王艳[1]2001年在《血管内皮细胞生长因子（VEGF）在大鼠糖尿病发病中的意义》文中研究说明目的：探讨血管内皮细胞生长因子（VEGF）在糖尿病大鼠中表达及其临床意义。方法：采用STZ单剂（65mg/kg）腹腔注射建立糖尿病大鼠动物模型，并设正常对照组。定期观察血糖、血脂、血肌酐、转化生长因子-β（TGF-β_1）、VEGF及24小时尿微量白蛋白排泄率（UAF）。留取动物模型肾组织进行光镜、电镜检查，并进行免疫组织学TGF-β_1、VEGF的半定量分析。结果：①糖尿病大鼠组第4、8周时尿白蛋白排泄率、血糖、TGF-β_1、VEGF水平均明显高于正常对照组，肾组织中TGF-β_1、VEGF表达明显高于正常对照组，肾组织光镜、电镜检查出现早期糖尿病肾病典型的病理改变。②随着24h尿微量白蛋白排泄率增高，TGF-β_1及VEGF的表达亦增强。结论：①糖尿病大鼠模型建立第4、8 周时出现了典型的早期糖尿病肾病的病理改变。②糖尿病大鼠早期VEGF表达增强。③VEGF作为特异性血管内皮细胞生长因子，较TGF-β_1可能更直接参与了糖尿病肾病的发病机制。
佚名[2]2004年在《眼底病专题》文中指出S1-01脉络膜新生血管膜治疗新进展严密四川大学附属华西医院眼科S1-02年龄相关性黄斑变性发病机制的研究进展Shikun He(何世坤)Department of Pathology and Ophthalmology,Keek School of Medicine at the University of Southern California,Doheny Eye Institute,Los Angeles
殷蓓[3]2002年在《血管内皮生长因子在脂质肾毒性作用中的实验研究》文中指出目的：临床和实验研究均证实，高脂血症在肾脏疾病的发生和发展中起重要作用。在各种肾脏疾病所致的脂代谢紊乱中，低密度脂蛋白(LDL)和氧化低密度脂蛋白(Ox-LDL)是导致动脉粥样硬化的主要危险因素。近年来研究发现，血管内皮生长因子(VEGF)在动脉粥样硬化的发生过程中起着不可忽视的作用，而肾小球硬化与动脉粥样硬化的病理生理机制十分相似，故VEGF可能也是脂质肾毒性的重要介质之一。本课题拟在细胞和动物模型水平研究VEGF是否在系膜细胞增殖、细胞外基质的病理性积聚和肾小球硬化的形成过程中起重要作用，探讨VEGF及其受体的表达与肾小球硬化发病机制之间的关系。方法：本课题分为体内实验和体外实验。体内实验建立实验性高胆固醇血症大鼠模型，分别于4周、8周和12周时取出肾脏，常规生化法检测大鼠血脂、肾功能水平及其24h尿蛋白排泄量，四种常规染色并进行。肾脏病理半定量分析。采用免疫组化法观察VEGF在肾组织内表达的强度，以及逆转录-聚合酶链式反应．(RT-PCR)法测定肾组织内VEGFmRNA的表达水平。体外实验以MSC为研究对象，分别予以不同浓度的LDL或Ox-LDL共同培养12～48h，采用流式细胞术等方法，观察VEGF对MSC增殖动力学的影响；ELISA双抗体夹心法和免疫组化法检测VEGF分泌含量及VEGF蛋白的表达部位：ELISA法检测LDL和Ox-LDL对MSC分泌TGF-β1以及合成FN的影响；RT-PCR法检测VEGFmRNA在MSC中的表达，并确认其量效关系，观察VEGF受体阻断剂PhilinopsideA对MSC增殖及合成分泌TGF-β1和FN的影响。结果：1． 