸溶液-甲醇-乙腈，梯度洗脱，检测波长为269nm。结果：依诺沙星浓度在0.26～26.13μg/mL范围内，线性关系良好，最低检出浓度为3.78ng/mL，最小定量浓度为12.56ng/mL。结论：HPLC法测定依诺沙星及其制剂的有关物质，简便、灵敏。
【关键词】 HPLC法；依诺沙星；制剂；有关物质
【中图分类号】R927.2 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2016）31-0349-02
依诺沙星的抗菌功效显著，根据《中国药典》显示[1]，有关药物及其含量测定方法为非水滴定法，但此方法难以将全部中间体洗脱出来。通过学者的研究与探索[2]。提出了HPLC法，它提高了各类杂质检出的效率，保证了主峰和杂质峰二者的分离效果，进而为相关药物及其含量测量提供了科学的方法。
1.仪器、试药
选用Agilent液相色谱仪，对照品为依诺沙星，色谱纯为甲醇-乙腈，分析纯为磷酸与三乙胺，蒸馏水。
2.方法
2.1 色谱条件
色谱柱为4.6mm×250mm，5μm，柱温30℃，流动相为磷酸溶液-甲醇-乙腈，分为两种流动相，其中磷酸溶液均为0.025mol/L，但乙腈存在差异，梯度洗脱，检测波长269nm，进样体积为20μL。具体的梯度洗脱程序如表1所示。
2.2 测定方法
精密称取依诺沙星原料、依诺沙星片细粉、依诺沙星胶囊内容物各25mg，放置在100mL容量瓶内，加入0.1mol/L盐酸溶液溶解20mL，利用第一种流动相稀释到刻度，分别摇匀，作为试验品溶液。各精密称取1mL，放置在100mL容量瓶内，利用第一种流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。
精密量取依诺沙星滴眼液2mL，将其放置在25mL容量瓶内，利用第一种流动相稀释到刻度，摇匀，作为试验品溶液，精密称取1mL，放置在100mL容量瓶内，利用第一种流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。
3.结果
3.1 适用性实验
在系统适用性分离度实验中加入已知杂质，精密称取依诺沙星对照品、诺氟沙星杂质对照品与氧氟沙星对照品，加入0.1mol/L盐酸溶液溶解为混合溶液，其中含有依诺沙星、诺氟沙星杂质与氧氟沙星，所占含量分别为250μg/mL、2.5μg/mL与2.5μg/mL。当诺氟沙星杂质保留时间在0.83min时，依诺沙星的分离度为4.9；当氧氟沙星保留时间在1.11min时，依诺沙星的分离度为2.2，此结果显示，诺氟沙星杂质和氧氟沙星保留时间和试验品色谱图中主峰前后相邻杂质的保留时间基本相同，与主峰良好分离，因此，此实验可以作为系统适用性分离度实验。如图1所示。
3.2 定量限、最低检出限
选取依诺沙星对照品，加入0.1mol/L盐酸溶液溶解，利用第一种流动相稀释，进样浓度为3.76ng/mL时，峰高是噪音的3倍，因此，最低检出浓度应为3.78ng/mL、最小检出限应为0.0015%、最小定量浓度应为12.56ng/mL、最低定量限位0.0045%。
3.3 线性关系
精密称取依诺沙星25.46mg，放置在100mL两瓶中，加入0.1mol/L盐酸溶液溶解使其达到20mL，利用第一种流动相稀释，摇匀后精密称取溶液分别为0.1、0.2、0.5、1、2、5和10mL，此后，分别放置在100mL量瓶内，加水稀释使其达到刻度，并摇匀，各溶液的浓度分别为0.23、0.50、1.27、2.53、5.07、12.69与25.76μg/mL，利用溶液浓度和依诺沙星峰面积，计算回归方程，即：Y=36.81X＋2.36，当溶液浓度在0.26～26.13μg/mL范围内其线性关系良好。
3.4有关物质
依诺沙星及其制剂的有关物质测定结果如表2所示。
4.讨论
采用HPLC方法测定依诺沙星及其制剂有关物质时，选用的系统适用性实验分离度溶液应为混合溶液，如：依诺沙星、诺氟沙星杂质与氧氟沙星混合液，此检查方法保证了杂质的有效检出。同时，对于滴眼液样品而言，由于其中含有一定的防腐剂，因此，具体计算时应除溶剂峰与辅料峰，以此保证杂质量的准确计算[3]。
对于依诺沙星而言，其难以溶于水，并且在甲醇与乙腈中均微溶或极微溶解，同时，利用有机溶剂展开梯度洗脱过程中，溶剂峰相对较大，因此，直接影响了杂质的测定结果。因此，本研究选取了0.1mol/L盐酸溶液溶解，同时利用第一种流动相稀释使其达到要求刻度。
【参考文献】
[1]杜旭,曹晓云.HPLC法测定依诺沙星及其制剂的有关物质[J]. 中国抗生素杂质,2011,15（4）:282-284.
[2]杨淑先,王立萍. HPLC测定司帕沙星及其制剂中的有关物质[J]. 华西药学杂质,2011,23（4）:384-385.
[3]张现涛,焦豪妍,沈小钟,等.HPLC法测定盐酸丙酰左卡尼汀原料药及其制剂的含量和有关物质[J].中国药房,2012,12（21）:1992-1994.
论文作者:刘永茂,汪锦飘
论文发表刊物:《医药前沿》2016年11月第31期
论文发表时间:2016/11/12
标签：溶液论文; 杂质论文; 依诺沙星论文; 诺氟沙星论文; 制剂论文; 浓度论文; 精密论文; 《医药前沿》2016年11月第31期论文;