方珍文[1]2003年在《血小板型磷脂酶A_2在人体宿主防御细菌感染中的作用及与肝癌的关系》文中研究指明目的 探讨血小板型磷脂酶A_2(phospholipase A_2,PLA_2)在人体宿主防御细菌感染中的作用和它与肝癌的关系，了解中国人的血小板型PLA_2 cDNA和氨基酸顺序，增加对该型PLA_2的认识。 方法 1．临床确诊为细菌感染的病人，检测其血浆的杀菌活性，利用RT-PCR的方法测定血中PLA_2 mRNA的水平。2．比较人和大鼠的血小板的杀菌活性，用凝血酶刺激诱导血小板释放PLA_2，观察其杀菌活性的不同。利用RT-PCR的方法测定PLA_2 mRNA在血中的水平。3，利用RT-PCR的方法，就10例肝癌患者肝癌组织和癌旁组织血小板型PLA_2 mRNA的水平进行测定，观察PLA_2 mRNA含量是否有差异。4．从中国人肝癌和癌旁组织中克隆出血小板型PLA_2 cDNA片段，确定它的顺序，观察肝癌组织的PLA_2 cDNA顺序是否有突变。5．与已知的外国人的血小板型PLA_2进行对比分析，观察不同人种间该PLA_2是否有明显差异。 结果 1．细菌感染患者的血浆具有显着杀灭金葡菌活性，并证实与血小板型PLA_2有关；其血中血小板型PLA_2 mRNA的水平明显高于健康者。2．健康人富血小板血浆(platelet rich plasma,PRP)经凝血酶刺激后没有明显的杀金葡菌活性，而大鼠的则有较强的杀菌活性。3．中国人的汉族、壮族，其血小板型PLA_2 cDNA和氨基酸顺序与外国人的无明显差异。4．肝癌组织和癌旁组织都能检测到血小板型PLA_2 mRNA，但它们的水平各有高低，没有规律。5．从3例肝癌患者癌组织中克隆出血小板型PLA_2cDNA顺序，经分析未发现有明显意义的突变。 结论 1．人血小板型PLA_2在细菌感染性疾病中发挥重要作用。2．凝血酶诱导人血小板，没有明显的杀菌活性。3．血小板型PLA_2的DNA和氨基酸顺序在不同人种中高度保留。4．肝癌患者的癌组织和癌旁组织血小板型PLA_2 mRNA水平的变化无明显规律。5．人肝癌组织的血小板型PLA_2 DNA未见有明显意义的突变。
苏启表[2]2003年在《具杀菌活性的磷脂酶A_2 mRNA在大鼠体内的分布以及它们的基因和氨基酸顺序的分析》文中研究说明目的 全面探讨血小板型磷脂酶A2(phospholipase A2,PLA2) mRNA在正常大鼠体内的分布情况，增加对血小板型PLA2的认识。方法 从大鼠不同器官和组织的匀浆中提取总RNA，合成cDNA第一链，利用PCR扩增大鼠血小板型PLA2 DNA，再经2%琼脂糖凝胶电泳检测。结果 在30种器官和组织中，除唾液腺和胰腺之外，都能检测到血小板型PLA2 mRNA，其中，在肺、腹主动脉、下腔腹静脉、血液、肠道、胸腺、骨髓、膀胱和子宫中含量尤为丰富。结论 血小板型PLA2 mRNA广泛分布在大鼠的各个器官和组织中，它可以广泛参与抗菌活动，在防御细菌感染的过程中起重要作用。