体内实验：实验第2周起，实验组(B组)TC、TG显着升高，12周时血脂水平最高，LDL呈现类似变化规律。实验组大鼠24h尿蛋白排泄量在实验第2和第6周时无明显差异，随实验进程至12周时，较正常对照组(A组)显着增高。两组大鼠的血清BUN、Cr在整个实验过程中无明显差异。8周时实验组大鼠肾组织光镜检查可见系膜细胞增生，基质增多。肾小管上皮细胞出现空泡变性，间质可见灶性炎性细胞浸润。12周时病理改变最为明显，部分肾小球呈分叶状。肾小管上皮细 — — 胞可见核固缩、坏死、脱落，可见片状间质纤维化伴炎性细胞浸润。血管管壁增 ”厚明显，小动脉肌层增厚，管腔狭窄。对各组大鼠肾组织中肾小球病变进行定量 分析，结果显示实验组大鼠肾小球内细胞数显着高于对照组。大鼠肾组织VEGF 兔疫组化法结果显示，VEGF在实验组大鼠肾组织中表达区域和强度随实验进程 明显增加，主要分布在肾小球脏层、壁层上皮细胞、系膜区和近端小管上皮细胞， 小动脉内膜也可见VEGF阳性表达。RT．PCR检测结果示，实验组大鼠肾组织中 VEGFrnRNA的表达随实验进程呈明显增多趋势。 2．体外实验： MSC与不同浓度的LDL或OX毛DL共同培养12d4和48h后，增殖指数o） 显着增高，LDL和 OX－LDL呈时间依赖性和浓度依赖性地促进细胞DNA合成。 浓度为 100～200 P g／mg／m OXLDL刺激 MSC 48h后，存在凋亡峰，可能是山于大剂 量Ox毛DL具有细胞毒性作用。VEGF受体阻断剂PhilinopsideA可抑制LDL和 。OX士DL对MSC的促增殖作用，抑制率同药物浓度和作用时间呈正相关。ELISA 双抗体夹。O法结果显示，不同浓度 LDL和 OX十DL刺激MSC可促进 VEGF分泌 ”合成，且具有剂量依赖和时间依赖效应。兔疫组化法分析表明，VEGF蛋白随着 LDL和OX毛DL浓度的增加和时间的延长逐渐增多，表现为细胞胞浆内棕黄色颗 粒阳性表达信号逐渐增强。同样，RTPCR法检测结果也显示，LDL和 OX毛DL 能呈剂量依赖和时间依赖性促进 MSC VEGF一A的表达。LDL和 OX－LDL刺 激MSC后，TGF－pl和FN的含量显着增多，并具有时间及剂量依赖效应，VEGF 受体阻断剂PhilillopsidCA可抑制MSC分泌TGF pl及FN，该作用具有量效和时 效变化。 结论：LDL和 OX十DL显着促进MSC的增殖，并具有剂量依赖和时hJ依赖 效应。高浓度LDL和 Ox－LDL具有细胞毒性作用，抑制MSC的增殖。LDL和 OX毛DL呈剂量依赖和时间依赖性促进MSC合成分泌VEGF、TGF十；及FN，并 促进VEGFmRN的表达，进而加速细胞外基质的沉积，促进肾小球硬化的发生 发展。PhilinopsideA能抑制 ＊L和 Ox工DL对MSC的促增殖作用，同时也可抑 制MSC合成分泌TGF小 及FN，进一步说明VEGF及其受体在肾小球硬化发病 ’机制中起关键作用。建立实验性高胆固醇血症大鼠模型，2周后出现TC、TG、 LDL及尿蛋白排泄量进行性增高，并逐渐出现肾脏形态学的病变。免疫组化和 RT．PCR结果显示，高脂饮食能促进大鼠肾组织中VEGF蛋白表
