【摘要】 目的 探讨金属硫蛋白(Metallothionein,MT)、嘌呤核苷磷酸化酶(PurineNucleosidePhosphorylase,PNP)、O－GlcAc糖基转移酶(O－lingedGlcActransferase,OGT)mRNA 的表达水平作为职业性砷暴露人群早期生物学指标的意义方法 用原子荧光分光光度计检测尿砷含量,Real－timePCR 方法检测血样中MT１a、MT２a、PNP和OGT的mRNA 表达水平.结果 病例组尿砷浓度高于对照组,MT１a、MT２a、PNP、和OGT mRNA 表达水平高于对照组. 结论 MT１a、MT２a、PNP、和OGT可作为广西职业性砷暴露人群早期检测的生物学标志. 【关键词】 砷暴露;金属硫蛋白;嘌呤核苷磷酸化酶;O－GlcAc糖基转移酶;ThestudyofpopulationwitharsenicexposurebloodbiomarkerinGuangxi HUANGXiao－qi１,CHENJing１,LIN Hong－sheng２,LIN Ying－hui２△ (１ Departmentof MolecularBiologyLaboratory,２DepartmentofLaboratory,TheFirstAffiliated HospitalofGuangxiUniversityofChineseMedicine,NanＧning ５３００２３,China??E－mail:linyinghui６３＠１６３??com )【Abstract】AIM:ToexploretheexpressionofMetallothionein(MT)、PurineNucleosidePhosphorylase(PNP)、O－lingedGlcActransferase(OGT)mRNAwhichsignificanceofearlybiologicalmarkersinarsenicexposurepopulation?? Methods:TheuricarsenicwasdeterminedbyAtomicfluorescencespectrophotomeＧter??ThemRNAexpressionofMT１a、MT２a、PNP、OGTwasevaluatedbyquantitativereal－timePCR??Results:Theconcentrationofuricarsenicofcasegroupishigherthancontrolgroup??ThemRNAexpressionofMT１a,MT２a,PNPandOGTarehigherwithcasegroup?? CONCULUSION:MT１a,MT２a,PNP,andOGT【cKoeuyldwobredesa】rlybiomarkersinpopulationwhomoccupationalexposuretoarsenicinGuangxi?? Arsenicexposure;Metallothionein;NucleosidePhosphorylase;O－lingedGlcActransferase; 【中图分类号】R１３５．１【文献标识码】B 【文章编号】１００８－６３１５(２０１５)１２－１２４７－０１１
前言砷(Arsenic)在１９８７ 年被世界卫生组织(World Health Organization,WHO)确认为致癌物[１].砷暴露与健康效应之间存在剂量－反应关系[２].iAs 及其化合物与人类的皮肤癌、肺癌、肾癌等许多癌症有密切相关[３]. 广西矿产资源丰富,冶金行业前景广阔,提示砷及其化合物中毒的防治工作意义重大[４].截至目前,广西人群中是否存在灵敏度、特异性都令人满意的生物学标志仍鲜有报道.本研究以广西某冶炼厂员工作为砷暴露研究人群, 通过检测血液样品中神代谢相关酶金属硫蛋白(Metallothionein,MT)、嘌呤核苷磷酸化酶(PurineNucleosidePhosphorylase,PNP)、O－GlcAc糖基转移酶(O－lingedGlcActransferase,OGT)mRNA 的表达水平,探讨这五种基因在广西砷暴露人群中作为早期标志物的意义.
１??１ 材料和方法
１??１??１ 研究对象和实验材料１??１??１??１ 研究对象选取 典型抽样方法选取男性５０名,入选标准为年龄３５－６０岁、无明显疾病,冶炼厂工作一年以上,再选取５０名非冶炼厂工人(男性) 为对照.１??１??１??２ 尿样采集 用一次性聚乙烯管收集空腹晨尿,４°C下保存,一个月之内完成尿砷检测.１??１??１??３ 血样采集 用一次性乙二胺四乙酸抗凝管采集外周血,保存在４°C,２４h内按照试剂盒完成RNA 采集. １??２ 主要仪器和试剂 Real－timePCR 试剂盒(天根公司,中国),引物合成(Invitrogen,美国),荧光定量PCR 仪(ABI 公司,美国),RT－ PCR 仪(Eppendorf公司,德国),双通道原子荧光光度计(北京吉天仪器有限公司,中国).１??３ 实验方法１??３??１ 尿砷含量测定 尿样经处理后,用双通道原子荧光光度计测定.１??３??２ 总RNA 提取和荧光定量PCR 循环参数:预变性９５°C１０min,９５°C 变性１５s,６０°C 退火/延伸６０s收集荧光,共４０个循环.通过基于内部参照GAPDH 的定量分析,目的基因mRNA 表达量用２△CT计算转录水平的差异(引物序列见表１).
１??４ 统计学分析 应用SPSS１３??０软件对所有数据进行统计学处理.RealtimePCR实验重复三次,实验数据以均数±标准差(mean±SD)表示,尿砷含量在人体内分布均不成正态分布,经对数转换后进行统计分析.以P＜０??０５ 为差异有统计学意义.
２ 结果
２??１ 尿中iAs的测定 病例组尿中iAs含量高于对照组(P＜０??０１),差异有统计学意义(见图１). ２??２ 血清中MT１a、MT２a、GTSP－１、PNP、OGT mRNA 的表达 病例组MT１amRNA 的表达量高于对照组(P＜０??０５,图２A),MT２amRNA 的表达量也高于对照组(P＜０??０１,图２B),PNPmRNA 的表达也同样高于对照组(P＜０??０１,图２C),OGT mRNA 的表达量高于对照组(P＜０??０５,图２D).３ 讨论砷可引起皮肤癌、膀胱癌、肝癌等多种肿瘤的发生[５－７].因此,对于我国砷职业接触人群健康应高度重视.MT有重金属解毒功能,可能是砷中毒的生物学标志[８].PNP可将iAs还原为iAs３＋,OGT可通过糖基化修饰参与砷的代谢过程[９].病例组上调了砷代谢相关酶基因的表达,提示MT１a、MT２a、PNP和OGT 的mRNA 表达量可能成为砷暴露损伤的早期检测指标. 我们的研究证实了,广西职业性砷暴露人群尿砷高于正常人群.发现MT１a、MT２a、PNP和OGT血样中的mRNA 含量或许可以作为广西砷暴露人群早期检测的生物学指标. 参考文献[１] J,H??,&Jr??,D??V?? (１９８０)??IarcmonographsontheevaluationofcarＧcinogenicriskofchemicalstohumans????Aihaj,４１,５,２１４
论文作者:黄小琪１ 陈晶１ 林洪升２ 黄盼柳３ 林英辉２
论文发表刊物:《中国综合临床》2015年12月供稿
论文发表时间:2016/3/8
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