刘滔滔[3]2001年在《大鼠血小板和血小板型磷脂酶A_2在宿主防御细菌感染中的作用》文中提出摘 要【目的】探讨血小板和血小板型磷脂酶A2在宿主防御细菌感染中的作用，使我们对血小板的机能和血小板型PLA2分子有新的认识，为开发新型抗菌药物提供重要信息。【方法】从整体、细胞、分子水平对大鼠血小板和血小板型PLA2的杀菌作用及其机制进行研究。（1）大鼠静脉注射活金葡菌造成细菌感染模型，分别抽取不同时间段的静脉血，进行血浆杀菌实验、PLA2酶活性及全血PLA 2mRNA表达水平测定。（2）分离正常大鼠血小板，以不同的刺激剂诱导血小板释放PLA 2，观察其杀菌活性 ，并与兔纯血小板型PLA 2抗菌谱相比较。（3）从大鼠全血中克隆出血小板型PLA 2cDNA片段，对其基因顺序进行分析，并将已知的哺乳类动物血小板型PLA 2基因和胰腺型PLA 2基因进行对比，分析血小板型PLA 2的分子进化特征。【结果】（1）经过活菌刺激后，3h大鼠血浆中PLA2的活性升高了27倍，此时血浆对G+细菌如金葡菌，耐氧西林金葡菌（MRSA）、粪肠球菌活性具有较强杀灭作用，但对G-细菌如大肠杆菌无作用。全血中PLA 2mRNA表达也有所增加，1小时达最大值。（2）正常大鼠血小板经凝血酶刺激后，释放PLA2，具有较强杀灭G+细菌的作用，但对G-细菌如大肠杆菌却无杀灭作用。其抗菌谱与兔纯血小板型PLA2的抗菌谱相同。（3）我们从大鼠全血中克隆出一新的血小板型PLA2cDNA片段，成功登录美国基因数据库（GenBank），登录号AF365363。经过分析发现哺乳生物血小板型PLA2的进化速度相对较快，进化压力使血小板型PLA2进化成一带有较多正电荷的碱性分子，从而具有了杀菌活性。【结论】血小板和血小板型PLA2在宿主防御G+细菌感染中起着非常重要的作用。
宋大彦[4]2006年在《环磷酰胺对大鼠感染模型血小板型磷脂酶A2的影响》文中认为目的:研究环磷酰胺对大鼠血小板型磷脂酶A2(Phospholipase,PLA2)的影响,以及细菌感染时大鼠血浆血小板型磷脂酶A2的来源。方法:实验第一天给大鼠一次性腹腔注射环磷酰胺(CTX)(140mg/kg),第四天尾静脉注射金黄色葡萄球菌造成细菌感染模型,细菌感染前和细菌感染后3h腹主动脉取血和取器官,进行血浆杀菌实验、PLA2酶活性测定,采用RT-PCR检测不同组织、器官的血小板型PLA2 mRNA表达。结果:(1)血浆杀菌率、PLA2酶活性:CTX组,经细菌刺激后,血浆杀菌率、PLA2酶活性明显降低;血浆杀菌率比正常大鼠降低了2.8倍,血浆PLA2酶活性降低了2.6倍(。2)血小板型PLA2 mRNA的表达的变化:CTX组,血、骨髓、胸腺的血小板型PLA2mRNA表达明显降低,其他组织肝、脾、小肠等与正常大鼠相比表达没有明显降低。正常大鼠的血、骨髓、胸腺、肝、脾、小肠的血小板型PLA2 mRNA的表达水平都很高。(3)白细胞、血小板的变化:环磷酰胺组(CTX)与正常大鼠组(NS)相比,白细胞数显着降低,降低了8倍;血小板数略降低,仅降低了1.1倍。经过活菌刺激后, NS组大鼠白细胞、血小板明显升高;CTX组大鼠白细胞、血小板增高不明显。结论:环磷酰胺致大鼠免疫抑制,可减少血中血小板型PLA2的合成和含量,从而使血浆杀菌活性明显降低。受细菌感染大鼠,血浆中迅速升高的血小板型PLA2主要来源于骨髓和血中的白细胞。