谢婷玉[4]2016年在《臭氧对糖尿病大鼠视网膜氧化应激、炎症相关因子及Müller细胞功能的影响》文中研究表明目的:通过对糖尿病大鼠模型进行臭氧灌肠治疗,观察各组大鼠视网膜中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)及一氧化氮(NO)的含量,从而评估臭氧对糖尿病大鼠视网膜氧化应激的作用;通过对各组大鼠视网膜及血清中血管内皮生长因子(VEGF)、肿瘤坏死因子(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)及白细胞黏附因子-1(ICAM-1)含量的检测来评估臭氧对糖尿病大鼠视网膜及血清中炎症因子的作用;通过对各组大鼠视网膜细胞的凋亡情况及检测谷氨酰胺合成酶(glutamine synthetase,GS)、L-谷氨酸/L-天门冬氨酸转运体(L-glutamate/L-aspartate transporter,GLAST)的表达量来评估臭氧对糖尿病大鼠视网膜Müller细胞功能的影响。方法:SD雄性大鼠70只,空白组15只,余55只使用链脲佐菌素一次性腹腔注射造模,以二次随机血糖≥16.7mmol/L为成模标准;成模后随机分组为模型组与臭氧组,臭氧组给浓度为50ug/kg的臭氧进行灌肠治疗,3次/周,共8周。治疗结束后叁组大鼠在腹腔麻醉下摘除眼球取视网膜并液氮冷冻后置于-80°冰箱备用;腹主动脉取血,离心取上清液置于-80°冰箱备用。使用一步法检测视网膜NO含量;黄嘌呤氧化酶法(羟胺法)测定SOD活力;TBARS比色法测定丙二醛的含量。ELISA法检测血清中VEGF、TNF-α、IL-1β、IL-6及ICAM-1的含量;使用RT-PCR法检测各组视网膜中VEGF的相对表达量。使用RT-PCR法检测视网膜中GS及GLASTm RNA的相对表达量。结果:55只造模大鼠中45只大鼠成模(成模率81.8%)。造模成功后模型组体重平均下降37.8±15.6g,臭氧组体重平均下降33.8±15.3g,而二组血糖均上升,提示造模成功。SOD活力显示模型组较空白组明显的下降,而臭氧组SOD活力较模型组升高,但仍低于空白组,且叁组间有统计学差异(F=12.146,P<0.001),而两两比较也有统计学差异(P<0.05);MDA检测结果显示模型组较空白组MDA含量有所增加,而臭氧治疗组下降水平接近空白组,而且叁组间差异有统计学意义(F=43.536,P<0.001),两两比较后显示空白组同臭氧组无统计学差异(P>0.05)。模型组NO含量较空白组有下降,而臭氧治疗组较空白组下降明显,叁组间有统计学差异(F=12.146,P<0.001),两两比较显示模型组NO水平同空白组无统计学差异(P>0.05),而模型组同臭氧组差异有统计学意义(P<0.05);血清中各炎症因子均可在空白组检测出不同的含量,但模型组各炎症因子的含量不同程度的升高,而臭氧治疗后各组炎症因子均有不同程度的下降,且各因子叁组间均有统计学差异(VEGF:F=176.473;ICAM-1:F=46.280;IL-1β,F=47.480;IL-6,F=85.424;TNF-α:F=103.430,P值均<0.001),两两比较后显示空白组中ICAM-1及IL-6含量同臭氧组无统计学差异(P>0.05);ELISA法检测结果显示模型组VEGF与ICAM-1在视网膜中的含量低于血清的含量,而IL-1β、TNF-α及IL-6在视网膜中的含量明显高于血清中,且差异有统计学意义(P<0.05)而使用RT-PCR法检测视网膜中VEGF含量显示其在空白组、模型组及臭氧组都表现为平行的变化。