（常州市妇幼保健院生殖中心 江苏 常州 213003）
【摘要】 目的：探讨弱精子症患者精子DNA碎片率（DFI）的预测、精液常规处理方法对精子DFI的影响。方法：选取本院于2015年11月—2017年12月收治的80例男性弱精子症患者，常规参数检测后，划分为3份，行DFI检测，依据DFI指数分为A组、B组与C组，同期另收集36例有较差精子完整性患者的精液标本，分3份，行上游（CSW）、密度梯度离心（DGC）及密度梯度离心联合上游（CSW+DFC）处理，对3种方法处理前后的精液常规参数、DFI指数进行检测。结果：C组精子总活力、前向运动精子百分率较A、B组，均低于后者（P＜0.05）；C组精子非整倍体率、优胚率较A组，均低于后者（P＜0.05）；精子DFI与PR+NR、PR呈现显著负相关（P＜0.05），而与精子非整倍体率之间呈正相关（P＜0.05）。CSW、DGC、CSW+DFC处理后，PR+NP、PR均有明显升高（P＜0.05），浓度都有明显降低（P＜0.05）。CSW+DFC、CSW处理后，DFI都有显著降低（P＜0.05），但DGC处理后DFI有显著升高（P＜0.05）。结论：针对弱精子症患者，其精子DFI指数有重要临床预测价值；相比于精液常规处理方法，可以将DNA完成且有活力的精子筛选出来。
【关键词】 弱精子症；精子DNA碎片率；精液常规处理
【中图分类号】R339.2 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2018）24-0191-02
近年来，伴随社会经济的不断发展及人们生活水平的改变，不孕症发病率呈现逐年增加趋势。在引起不育的各种因素当中，男因占比达50%。而男性不育多由精子生成、成熟出现障碍所致，多表现为精子质量下降，或无精子，其中，弱精子症、少精子症等在不育男性中的占比达90%[1]。精子DNA碎片率（DFI）是一种用于评估精子DNA完整性的重要指标。而产生精子DNA碎片的机制可能为精子生精时出现细胞凋亡，或者是精子生成中出现染色体组装异常等。精子DNA完整性对于遗传信息向下一代的准确传递至关重要[2]。本次研究针对本院收治的80例男性弱精子症患者，探讨DFI的预测、精液常规处理方法对精子DFI的影响，现报道如下。
1.对象与方法
1.1 研究对象
于2015年11月—2017年12月期间，选取本院收治的80例男性弱精子症患者，年龄区间22～48岁，平均（33.5±5.7）岁，不育年限（4.5±2.8）年。男性第二性征、阴囊、阴茎、输精管等均正常，经外周血染色得知，均为正常核型；排除卵巢早衰者、多囊卵巢综合征等可能影响卵子质量的女方不育因素。所选取患者对本次研究均知情，且签署有知情同意书；本研究已获得本院伦理委员会批准。依据精子DFI的参考值进行分组，A组DFI≤15%，共计17例，B组为15%＜DFI＜30%，共37例，C组DFI≥30%，即26例。
1.2 实验方法
1.2.1采集精液 全部均禁欲7d，手淫取精，把精液置入塑料取精杯中，把标本置入到室温中，静置30min，当精液全部液化之后，划分精液，实施DFI检测、卵泡浆内单精子注射及精子荧光原位杂交检测。
1.2.2检测精液常规参数 依据世界卫生组织（WHO）所给出试验方法进行精液常规参数检测：待精子处于常温下，全部液化，对精子情况进行观察，对精子体积、PH及粘稠度进行检测。评价粘稠度方法：将液化的精子吸入至一次性塑料吸液管中（1.5mm），于重力作用下，使精液自然向下滴，对其拉丝的长度进行观察。若为正常，则精液会形成间断的小滴，自吸液管口向下滴。对pH值进行检测时，则把一滴已经液化的精子，涂在pH试纸上，待浸渍区颜色已均匀后，则对比于标准条带的颜色，将pH值读出。
