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【摘 要】目的：HPLC法测定中药茜草中茜草素、羟基茜草素和大叶茜草素的含量。方法：运用HPLC法对茜草中茜草素、羟基茜草素和大叶茜草素三种有效成分进行含量确定。结果：3类有效成分分离度均良好，平均回收率98. 3%~100.4%。结论：HPLC法测定成分含量准确、快速，可运用到中药茜草有效成分的含量测定的研究当中。
【关键词】茜草；HPLC法；有效成分；含量
茜草（茜草科茜草属Rubia cordifolia L.），其药用部位为植物干燥根及根茎部位。茜草民间又称活血草、血见愁[1]。目前，在我国发现的茜草种类多达36种，主要产地与秦岭以北，安徽、河北、山东等地。茜草性喜阴湿，惧积水，多生于疏林、灌丛。茜草作为中药，其主要用于治疗创伤挫伤、出血、月经不调、支气管炎等[2]。茜草化学成分多，成分结构性质相似，较难分离，其含量主要的检测指标中，茜草素和羟基茜草素为蒽醌类，大叶茜草素为萘醌类化合物。本研究为同时检测茜草的三种检测指标，利用HPLC法对茜草中三种检测成分进行含量的有效测定，具体方法如下[3]。
1材料与方法
1.1研究材料与工具
①试剂：本研究采用的茜草药材为山西野生的茜草本种（Rubia cordifolia L.）干燥的根茎，实验用甲醇为国药集团提供、磷酸为实验室自主配置，其余材料均为市面公开销售的用品。
②仪器：冷却水循环装置、水蒸气蒸馏装置实验室自制；电热恒温水浴锅（HHS型），多功用真空泵（SHB-Ⅲ循环水式），电子天平（AX 220G），LC-20A色谱仪，其他仪器均为市面公开销售仪器[4]。
1.2方法
①色谱条件设置
测定实验在Diamonsil TM C18色谱柱下完成，长度设置为255mm，填充颗粒设置直径5μm，梯度洗脱；柱温保持在35°C；紫外线检测器波长调整至256nm；设置甲醇-0.05%磷酸流动相；进样量20μL[5]。
②溶液的制备
精密称定茜草根部位粉末50㎎，加入甲醇：浓度25%盐酸按4：1混合溶液100 mL，加热回流30min，冷却后复用混合溶液补足体积[6]。滤过并精密吸取40 mL续滤液，取8 mL三乙胺加入摇匀，用甲醇定容作标准试品备用。
③线性范围
10 mL的容量瓶中分别梯度（0.5\2.0\4.0\6.0\8.0）量取混合对照品液，加入甲醇溶液稀释摇匀，得到不同浓度的对照溶液。溶液进样量20 μL，采用色谱条件设置进行测定，记录其色谱图，通过峰面积线性回归分析。
④精密度实验
取20 μL混合对照品溶液，按照色谱条件设置，连续地进行5次进样，记录茜草素、羟基茜草素和大叶茜草素色谱峰面积，并计算其各相对RSD值。
⑤ 回收率实验
取已知茜草粉末6份（含量确定），每份质量25mg，置锥形瓶中，加入量取50.02μg/mL羟基茜草素0. 25mL，52. 25μg/mL的茜草素0.30mL，49. 16μg/ mL大叶茜草素0.5mL，制备供试品，进样控制20 μL，计算各化合物的回收率[7]。
2 结果
2.1线性范围结果
茜草素线性范围为2.34~112.32μg/mL；羟基茜草素线性范围为 5.11~122.64μg/mL；大叶茜草素线性范围为2.78~133.68μg/mL，各组分在其相应浓度范围内的线性关系很好（R＞0.9990），见表1。
2.2精密度实验结果
实验数据3种有效成分峰面积的RSD值分别为1.5%、1.7%、1.6%，结果说明实验精密度较高。
2.3回收率结果
茜草素、羟基茜草素和大叶茜草素的回收率平均值分别是100. 4%、98.4%、98. 3%。平均回收率均在98. 3%~100.4%之间，RSD<1.96%。
3 讨论
茜草中，羟基茜草素、茜草素和大叶茜草素三种有效成分对于紫外最大吸收波长各不同，分别为255nm、250 nm、270 nm，因此选择256nm作为检测波长，可较好的反应三种有效成分的峰高面积。本研究采用35℃作为柱温，是综合了分离度、保留时间等最终实验测得。
本研究中采用HPLC法，可以同时有效测定茜草中羟基茜草素、茜草素和大叶茜草素各自的含量，HPLC法精密度高，检测的结果符合相关含量测定的要求，为作茜草中有效成分的测定的一种通用方法，可以为进一步研究提供良好的基础，HPLC法值得推广与使用。
参考文献：
[1]薛丽，杨波，索菲娅，等.HPLC法测定茜草素、羟基茜草素、大叶茜草素含量[A].第九届全国中药和天然药物学术研讨会大会报告及论文集[C].南昌：中国药学会，2007：342-348．
[2]李鹏，胡正海.茜草的生物学及化学成分与生物活性研究进展[J].中草药，2013，44（14）：2009-2014．
[3]郭桂明，蔡乐，梁小雨，等.HPLC法测定茜草饮片中大叶茜草素和羟基茜草素的含量[J].北京中医药，2011，30（7）：541-543．
[4]Eszter Lajkó，Péter Bányai，Zsófia Zámbó，et al.Targeted tumor therapy by Rubiatinctorum L：analytical characterization of hydroxyanthraquinones and investigation of their selective cytotoxic，adhesion and migration modulator effects on melanoma celllines（A2058 and HT168-M1）[J].Cancer Cell Int，2015，15：119-133．
[5]荀宁.茜草及其伪品的质量控制研究[D].北京中医药大学，2014．
[6]左宏笛，鲍家科，茅向军，等.HPLC 测定鼻渊滴丸中大叶茜草素含量的方法改进[J].中国现代应用药学，2008，25（S1）：646-649．
[7]李芙蓉，陈世忠，罗世恒，等.UFLC 法测定茜草中羟基茜草素和大叶茜草素[J].中草药，2010，41（12）：2087-2089．
论文作者:邹文光
论文发表刊物:《中国蒙医药》2018年第1期
论文发表时间:2018/4/4
标签：茜草论文; 羟基论文; 大叶论文; 含量论文; 回收率论文; 溶液论文; 线性论文; 《中国蒙医药》2018年第1期论文;