光镜观察显示相对于空白组,模型组神经视网膜凋亡明显增加,而臭氧组较模型组凋亡有所减少,凋亡指数也得出同样的结果,且叁组间差异有统计学意义(F=89.070;P<0.001);两两比较也显示均有统计学差异(P<0.001);GS m RNA与GLAST m RNA相对表达量在模型组较空白明显的下降,但臭氧治疗组较模型组有所提高,但仍低于空白组,叁组间差异有统计学意义(GS:F=38.711,GLAST:F=33.441,P<0.05),两两比较后差异也有统计学意义(P<0.05)。结论:臭氧对2月龄糖尿病大鼠血糖及体重无明显的影响;臭氧可以有效的提升糖尿病大鼠视网膜SOD活力、降低氧化应激产物MDA的含量;同时臭氧降低糖尿病大鼠视网膜中NO的含量。臭氧可以有效的缓解糖尿病大鼠视网膜的氧化应激状态;臭氧灌肠治疗降低糖尿病大鼠血清中VEGF、TNF-α、IL-1β、IL-6及ICAM-1的含量;亦可以有效的降低视网膜中VEGF的含量,产生有效的抗炎作用。臭氧灌肠治疗可以有效的减轻视网膜细胞的凋亡,提高GS及GLASTm RNA的相对表达量,改善Müller细胞功能,恢复神经视网膜的功能。
赵占正[5]2010年在《腹膜血管新生引起腹膜超滤衰竭的机制及其阻断干预实验》文中认为背景和目的终末期肾脏病(end stage renal disease, ESRD)已成为21世纪全人类面临的主要公共健康问题之一。腹膜透析(peritoneal dialysis, PD)是终末期肾脏病有效的治疗方法,具有保护残余肾功能、花费相对血液透析低等优势。但由于腹膜透析的并发症,如腹膜炎、营养不良、腹膜超滤衰竭,尤其透龄4-5年的患者,腹膜超滤衰竭发生率高达36%,已经成为腹膜透析患者被迫退出腹透的主要原因之一,因此探讨并干预腹膜透析超滤衰竭的发生与发展非常重要。目前认为超滤衰竭的发病机制主要有叁方面的因素：1、腹膜血管表面积的不断增加：约50%到75%的超滤衰竭是由于腹膜血管新生导致腹膜血管表面积的不断增加,使得小分子溶质转运加快致腹腔渗透压递度迅速消失,使腹膜超滤功能丧失；2、因为水通道蛋白失功能；3、腹膜间质/淋巴系统吸收增加。腹膜血管新生可能是超滤衰竭发生的主要机制,调节血管新生的诱导剂有血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、成纤维细胞生长因子(fibroblast growth factor,)等其它可溶性因子；抑制剂包括血管新生抑制素、内皮细胞抑制素(endostain, ES)等。目前认为血管生成时受到诱导因子和抑制因子的双重调节,正常情况下处于平衡状态,一旦诱导剂占优势,则激活血管长出新生血管,反之则使血管硬化。长期行腹膜透析的病人在其腹膜透析液中发现一些血管诱导剂增加,如VEGF、bFGF等,而且目前公认为血管内皮生长因子在腹透失超滤的发病机制中,是促进血管新生的主要因子,在血管新生中居于主导地位,并发现它在腹膜毛细血管内皮细胞和腹膜间皮细胞(peritoneal mesothelial cells, PMc)有阳性表达,但这些导致血管新生的因子表达增加的具体机制目前仍不清楚。综上所述我们有必要探讨腹膜血管新生在腹透失超滤发生机制所起的作用并进行干预研究,以便为延缓腹透失超滤的发生提供理论根据和实验依据,从而为多环节防治腹膜透析超滤衰竭的发生发展提供有效的治疗手段。因此本研究共分叁部分：第一部分腹膜血管新生引起腹膜超滤衰竭的动物实验研究构建5/6肾切除尿毒症大鼠模型,进而构建尿毒症腹膜透析大鼠模型。