许新征1 张国志2
【摘 要】 目的 检测G蛋白信号调节蛋白RGS4在肝细胞肝癌组织中的表达，研究RGS4在肝癌和癌旁肝组织中的表达差异，分析RGS4与肝癌临床病理特征的关系。方法 收集75例肝癌患者术后肝癌及癌旁正常肝组织，采用免疫组织化学染色、Western blot方法检测RGS4蛋白的表达水平，分析其与肝癌临床病理的关系。结果 免疫组织化学结果显示，RGS4在癌旁肝组织中表达较高，在肝癌组织中下调表达，差异有统计学意义（P<0.05）；Western blot检测结果与免疫组化结果一致。经过分析发现RGS4在肝癌组织中的低表达与患者的性别、年龄、肿瘤的大小、TNM 分期及肝癌的侵袭转移无显著相关，但高分期肝癌组织中RGS4的下调率更高。结论 RGS4在肝癌组织中异常的低表达，可能与肝癌的发生发展相关，也可能是潜在的肝癌分子诊疗靶点。
【关键词】 肝癌； 肝癌组织； G蛋白信号调节蛋白4； 基因表达； 表达下调
【Abstract】 Objective To determine the expression of RGS4 in hepatic cancer and its clinical significance. Methods To determine the expression levels of RGS4 of 75 patients with hepatic cancer by immunohistochemistry and western blot. Results Results of immunohistochemistry and western blot showed that the expression of RGS4 was significantly lower than that in the adjacent pericancerous liver tissues. The difference was statistically significant (P<0.05). Correlation analysis found that the low expression of RGS4 in hepatic cancer tissue was not significantly related to gender, age, tumor size, TNM stage, invasion and metastasis of hepatic cancer. Conclusion RGS4 is abnormal low expression in hepatic cancer tissues, and maybe related to the occurrence and development of hepatic cancer. It may also be a potential target for hepatic cancer diagnosis and treatment.
【Key words】 hepatic cancer; HCC; RGS4; gene expression; down-expression;
肝癌的全球发病率位居恶性肿瘤第五位，其中约 70%-85%属于肝细胞肝癌（hepatocellular carcinoma，HCC）。HCC诱因复杂，起病隐匿，极易转移复发，这是影响HCC术后治疗效果和预后的最大障碍。因此，研究HCC发生发展的分子机制，寻找HCC特异性分子标志物，对于HCC的诊疗及预防具有重要意义。G蛋白信号转导通路在肝组织生长及再生过程中起着重要的作用。G蛋白信号通路调节蛋白（regulator of G-protein signaling，RGS）是一类GTPase 激活蛋白，RGS可以负性调控G蛋白的信号转导过程，进而可以影响细胞内信号转导过程，参与人体的各项生理活动。近年来，普遍认为RGS蛋白是疾病治疗的潜在靶点。RGS4被证明参与了乳腺癌的发生发展过程，但目前尚无RGS4在HCC发生发展过程中的相关报道，本文通过RGS4在肝癌组织中的表达来探讨它是否在HCC发生发展中发挥一定的作用。
材料与方法
1．材料
75例组织标本来源住院手术患者，经术后病理检查诊断为HCC，术前均未进行化疗。
2．方法
采用Barnes法统计分析，按以下标准计分：显色细胞的比例：0（0%）； 1（1%~10%）；2（11%~50%）；3（51%~80%）；4（＞80%）。（0：阴性；1~4：弱阳性；＞4：强阳性）
采用SPSS 17.0软件进行统计学分析，对计数资料进行χ2检验，P < 0.05为差异有统计学意义。
结 果
1．RGS4在肝癌组织及癌旁组织中的表达
染色结果显示正常肝组织细胞染色着色较深，呈深棕色（图1CD）；肝癌组织细胞着色较浅，为浅棕色（图1AB），这显示了RGS4在正常肝组织中表达量较高，而在肝癌组织中RGS4表达量较低，且两者具有明显显著性（P<0.05，表1）。因此，我们认为RGS4在肝癌组织中表达明显下调（图1）。
为进一步证明免疫组化结果，选取6例样本对RGS4的蛋白表达水平进行Western Blot分析，结果显示，RGS4蛋白在正常肝组织中表达较高，而在HCC组织表达量低，这与免疫组织化学染色结果一致（图2）。
讨 论
目前认为RGS可以作为中枢神经系统疾病、心血管疾病以及糖尿病等疾病的潜在治疗靶点。RGS作为G蛋白信号转导的负性调节子可以调节其信号转导的频率和持续时间，而细胞内RGS蛋白的分布和活性则决定了G蛋白信号转导的效率以及不同G蛋白信号转导之间的平衡。G蛋白信号通路对正常肝组织发育及再生起关键作用，同样在HCC的发生发展中也发挥着重要的作用。G蛋白偶联受体（G protein-coupled receptors，GPCRs）在肿瘤的发生发展过程中也发挥重要的作用，GPR87与GPR5都参与了肝癌的发生发展过程 。已经有研究证明RGS家族的某些成员在某些肿瘤中也发挥作用，被抑制表达的RGS2与膀胱癌的发展有关，RGS5、RGS10参与卵巢癌的发生发展过程，RGS6、RGS16与乳腺癌细胞的凋亡与增殖相关，RGS17可以通过cAMP-PKA-CREB信号转导途径促进肺癌细胞的增殖，RGS22能抑制胰腺癌细胞的迁移[21]。RGS4作为RGS调节蛋白大家族中的一员，它在调节G蛋白信号转导通路偶联功能中发挥了重要的作用。因此，我们推测RGS4可能在HCC的发生发展过程中发挥一定的作用。
通过对75例病例的研究发现，肝癌组织中的RGS4表达比正常肝组织中的明显下调，Ⅲ-Ⅳ期的患者肝癌组织的RGS4的下调率（70%）要比Ⅰ-Ⅱ期的下调率（53.33%）高。因此，我们推测RGS4可能与HCC的发生发展有关，可能对肝癌肿瘤细胞有抑制作用。但是关于RGS4参与HCC发生发展过程的分子机制还尚未明确，我们猜测可能是由于RGS4调节G蛋白信号转导的频率和持续时间而影响了肝的发育，影响了HCC的发生发展。也可能是RGS4通过影响细胞凋亡而影响了HCC的发生发展过程。但RGS4的具体作用及其分子机制还需要继续深入的研究及探讨。
本研究发现RGS4在肝癌组织中下调表达，暗示了它可能参与了HCC的发生发展。这为HCC发病机制的研究提供了新的思路，为肝癌的预防治疗提供了新的分子靶点，但RGS4在HCC中发挥的具体作用及其分子机制还需要进一步的研究及探讨。
参考文献
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论文作者:许新征1,张国志2
论文发表刊物:《中华临床医师杂志》(电子版)2016年2月第4期
论文发表时间:2016/7/14
标签：肝癌论文; 组织论文; 蛋白论文; 发生论文; 信号论文; 作用论文; 发展过程论文; 《中华临床医师杂志》(电子版)2016年2月第4期论文;