卢凤玲[5]2004年在《磷脂酶A_2在大鼠细菌性和非细菌性炎症渗出液中的杀菌作用》文中进行了进一步梳理【目的】探讨磷脂酶A_2(phospholipase A2,PLA2)在大鼠细菌性和非细菌性炎症渗出液中的作用,了解不同类型PLA2在不同类型、不同时段炎症渗出液中的杀菌作用,增加对PLA_2 作用的认识。【方法】大鼠腹腔内分别注射活金葡菌及糖原生理盐水溶液造成细菌性和非细菌性腹膜炎模型,分别收集不同时间段的腹腔渗出液,对渗出液进行(1)杀菌实验,检测各时段不同浓度杀金葡菌活性及各时段杀其它细菌的活性;(2)抑制实验,加入EGTA 进行杀菌活性抑制;(3)PLA_2酶活性测定;(4)利用RT-PCR 方法检测PLA_2mRNA 的表达;(5)用瑞氏法对涂片进行染色,观察各时段细胞类型。【结果】(1)经金葡菌刺激后,不同时段不同浓度的腹腔炎性渗出液杀金葡菌活性、酶活性不一样,其中以24 小时渗出液杀金葡菌活性为最强,PLA_2酶活性最高。渗出液对其它G~+菌也具有强杀灭作用,而对G~-具有强杀灭作用是由于渗出液中含有中性粒细胞来源杀菌/通透性增加蛋白(BPI)。EGTA 可抑制渗出液杀菌活性。不同时段有不同类型PLA_2mRNA 的表达及以不同的类型细胞为主,0h 腹腔液无PLA_2mRNA 的表达,腹腔液中以正常巨噬细胞为主,4h、24h 渗出液有Ⅱ型PLA_2和Ⅳ型PLA_2,渗出液中都是以中性粒细胞为主,48h、72h 渗出液除Ⅱ型PLA_2和Ⅳ型PLA_2外,还有Ⅴ型PLA_2,渗出液中以活化巨噬细胞为主。(2)经糖原刺激后渗出液杀菌活性以72 小时为最强,PLA_2酶活性最高,也对其它G~+菌和G~-也具有强杀灭作用。EGTA 也可抑制渗出液杀菌活性。4h 渗出液有Ⅱ型PLA_2和Ⅳ型PLA_2,渗出液中以中性粒细胞为主。从24h 开始渗出液中除有Ⅱ型PLA_2和Ⅳ型PLA_2外,还有Ⅴ型PLA_2,渗出液中以活化巨噬细胞为主。【结论】磷脂酶A_2 在细菌性和非细菌性炎症渗出液的杀菌作用中起着非常重要的作用。
刘滔滔, 梁宁生, 李艳, 杨帆, 王燕[6]2003年在《大鼠细菌感染模型血中磷脂酶A_2变化的研究》文中研究指明目的 探讨血小板型磷脂酶 A2 在宿主防御细菌感染中的作用 ,使我们对 PL A2 分子有新的认识。方法 大鼠静脉注射活金黄色葡萄球菌造成细菌感染模型 ,分别抽取不同时间段的静脉血 ,进行血浆杀菌实验、PL A2酶活性及全血 PL A2 m RNA含量测定。结果 经过活菌刺激后 ,3 h大鼠血浆中 PL A2 的活性升高了 2 7倍 ,此时血浆对革兰阳性细菌具有较强杀灭作用 ;全血中 PL A2 m RNA含量也有所增加 ,1h达最高值。结论 血小板型PL A2 在宿主防御 G+细菌感染中起着非常重要的作用
李艳, 梁宁生[7]2005年在《血小板型磷脂酶A_2抗菌活性的研究进展》文中指出磷脂酶A2(PLA2)是一类能水解磷脂Sn-2位脂键的酶,也是生物化学、基因工程和药理学研究的热点酶类。近几年来一个重要发现就是某些型别PLA2具有抗菌功能,研究得最早且最多的是血小板型PLA2,它主要对G+菌具有强的抗菌活性,在宿主防御细菌感染中发挥重要作用。现就血小板型PLA2抗菌活性的研究进展作一综述。