检测大鼠腹膜组织VEGF、bFGF及ES基因和蛋白质水平的表达变化,以及检测腹膜组织毛细血管密度(MVD),探讨腹膜新生血管引起大鼠腹膜透析超滤衰竭的机制,为了下一步干预实验打好理论基础。第二部分腹膜血管新生引起腹膜超滤衰竭的临床研究留取正常对照者(取自非尿毒症的腹部择期手术患者,排除任何可累及腹膜的疾病)、尿毒症非透析患者(尿毒症患者首次腹透置管时)以及腹透超滤衰竭患者(尿毒症患者拔出腹透管时)的腹膜活检标本。检测血管内皮生长因子、碱性成纤维生长因子和内皮抑素基因和蛋白质水平的表达,检测腹膜组织毛细血管密度。为下一步干预腹膜透析超滤衰竭的研究奠定理论基础。第叁部分重组人内皮抑素(恩度)干预腹膜血管新生的动物实验研究应用重组人内皮抑素(恩度),干预大鼠腹膜透析腹膜血管新生,从而起到抑制腹膜血管新生,干预腹膜透析超滤衰竭的作用,为下一步治疗临床腹膜透析患者超滤衰竭提供实验根据。第一部分腹膜血管新生引起腹膜超滤衰竭的动物实验研究一.资料与方法SD雄性大鼠42只,体重180-200g。构建5/6肾切除尿毒症大鼠模型,进而构建尿毒症腹膜透析大鼠模型。实验设立正常组(n=8只),手术组叁组：尿毒症组(n=8只)、1.5%腹膜透析组(n=8只)、4.25%腹膜透析组(n=8只)。对各透析组大鼠进行规律腹透,每日每只20ml腹透液从大鼠颈部腹透管注入,腹腔保留2h后放出液体,规律透析28天后,取各组大鼠新鲜腹膜组织分别做逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)及组织免疫组化,检测VEGF、bFGF及ES基因和蛋白质水平的表达变化,以CD34染色检测腹膜组织毛细血管密度(MVD),并进行统计学比较和基因水平的相关性分析,选取a=0.05作为差异具有统计学意义的检验水准。二.结果1. VEGF、bFGF及ES在正常大鼠腹膜组织中呈阳性表达。2.与正常组相比较,尿毒症组、1.5%腹膜透析组、4.25%腹膜透析组,VEGF、bFGF在基因及蛋白的表达水平均升高,差异具有统计学意义(p<0.05)。3.正常组、尿毒症组、1.5%腹膜透析组及4.25%腹膜透析组大鼠腹膜组织中均有ES mRNA表达。其中正常组为0.47±0.05；尿毒症组为0.45±0.04；1.5%腹膜透析组为0.46±0.04；4.25%腹膜透析组为0.47±0.03；各组间表达差异无统计学意义(P>0.05)。4.正常组大鼠腹膜组织中ES蛋白表达积分0分；尿毒症组大鼠腹膜组织中积分2分；1.5%腹膜透析组大鼠腹膜组织中积分4分；4.25%腹膜透析组大鼠腹膜组织中呈高表达,积分9分。5.与正常组相比较,尿毒症组、1.5%腹膜透析组、4.25%腹膜透析组大鼠腹膜组织中MVD的表达均增高,组间差异均有统计学意义(p<0.05)。第二部分腹膜血管新生引起腹膜超滤衰竭的临床研究一.资料与方法留取正常对照者、尿毒症非透析患者以及腹透超滤衰竭患者的腹膜活检标本。将所留取的腹膜标本分别行逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和组织免疫组化染色,检测血管内皮生长因子、碱性成纤维生长因子和内皮抑素基因和蛋白质水平的表达。行CD34染色,计数腹膜组织毛细血管密度。二.结果1. VEGF、bFGF及ES的mRNA在各组人腹膜组织均有表达。