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1.2.3测定方法 在首次使用时，吸取C2液，并加入到C1液中，形成C液，对C液轻颠倒，充分混合，避光保存。取1.2mL的C液与400μL的B液，均加入到流式细胞仪的样品管当中，混成平衡缓冲液，上样，且置于流失细胞仪上，持续运行15min；依据CASA标准，对精液浓度进行分析，取1ml于小试管当中，用A液体稀释，浓度维持在1～2×106个/mL；取B液200μL，加入已经稀释好的精子混合液当中，计时30s，然后加入到600μLLC液中。完成加样后，置于流失细胞仪上，将样品流予以启动，进行监测，测定后，用浓度为10%的漂白剂对样品线5min进行冲洗。
1.3 观察指标
观察与对比各组精液常规参数、DFI与精液常规参数之间的相关性。
1.4 统计学方法
SPSS23.0处理数据，百分比表示计数资料，χ2检验，计量资料由（x-±s）表示，t检验，若经比较有显著差异，由P＜0.05表示。
2.结果
2.1 组间精液常规参数对比
A组向前运动精子百分率（PR）为（16.79±8.27）%，B组（13.65±7.22）%，C组（9.34±8.93）%；精子总活力（PR+NP）分别为（18.73±8.79）%、（15.87±7.50）%、（10.58±9.04）%。PR+NP及PR的组间比较：C组相比于B组、A组，差异显著（P＜0.05）；A组与B组比较，无明显差异（P＞0.05）。
2.2 DFI与精液常规参数的相关性比较
精子DFI与PR+NR、PR呈现显著负相关（P＜0.05），而与精子非整倍体率之间呈正相关（P＜0.05）。CSW、DGC、CSW+DFC处理后，PR+NP、PR均有明显升高（P＜0.05），浓度都有明显降低（P＜0.05）。CSW+DFC、CSW处理后，DFI都有显著降低（P＜0.05），但DGC处理后DFI有显著升高（P＜0.05）。
3.讨论
精液常规参数包含精子活力、形态、pH及浓度等，其无论是在评估其精子质量，还是在预测辅助生殖结局上，均有一定程度的局限性[3]。DFI实为近年新提出的一种能够对精子DNA完整性进行评价的重要指标，已经研究对其与精液常规参数之间的关系进行了研究，目的在于评估DFI对精子质量所具有的实际预测能力。有学者指出[5]，向前运动精子活动率与精子DFI率之间有着紧密的相关性。但也有研究指出[5]，精子DFI与精液常规参数之间仅存在比较弱的相关性。由本次研究可知，DFI≥30%组的前向运动精子活动率较DFI≤15%组，明显低于后者。经相关性分析可知，DFI与前向运动精子百分率、精子总活力均存在显著相关性。由此可知，此些因素对精子DFI不会造成影响。上述结果得知，DFI除了会对精子活动力造成影响外，还会对精子运动方式造成影响，DFI能够被当作评估精子质量的独立指标，与精液常规检测相结合，能够比较全面的对精子质量进行评价。
【参考文献】
[1]刘炜，付睿，赵晨，等.黄精赞育胶囊对弱精子症患者精子DNA完整性的影响[J].中国男科学杂志，2016，30(4):34-37.
[2]麦选诚，董云华，陈斌，等.不育患者精子DNA损伤和精液常规参数关系分析[J].中国男科学杂志，2016，30(4):19-22.
[3]黄智勇，王立雅，谢春雨，等.精子DNA碎片指数对体外受精-胚胎移植妊娠结局预测价值的研究[J].中国当代医药，2016，23(4):97-99.
[4]何泳志，李大文，肖鑫，等.生精胶囊对精子DNA和顶体完整率及体外受精结局影响[J].重庆医学，2016，45(26):3688-3691.
[5]潘通，黄永汉，徐杰伟，等.精浆内源性哇巴因水平与精子活动力和DNA碎片指数的关系[J].广东医学，2016，37(5):714-716.
通讯作者：陈莉，女，江苏人，硕士研究生，主任医师，常州市妇幼保健院生殖中心主任.
论文作者:曹芳,陈莉(通讯作者),王宇峰,于春梅,戴秀亮,夏
论文发表刊物:《医药前沿》2018年8月第24期
论文发表时间:2018/9/4
标签：精子论文; 精液论文; 常规论文; 参数论文; 患者论文; 相关性论文; 方法论文; 《医药前沿》2018年8月第24期论文;