右江民族医学院重金属与氟砷毒物研究实验室 广西百色 533000
摘要：目的 探讨中药梅花钻提取液对衰老糖尿病模型肾脏病理及部分生化指标的干预作用.方法 用链佐霉素（STZ）和D-半乳糖及亚硝酸钠溶液联合给小鼠作腹腔注射，建立拟衰老糖尿病模型.然后用中药梅花钻等提取液分别给造模小鼠实验1组、实验2组、实验3组灌服，同时设立不灌药的模型组和正常组。测定造模前、后和灌药前、后各组小鼠血糖及其他生化指标，实验结束，取肾脏作病理检查，取大脑匀浆，测定（ ），对结果作对比分析。结果 肾脏病理检查表明，正常组肾脏：肾小球结构正常，肾小球内无系膜细胞、内皮细胞及脏层上皮细胞增生，系膜区无增宽和沉积物；肾小管上皮无变性、坏死，肾间质无纤维增生和炎性细胞浸润；模型组肾脏：弥漫性肾小球系膜区增宽、系膜基质增多，肾小球内毛细血管内皮细胞轻度增生，毛细血管腔狭窄、关闭，部分肾小球呈节段性硬化、血管袢与球囊壁粘连；近曲小管上皮细胞肿胀、胞浆空泡变性；治疗组肾脏：与模型组基本相似，但较轻。灌药前，正常组血糖明显低于实验组（P<0.01），差异有统计学意义；灌药后各组血糖与正常组比较，P<0.05，P<0.01，差异有统计学意义，治疗前后血糖比较，正常组无变化，治疗2组下降，其他组升高；治疗后，甘油三酯（TG）正常组、治疗2组明显低于其他各组；大脑超氧阴离子自由基（ ）淸除率（%），正常组明显高于其他各组（P<0.01），模型组明显低于其他各组（P<0.01）。结论 治疗2组<广西梅花钻提取液>能较好的降低衰老糖尿病模型小鼠血糖和TG，各治疗药均能在一定程度保护肾组织，提高脑组织超氧阴离子自由基（ ）淸除率（%）。
关键词：衰老糖尿病；肾病理；血糖；自由基（ ）；
【Abstract】Objective To investigate interventional effect of kadsura heteroclita（Roxb）craib extract on renal pathology and some biochemical indexes in aging diabetes mouse models.Methods Combination of streptozotocin（STZ），D-galactose and sodium nitrite solution was provided to the mice by intraperitoneal injection.Aging diabetes mouse models were established，and then experimental group one，experimental group two and experimental group three were administered by gavage with kadsura heteroclita（Roxb）craib extract respectively.In the meantime，model group（without being drenched with Chinese plum extract）and normal mouse group were established.Blood glucose and other biochemical indexes of the mice before and after modeling，before and after treatment were respectively tested among groups.After finishing the experiment，the kidneys were removed for pathological examination，and the brain homogenates were taken to test superoxide anion free radicals（ ）.And make comparative analysis on the results.Results Renal pathological examination in the normal mouse group showed that glomerulus structure was normal，without proliferation of glomeruli mesangial cells，endothelial cells and visceral epithelial cells in the glomerulus，and without broadening and sediments in the mesangial area，without renal tubular epithelial degeneration and necrosis，and without fibroplasia and inflammatory cell infiltration in renal interstitium.In addition，renal pathological examination in the model group showed that diffuse glomerulus broadened，and mesangial matrix increased in mesangial area glomerulus.Slight hyperplasia of capillary endothelial cell in glomerulus was found.Blood capillary lumen narrowed and closed，some glomerulus showed segmental glomerulosclerosis，and adhesion of vascular loops and sacculus wall was found.Proximal convoluted tubule epithelial cells showed swelling and cytoplasm vacuolar degeneration.Besides，kidneys of the mice in the treatment groups were similar to that in the model group，but they were slighter in the treatment groups.Blood glucose of the normal group was obviously lower than those of the experimental groups before drenching，and differences were statistically significant（P<0.01），differences of blood glucose of other groups and the normal group after drenching were statistically significant，P<0.05，P<0.01.Blood glucose of the normal group no change before and after treatment，while that of the experimental group two decreased and those of the other groups increased.After treatment，triglyceride（TG）of the normal group and the experimental group two were significantly lower than those of the other groups.Clearance rate（%）of superoxide anion free radical（ ）in the brain in the normal group was significantly higher than those of the rest groups（P<0.01），and that of the model groups was obviously lower than the rest groups（P<0.01）.Conclusion Kadsura heteroclita（Roxb）craib extract of Guangxi can effectively reduce blood glucose and TG of aging diabetes mouse models.The chinese plum can protect nephridial tissue and increase clearance rate（%）of superoxide anion free radical（ ）in a certain degree.