与正常相比较,尿毒症非透析组、PD组腹膜组织VEGF、bFGF mRNA表达上调,差异具有统计学意义(P<0.05)；与尿毒症非透析组相比较,PD组腹膜组织VEGF、bFGF mRNA表达上调,差异具有统计学意义(P<0.05)。ES mRNA各组表达无差异。2.各组腹膜组织均表达VEGF、bFGF及ES。与正常相比较,尿毒症非透析组、PD组腹膜组织VEGF、bFGF、ES蛋白表达上调,差异具有统计学意义(P<0.05)；与尿毒症非透析组相比较,PD组腹膜组织VEGF、bFGF、ES蛋白表达上调,差异具有统计学意义(P<0.05)。3.MVD计数结果在正常组可见新生毛细血管较少或无,与正常组相比较,尿毒症非透析组、腹膜透析超滤衰竭组人腹膜组织MVD计数增加(P<0.05),差异具有统计学意义。第叁部分重组人内皮抑素(恩度)干预腹膜血管新生的动物实验研究一.资料与方法清洁级雄性SD大鼠43只,体质量为180-200g。构建5/6肾切除尿毒症大鼠模型,进一步构建尿毒症腹膜透析大鼠模型。实验分为A：对照组(正常组：n=8只),B：尿毒症非透析组(5/6肾切除组：n=8只)、C：尿毒症腹膜透析组(生理盐水对照组：n=8只)、D1：重组人内皮抑素治疗1组(10mg/kg治疗组：n=8只),D2：重组人内皮抑素治疗2组(40mg/kg治疗组：n=8只)。对C、D1、D2组大鼠进行规律腹透,每日4.25%的腹透液从大鼠颈部腹透管注入,腹腔保留2h后放出液体,规律透析28天。D1、D2组(重组人内皮抑素治疗1、2组)在规律腹透期间,隔天皮下注射重组人内皮抑素,连续给药14次,直至腹透第28天结束,留取各组大鼠新鲜腹膜组织,采用免疫组织化学及逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)的方法检测腹膜组织VEGF基因及蛋白水平的表达,用CD34染色观察各组大鼠腹膜血管数并计算腹膜组织毛细血管密度(Microvessel Density, MVD),所得结果进行统计学分析,选取α=0.05作为差异具有统计学意义的检验水准。二.结果1.与正常组相比较,尿毒症组、尿毒症腹膜透析组,VEGF基因及蛋白水平的表达均升高(p<0.05),差异具有统计学意义。与尿毒症腹膜透析组相比较,重组人内皮抑素治疗1组、重组人内皮抑素治疗2组,VEGF基因及蛋白水平的表达均降低(p<0.05),差异具有统计学意义。与重组人内皮抑素治疗1组相比较,重组人内皮抑素治疗2组,VEGF-A基因及蛋白水平的表达均降低(p<0.05),差异具有统计学意义。2.与正常组相比较,尿毒症组、尿毒症腹膜透析组,MVD的值均增加(p<0.05),差异具有统计学意义。与尿毒症腹膜透析组相比较,重组人内皮抑素治疗1组、重组人内皮抑素治疗2组,MVD的值均降低(p<0.05),差异具有统计学意义。与重组人内皮抑素治疗1组相比较,重组人内皮抑素治疗2组,MVD的值降低(p<0.05),差异具有统计学意义。3. VEGF基因水平的表达与MVD值呈现正相关,VEGF和尿毒症长期腹透时腹膜血管新生相关。结论1.大鼠和人的腹膜组织均表达VEGF、bFGF及ES,体内尿毒症环境和非生理性腹透液的刺激可以上调腹膜组织VEGF、bFGF基因和蛋白的表达。2.尿毒症腹膜透析大鼠和人腹膜组织VEGF、bFGF基因及蛋白水平表达升高,可能在长期透析所致腹膜组织新生毛细血管形成过程中发挥一定的促血管新生作用,是腹透失超滤发生的重要因素之一。3.体内尿毒症毒素和非生理性腹透液刺激可使大鼠和人的腹膜组织ES蛋白表达升高,在长期透析所致腹膜组织毛细血管生成增多中可能发挥一定的抑制血管生成作用。4.重组人内皮抑素(恩度)能抑制尿毒症腹膜透析大鼠腹膜新生血管的形成,并且其抑制作用的强弱与药物的剂量有关。5.重组人内皮抑素(恩度)可能是通过下调尿毒症腹膜透析大鼠腹膜组织中VEGF的表达而发挥抑制腹膜新生血管形成的作用。