李艳[8]2004年在《人基因重组血小板型磷脂酶A_2体外杀菌活性及作用机制的研究》文中进行了进一步梳理[目的]：探讨人基因重组血小板型磷脂酶A_2(Phospholipase A_2，PLA_2)的体外杀菌活性及作用机制，为开发新型抗菌药物提供重要信息。 [方法]：我们从体外杀菌活性、影响杀菌活性的因素、与抗生素相互作用，杀菌机制等几个方面探讨。1、杀菌活性测定：将不同浓度的血小板型PLA_2与细菌在37℃共同孵育2h，然后加入营养琼脂平皿中，37℃培养18-20h，计每一琼脂板上的菌落形成数(CFU)，计算出血小板型PLA_2杀菌率；根据耐药性诱导实验，用PLA_2诱导金黄色葡萄球菌(简称金葡菌)，观察细菌耐药性。2、对血小板型PLA_2杀菌活性的影响因素(pH，血清白蛋白、细菌浓度、ca~(2+)、Mg~(2+)、肝素)进行测定。3、将血小板型PLA_2和抗菌药分别单独以及联合作用于金黄色葡萄球菌，通过测定细菌菌落数来评价杀菌效果。4、应用电子显微镜观察金葡菌经PLA_2作用后的形态变化；观察不同生长时期金葡菌的对血小板型PLA_2杀菌作用的敏感性；通过菌落计数法测定血小板型PLA_2对金葡菌的抗生素后效应(PAE)。 [结果]：1．血小板型PLA_2对金葡菌、枯草杆菌、炭疽杆菌、表皮葡萄球菌、粪肠球菌等革兰氏阳性(G~+)菌有较强杀菌作用，作用2h的PLA_2最低杀菌浓度(MBC)范围在6～200ng／ml之间。对大肠杆菌、伤寒沙门氏菌、铜绿假单胞菌、变形杆菌等革兰氏阴性(G~-)则需要较高浓度的血小 广西医科大学2001级硕士研究生学位论文3板型PLAZ，作用2h的MBC为20一55p留ml。血小板型PLA:对耐甲氧西林金葡菌、耐甲氧西林表皮葡萄球菌、粪肠球菌耐药菌株等G+耐药菌株的杀菌作用也较强，Zh的MBC为1 00一3 00ng/ml。2.血小板型pLA:杀菌活性受培养液pH值影响，当pH为5.0、7.4及9.0时，80n留ml血小板型PLAZ杀菌率分别为44.4%、9 9.8%和99.5%。PLA:易与血清白蛋白结合，杀菌活性受其影响。PLA:的杀菌浓度随着细菌浓度的增加而增高。1一sm五江c扩+适于PLA:发挥杀菌活性。EGTA、肝素、MgCI:可明显抑制血小板型PLAZ杀菌作用，smM EGTA、IOmM MgCI:及0.03U/ml肝素的杀菌抑制率达100%。3.青霉素、头抱拉定、磷霉素、万古霉素增强血小板型PLA:杀菌活性;红霉素、克林霉素减弱血小板型PLA:杀菌活性;氧氟沙星、阿米卡星对血小板型PLA:杀菌作用无影响。4.电镜下观察金葡菌经血小板型PLA:作用30一6Omin，细菌细胞壁和细胞膜出现裂口和分离，120min能见到有部份细菌完全破裂。对数生长期的细菌对PLA:较敏感。血小板型PLAZ有着明显的pAE，160ng/mlpLA:作用金葡菌lh的pAE为6h，32Ong/mlpLAZ的PAE>24h。I结论】:1.血小板型PLA:对G+菌及其耐药菌均有较强的杀菌作用。2.血小板型PLA:杀菌活性受pH值、血清白蛋白、细菌浓度的影响。3.血小板型PLA:与具破坏细胞壁功能的杀菌类药物有协同作用，与抑菌类药物合用受到拮抗。4.C扩+、正电荷性、细菌细胞壁的结构及其生长状态是血小板 型PLA:发挥杀菌活性的重要因素。5.血小板型PLA:对金葡菌有着明显的 PA玉;。