【Key words】Aging diabetes；Renal pathology；Blood glucose；Superoxide anion free radical（ ）
糖尿病是以血糖升高为特征的全身代谢性疾病。临床研究发现，糖尿病患者患上老年痴呆症的风险远高于非糖尿病患者，推测两者间可能存在密切关系，因而有衰老糖尿病之称（1），患有糖尿病之后再患上痴呆症，其病情和治疗效果均增加复杂性，直得深入研究。本文利用小鼠为研究对象，用D-半乳糖+亚硝酸钠作腹腔注射两周后，再注射链脲菌素5日、3日，测定血糖，建立衰老糖尿病模型，然后用中药山麒麟、广西梅花钻、广东梅花钻水提取液灌胃治疗，测定灌胃前后血糖、结束时的血清甘油三酯（TG）、脑匀浆超氧阴离子自由基（ ）清除率（%）、取肾脏作病理检查，对比分析其效果。
1.材料与方法
1.1 试剂 链脲菌素（STZ）（sigma产品），D半乳糖（上海伯奥生物科技有限公司）；亚硝酸钠，氯化钠，柠檬酸，柠檬酸三钠，硼，均为国产分析纯；邻甲苯胺，冰醋酸（分析纯，sigma产品）；甘油三酯（TG）、总胆固醇TC）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）、丙二醛（MDA），分别购自四川成都迈克科技有限公司，凯基生物公司，南京建成生物工程研究所。
1.2中药（干药材）梅花钻，分广西梅花钻和广东梅花钻两种，分别产于广西和广东，由广西南宁市药店购买。分别提取，称量，提取工艺流程：放药锅内加热水提取液-乙醇沉淀-过滤去沉淀-回收乙醇-药液定容为0.2g/ml生药，分装，高压105℃灭茵30分钟，取出冷却放冰箱保存。山麒麟，产于广西，南宁市药店购买，提取工艺流程同前。
1.3 动物 小白鼠63只，昆明种，鼠龄3个月，健康，雌雄各半，购自右江民族医学院动物室，动物实验许可证：SYXK桂2011-0010，动物生产许可证：SCXK桂2012-0003.购自右江民族医学院动物室标准动物饲料喂养.称体重，分笼喂养，每笼5只，编号，雌雄分开，自由饮用自来水，放独立式鼠笼饲养箱内饲养（广东珠海市再鑫仪器有限公司产品），空气过滤净化，室温空调26-28℃。
1.4衰老糖尿病模型的建立[1]，小白鼠63只，除10只作正常组外，其他53只用1.2% D-半乳糖和1.8%亚硝酸钠水混合腹腔注射，D半乳糖用生理盐水溶解为1.2%，剂量按120mg/kg体重/日，1.8%亚硝酸钠水溶解，剂量按90mg/kg体重/日，连续15日后加注射链脲菌素[3]，剂量按55mg/kg体重/日，用PH4.2的0.1mol/L柠檬酸缓冲液溶解，给小白鼠腹腔注射，连续5日，停药5日，再连续注射3日上述3种药物。测定第一次和第二次停药5天后空腹血糖含量。血糖含量 以大于≥11.1mmol/L为造模成功[4]。
1.5动物实验 造模成功小白鼠分成治疗1组、治疗2组、治疗3组、模型组、另设一组为正常组.治疗1组用0.2g/ml山麒麟，剂量用成人剂量10g/50kg体重/日折算，乘10倍给药灌胃，每日一次，连续10日；治疗2组用广西梅花钻，治疗3组用广东梅花钻，剂量同前；模型组和正常组用等体积蒸馏水代替，方法相同.测定造模前后和灌药后血糖.实验结束，从眼球取血，测定血清TG。处死动物，取大脑匀桨用生理盐水制成10%匀桨，测定 清除率。
1.6测定方法 血糖测定，从小白鼠尾巴取静脉血20μl，用邻甲苯胺法测定（6）；甘油三酯（TG）用GPO-PAP法测定。具体操作按试剂盒说明书。 清除率用过硫酸铵与DEMED反应产生 ，并经化学反应转化成黄色化合物，比色测定，参考文献[1，2]。
1.7统计分析：采用SPSS（13.0）软件进行统计处理，方差分析与q检验；数据以（ ）表示。
2.结果
2.1各组肾脏病理检查结果，结果显示，
正常组肾脏：肾小球结构正常，肾小球内无系膜细胞、内皮细胞及脏层上皮细胞增生，系膜区无增宽和沉积物；肾小管上皮无变性、坏死，肾间质无纤维增生和炎细胞浸润。
模型组肾脏：弥漫性肾小球系膜区增宽、系膜基质增多，肾小球内毛细血管内皮细胞轻度增生，毛细血管腔狭窄、关闭。部分肾小球呈节段性硬化、血管袢与球囊壁粘连；近曲小管上皮细胞肿胀、胞浆空泡变性。