刘子彬[6]2012年在《血管抑素溶液在大鼠角膜新生血管中的作用研究》文中认为研究背景：病理性新生血管是多种眼部疾病中的一种表现,如：角膜新生血管、新生血管性青光眼、老年性黄斑变性、视网膜新生血管、糖尿病视网膜病变。在欧美等国家,因眼部新生血管已成为导致失明的首要因素。我国作为发展中国家,眼部损伤啊成为一种常见病、多发病,均可引起的角膜新生血管,约占角膜疾病的10%,其中角膜碱烧伤在角膜化学性损伤中后果尤为严重,因碱性溶液可不断侵蚀角膜各层组织,所以它所致的失明是当前最突出、最棘手的问题。与角膜新生血管密切相关疾病有：感染、眼外伤、角膜化学伤、免疫源性眼病等；其中又以化学伤中的碱烧伤后引起的角膜新生血管影响视力最明显。正常角膜光滑透明无血管,尽管角膜新生血管的生长有利于清除局部感染、促进伤口愈合、抑制角膜溶解、促进组织修复等,但是由于其结构和功能的不完善,易产生血浆渗漏、角膜水肿、炎性细胞浸润,这些均会导致角膜丧失“免疫豁免”权限,引起视力下降、甚至视力丧失,影响角膜透明度及后续治疗中的角膜移植。随着科学技术的发展,对角膜新生血管的研究深入,大量实验研究发现角膜新生血管的形成是多因素参与的结果。1血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor VEGF)血管内皮生长因子是1989年由Ferrara发现,是内皮细胞特异性促有丝分裂原,通过特异性受体介导作用于血管内皮细胞,对血管内皮细胞发挥促分化和趋化作用,并促进内皮细胞增殖和迁移。同时增加血管通透性,以利于新生血管和基质细胞生长。血管内皮生长因子在促进血管新生、维持血管形态及完整性具有重要意义。2成纤维细胞生长因子(FGF)成纤维细胞生长因子是Gospodarowicz于1974年发现的一种促纤维母细胞生长因子,并广泛存在于多种组织中。其生物学活性通过受体介导实现；其中碱性FGF生物性最强,主要促进新生血管形成、促进血管平滑肌细胞、促进内皮细胞增殖、参与组织修复和炎症反应等。3白细胞介素(IL)白细胞介素主要是由单核细胞产生的一组细胞因子,作用于巨噬细胞、淋巴细胞,也必须通过特异性受体介导才可发挥其生物活性,对细胞的激活、分化和增殖的作用。正常情况下IL与其他细胞因子共同维持角膜的微环境；但是有实验发现在损伤后角膜的中IL-8表达量明显增高,可初步证明其对组织新生血管的影响为促进作用。4转化生长因子-β(TGF-β)转化生长因子-β是由DeLarco在1978年发现,其生物活性是通过受体信号传导途径实现,其对细胞增殖、分化和凋亡发挥调控作用；在正常角膜中转化生长因了-β是处于一种低水平表达状态以维持正常的角膜形态和角膜局部免疫功能；但是在实验研究过程发现在角膜化学伤后产生的角膜新生血管的角膜组织中存在高表达,同时与新生血管的量成一定关系：随着新生血管的数量增多,其表达含量也同时升高；即可认为在角膜新生血管的形成过程中存在一定促进作用。5基质金属蛋白酶(MMPs)基质金属蛋白酶是一组Zn2+依赖的降解细胞外基质成分的内源性蛋白水解酶,主要由成纤维细胞、巨噬细胞、内皮细胞等合成与分泌。