李艳, 梁宁生, 刘滔滔, 陆益, 黄天文[9]2008年在《大鼠血小板杀菌活性研究》文中提出目的:探讨血小板在宿主防御细菌感染中的作用。方法:Wistar大鼠麻醉后腹主动脉取血,离心分离出富血小板血浆(PRP),从PRP中分离血小板,以不同的诱导剂[凝血酶、二磷酸腺苷(ADP)和肾上腺素(AD)]分别诱导血小板及PRP,观察其杀菌活性。结果:分别经ADP、AD刺激的PRP和血小板均无杀菌作用,而血小板和PRP经凝血酶刺激后,均具有较强杀灭革兰阳性(G+)细菌的作用,但对革兰阴性(G-)细菌却无杀灭作用。结论:大鼠血小板经诱导的可释放杀菌物质,在机体防御细菌感染时发挥重要的作用。
梁宁生, 苏启表, 李艳, 杨帆, 陆益[10]2006年在《Ⅱ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅹ型磷脂酶A_2 mRNA在大鼠淋巴器官中的分布》文中认为目的探讨Ⅱ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅹ型磷脂酶A2(PLA2)mRNA在正常大鼠淋巴器官中的分布情况,了解各型PLA2在细菌感染所致的免疫反应中可能发挥的作用。方法从大鼠的淋巴器官骨髓、胸腺、淋巴结和脾的组织匀浆中提取总RNA,合成第1链cDNA,利用PCR扩增上述各型PLA2DNA,PCR产物经2%琼脂糖凝胶电泳检测。结果在大鼠淋巴器官中均能检测到Ⅱ、Ⅳ型PLA2mRNA,Ⅱ型PLA2mRNA的含量比Ⅳ型PLA2mRNA高;只在脾中检测到Ⅴ型PLA2mRNA;在各淋巴器官中均未检测到Ⅹ型PLA2mRNA。结论实验表明,Ⅱ型和Ⅳ型PLA2广泛存在于中枢和外周淋巴器官中,含量丰富,在宿主防御细菌感染的过程中,除了参与先天免疫外,很可能参与获得性免疫反应;Ⅴ型PLA2mRNA存在于脾脏中,也可能参与获得性免疫反应,但不如Ⅱ型和Ⅳ型PLA2重要。
参考文献：
[1]. 血小板型磷脂酶A_2在人体宿主防御细菌感染中的作用及与肝癌的关系[D]. 方珍文. 广西医科大学. 2003
[2]. 具杀菌活性的磷脂酶A_2 mRNA在大鼠体内的分布以及它们的基因和氨基酸顺序的分析[D]. 苏启表. 广西医科大学. 2003
[3]. 大鼠血小板和血小板型磷脂酶A_2在宿主防御细菌感染中的作用[D]. 刘滔滔. 广西医科大学. 2001
[4]. 环磷酰胺对大鼠感染模型血小板型磷脂酶A2的影响[D]. 宋大彦. 广西医科大学. 2006
[5]. 磷脂酶A_2在大鼠细菌性和非细菌性炎症渗出液中的杀菌作用[D]. 卢凤玲. 广西医科大学. 2004
[6]. 大鼠细菌感染模型血中磷脂酶A_2变化的研究[J]. 刘滔滔, 梁宁生, 李艳, 杨帆, 王燕. 中华医院感染学杂志. 2003
[7]. 血小板型磷脂酶A_2抗菌活性的研究进展[J]. 李艳, 梁宁生. 国外医学(临床生物化学与检验学分册). 2005
[8]. 人基因重组血小板型磷脂酶A_2体外杀菌活性及作用机制的研究[D]. 李艳. 广西医科大学. 2004
[9]. 大鼠血小板杀菌活性研究[J]. 李艳, 梁宁生, 刘滔滔, 陆益, 黄天文. 广西医科大学学报. 2008
[10]. Ⅱ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅹ型磷脂酶A_2 mRNA在大鼠淋巴器官中的分布[J]. 梁宁生, 苏启表, 李艳, 杨帆, 陆益. 中华医院感染学杂志. 2006