（华北理工大学附属医院重症医学科 河北唐山 063000）
【摘要】目的：研究猴头菇（HEM）是否能够下调NF-κB的活化水平。方法：将实验用小鼠分为两组，1组为空白对照，1组以强饲法接受乙醇（5g/kg 每12小时）3次。剩余3组在摄入酒精前同样以强饲法分别摄入猴头菇（100mg/kg，300mg/kg，500mg/kg）。处理完成后分别检测NF-κB的活化水平。结果：不同浓度（100,300,and 500μM）的HEM提取物能够减少NF-κB活化水平，表明HEM能够抑制NF-κB的生成，进而干预细胞炎症反应过程。结论：猴头菇（HEM）能够抑制NF-κB的活化水平，并因此而减轻酒精对肝细胞的损害作用。
【关键词】猴头菇NF-κB；酒精性肝损害
【中图分类号】R965 【文献标识码】A 【文章编号】1007-8231（2016）23-0294-02
滥用酒精现象广泛存在于全世界，并成为肝损害的重要因缘。长期酒精摄入引起的氧化应激会导致抗氧化及促氧化失衡[1]。持续氧化应激会引起脂肪肝，进而产生炎症、纤维化、肝硬化甚至肝癌[2]。虽然目前对酒精性肝损害的发病机制有较深入的了解，但对疾病的进展机制却并不完全了解。部分研究证实，酒精会干扰免疫防护机制，使细菌性肺炎、肝炎及HIV感染的机率增加。这其中单核细胞及巨噬细胞先天固有的缺点可能参与了酒精诱导的组织损害。部分针对人类及动物酒精摄入模型的研究展示了一些有关巨噬细胞参与此类调节的证据。
担子类真菌是一种常见、高营养价值的食物，其具有热量低并富含矿物质、维生素、必需氨基酸及纤维素[3-4]。其中部分真菌会产生具有潜在医学效果的物质，这些被称为药用真菌。猴头菇（HEM）是一种在中国被广泛商业化种植的性温和真菌。既往的研究显示，这种真菌对乙醇诱导的大鼠胃溃疡模型具有细胞保护作用。同时，根据本人的前期研究发现，HEM能够对酒精导致的肝损伤形成确定的保护作用[5]。但具体机制尚未明确。为确定HEM是否能够通过抑制炎症反应来发挥其对肝细胞的保护作用，我们探讨了HEM对NF-κB表达的影响。
1.材料和方法
1.1 动物
雌性小鼠（体重20～22g）购自华北理工大学实验动物中心，实验动物饮食及居住状态均符合相关标准，所有动物实验步骤均遵守中华人民共和国科技部相关指南规范。对实验动物做到最小伤害、最小痛苦。
1.2 HEM制备
所用HEM均为符合相关标准之实验室培育。将10g风干菌体置入100ml沸水中30分钟，待其冷却后留取滤液，并以冻干法冷却并浓缩。
1.3 实验设计
小鼠酒精摄入模型制备方法参考Wertheimer等人论文。将9周龄小鼠平均分为5组，每组10只，各组分别为空白对照组、酒精处理组及HEM（不同浓度）+酒精处理组。空白对照组接受等热量麦芽糖饲喂，酒精处理组方案为对小鼠以强饲法接受乙醇（5g/kg 每12小时）3次。HEM+酒精处理组处理方法为在摄入酒精前1小时将以PBS溶解的不同浓度HEM以强饲法给予小鼠（100mg/kg，300mg/kg，500mg/kg）。处理完成后处死实验动物并留取肝脏组织检测炎症细胞及炎症介质水平。
量化NF-κB活化水平：将细胞裂解液加入留取小鼠肝组织匀浆并超声处理后离心。根据制造商说明（上海Yubo生物技术公司）采用Sandwich ELISA Antibody Pair检测肝细胞提取物中Phospho-NF-κB p65(Ser536)以量化NF-κB活化水平。
1.4 统计学分析
实验所得数据均用均数±标准差（x-±s）表示。应用单因素方差分析及t检验进行分析，统计学检验以P＜0.05为差异有统计学意义。
2.结果
在本实验中，我们采用了不同浓度的HEM并分别检测其对NF-κB活化水平的影响，结果如图所示，酒精处理组NF-κB的蛋白活化水平呈显著上升，而经HEM处理后NF-κB的活化水平均呈不同程度的下降，这其中尤以500mg/kg组下调NF-κB活性的作用最为明显。
HEM对NF-κB活性的影响：
如图所示。
图例 HEM对NF-κB蛋白表达的影响。*P＜0.05为差异有统计学意义。
3.结论
NF-κB的激活在炎症反应中起着中心作用，它调控许多与炎症有关的基因表达。正常情况下NF-κB与其抑制性蛋白IκBα结合在一起而没有活性。当多种细胞信号因子作用于IκBα并导致其泛素化降解后会释放出NF-κB，此时NF-κB可转为进入细胞核，启动基因的转录。其中包括许多参与炎症反应的因子[6]。
活化的NF-κB是一种炎症反应过程中的重要转录因子。它在酒精性肝损伤的炎症反应进程中起着突出作用。目前的实验证实了酒精能够活化NF-κB。我们的研究结果证实HEM能够抑制酒精的这种作用。这在HEM对酒精性肝损伤的保护过程中可能发挥着重要作用。
【参考文献】
[1] R.Nordmann,C.Ribiere,H.Rouach,“Implication of free radical mechanisms in ethanol-induced cellular injury,”Free Radical Biology and Medicine,vol.12,no.3,pp.219-240,1992.
[2] M. A. Gyamfi Y.Wan,“Pathogenesis of alcoholic liver disease: the role of nuclear receptors,”Experimental Biology and Medicine,vol.235,no.5,pp.547-560,2010.
[3] J.Ren,J.Shi,C.Han, Z.Liu,and J.Guo,“Isolation and biological activity of triglycerides of the fermented mushroom of Coprinus Comatus,”BMC Complementary and Alternative Medicine,vol.12,article 52,2012.
[4] U.Lindequist,T.H.G.Niedermeyer,and W.-D.Julich,“The pharmacological potential of mushrooms,”Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine,vol.2,no.3,pp.285-299,2005.
[5] Lijun Hao,Yuxi Xie,Guikai Wu,“Protective Effect of Hericium erinaceus on Alcohol Induced Hepatotoxicity in Mice,”Evid Based Complement Alternat Med,2015:418023.
[6] Guha,M.,and N.Mackman.“LPS indcution of gene expression in human monocytes,”Cell.Signal.13:85-94,2001.
论文作者:谢宇曦
论文发表刊物:《心理医生》2016年23期
论文发表时间:2016/12/5
标签：酒精论文; 炎症论文; 小鼠论文; 水平论文; 作用论文; 真菌论文; 抑制论文; 《心理医生》2016年23期论文;