治疗1组肾脏：弥漫性肾小球系膜区增宽、系膜基质增多，肾小球内毛细血管内皮细胞轻度增生，毛细血管腔狭窄、关闭。病变程度较模型组轻。
治疗2组肾脏：弥漫性肾小球系膜区增宽、系膜基质增多，肾小球内毛细血管内皮细胞轻度增生，毛细血管腔狭窄、关闭。部分肾小球呈节段性硬化、血管袢与球囊壁粘连；近曲小管上皮细胞肿胀、胞浆空泡变性。但病变程度较模型组轻。
治疗3组肾脏：弥漫性肾小球系膜区增宽、系膜基质增多，肾小球内毛细血管内皮细胞轻度增生，毛细血管腔狭窄、关闭。部分肾小球呈节段性硬化、血管袢与球囊壁粘连；近曲小管上皮细胞肿胀、胞浆空泡变性。病变程度比治疗2组轻。
治1组肾（x400） 治2组肾（x400）治3组肾（x400）
2.2灌药前、后各组血糖、TG、 清除率（%）测定结果，结果显示，灌药后，除治疗2组下降，正常组无明显变化外，其余三组血糖含量，仍持续升高。TG治疗1组最高，正常组最低，治疗2组接近正常组，治疗3组接近治疗1组； 清除率，与正常组比较，▲▲P<0.01，与模型组比较，★★P<0.01，差异有统计学意义。见表1。
方差分析：血糖，灌药前，与正常组比较，▲▲P<0.01，差异有统计学意义；治疗后，与正常组比较，△P<0.05，△△P<0.01，差异有统计学意义；TG，组间比较，TG，与治疗1组比较，△P<0.05，△△P<0.01，与正常组比较，▲P<0.05，差异有统计学意义；脑 清除率，与正常组比较，▲▲P<0.01，与模型组比较，★★P<0.01，差异有统计学意义；
3讨论
造模后造模组血糖含量比造模前平均含量明显升高，血糖、血脂（TG）组间比较造模组也高于正常组，而大脑 清除率造模组却明显低于正常组，表现抗氧化能力下降的衰老状态，说明用D-半乳糖+亚硝酸钠+链脲菌素联合建立衰老糖尿病是成功的。治疗后，正常组血糖无明变化，血脂（TG）较低，实验2组血糖、血脂（TG）有下降外，其余各组未见下降，反而有所升高，包括模型组，说明糖尿病高血糖，血糖代谢紊乱，也会导致脂代谢紊乱，血脂升高（5），实验结果显示实验2组（广西梅花钻）有较明显的降糖降脂作用（9）；各治疗组大脑 清除率均明显高于模型组，说明各实验组能明显提高机体抗氧化能力（1），所用中药起抗衰老作用（7）。
肾脏病理组织检查表明，与正常组比较，模型组与治疗各组肾组织均有不同程度损伤，以模型组较重，与生化指标相一致。说明高血糖对肾组织有损伤作用（8），但各治疗组治疗后有一定好转，起到保护肾组织作用，以实验2组（广西梅花钻）效果较好。
参考文献：
[1]王娜，黄春燕，黄丽萍，等.衰老糖尿病（DM）小鼠模型建立的实验研究[J].实用糖尿病杂志，2015，11（1）：60-61
[2]李韬，陶吉英，黄广燕，等.用链佐霉素（STZ）建立2型糖尿病小鼠模型及中药治疗效果的研究[J].实用糖尿病杂志，2012，8（1）：18-20
[3]李聪然，游雪甫，蒋建东.糖尿病动物模型及研究进展[J].中国比较医学杂志，2005，15（1）：59-61
[4]廖蓉，潭毅，王鸿雏，等.糖尿病研究与动物模型[J].实验动物科学与管理，2001，18（2）：36-38
[5]邓正照，钱荣立.糖代谢脂代谢异常与治疗[J].中国糖尿病杂志，2002，10（2）：125
[6]安乙敏主编.生化检验学（M）.成都：四川科学技术出版社出版，1990：68
[7]何胜，黄杰林，郭海艳，等.中药对老年痴呆症小鼠干预作用观察*，中国公共卫生，2013，
[8]廖钰，夏宁.糖尿病肾病发病机制研究进展[J].医学综述，2011，17（22）：3453-3455
[9]何胜，宁梅，邓晓珍，等.梅花钻对衰老糖尿病小鼠模型生化指标的影响[J].实用糖尿病杂志，2015，11（3）：57-59
作者简介：凌霄雁，女，1991年生，2010年临床医学本科毕业，右江民族医学院附属医院住院医生；何胜，通讯作者.右江民族医学院药理教研室副教授
论文作者:凌霄雁,黄炳臣,宁梅,林美情,钟涓,张子丽,邓晓
论文发表刊物:《健康世界》2015年30期供稿
论文发表时间:2016/4/12
标签：肾小球论文; 血糖论文; 模型论文; 肾脏论文; 糖尿病论文; 小鼠论文; 毛细血管论文; 《健康世界》2015年30期供稿论文;