其生物学功能主要有降解细胞外基质膜有效成分、调节粘附、直接或间接参与胚胎发育等。正常组织中其处于抑制状态。有研究表明当角膜产生新生血管时,其处于强表达,并在新生血管膜的周边血管外的基质中显着增多。近年来根据对角膜新生血管生长机制研究、动物实验、细胞培养和临床实验研究,并针对发病机制和原理,出现多种治疗方法及治疗药物；各种药物及治疗方法都能在一定程度上对角膜新生血管起治疗作用,不仅可以抑制角膜新生血管的增殖,同时可引起已形成的新生血管出现萎缩、凋亡等。这为治疗角膜新生血管提供强有力的动力。1抗VEFG药物包括VEFG单克隆抗体、VEGFR酪氨酸激酶抑制剂、抗VEGF抗体等；其中使用较广的有贝伐单抗Bevacizumab,其对VEGF A的所有亚型都具有亲和力,其抗新生血管的主要机制是通过阻止VEGF与内皮细胞表面的VEGFR1和VEGFR2受体结合,阻止血管渗漏和新生血管的形成,从而使内源化VEGF的生物活性失效。VEGFR的酪氨酸激酶域是VEGF信号转导的起点,受体介导而被激活,阻断该位点可以有效的抑制VEGF介导的血管生成作用。2CNV抑制因子众多研究显示,促血管生长因子的增加打破了控制角膜血管形成的网络平衡,使新生血管得以形成,而增加血管生长抑制因子,可加强抗血管形成的力量,使血管控制网络重新恢复平衡,新生血管消退。其中以血管内皮抑素最为重要；内皮抑素是由O'Relly发现的一种内源性血管内皮细胞增殖的强效抑制剂；内皮抑素特异性地作用于内皮细胞,尤其是微血管的内皮细胞,抑制其迁移,诱导其凋亡,从而抑制血管的生成。3糖皮质激素糖皮质激素具有显着的抗炎和免疫抑制作用,可以减少炎性渗出,抑制成纤维细胞增生和新生血管的生成。有研究发现其对新生血管的抑制作用主要通过抑制内皮细胞的移行及血管形成。4血管抑素(Angiostatin AS)K1-4血管抑素K1-4是纤溶酶原的降解片段并具有强大的抑制新生血管形成作用,可特异地抑制处于增殖状态的血管内皮细胞并诱导内皮细胞的凋亡,来发挥强大的抑制新生血管的作用,并且不影响静止的内皮细胞。虽然对于角膜新生血管的治疗方法多样,但仍然未有一种疗效较为确切、实用的治疗方法。本课题主要目的是通过配制不同浓度的血管抑素眼用溶液,以研究血管抑素对碱烧伤后角膜新生血管的抑制作用及最佳浓度。目的：1、探讨不同浓度的血管抑素对体外培养的人脐静脉内皮细胞的抑制作用；2、探讨血管抑素眼用溶液在大鼠角膜碱烧伤后的角膜新生血管中影响CD31的表达情况及比较各组角膜新生血管的生长情况。方法：1、在体外培养的情况下,将传代培养后的人脐静脉内皮细胞分为叁组：对照培养组(空白组)、A组(16ml/L血管抑素培养组)、B组(32ml/L血管抑素培养组),通过MTT法观察用药后24h、48h、72h叁组细胞的抑制率；将培养72h后的细胞粉碎,分别采用VEGF和GAPDH引物,以cDNA为模板按照下面的反应体系进行PCR特异性扩增,通过荧光定量PCR法测定各组VEGF蛋白的RNA表达情况；收集A组、B组、C组叁组细胞以western blot法检测VEGF蛋白表达量。2、通过碱烧伤制备动物角膜新生血管模型；SPF级SD大鼠24只,随机分成4组,每组6只。分别给予生理盐水、A组(25ug/mL AS滴眼剂)、B组(50ug/mLAS滴眼剂)、C组(75ug/mL AS滴眼剂),4次/d至实验结束。术后常规滴用氧氟沙星滴眼液4次/d,1滴/次,用药3d,预防感染。通过计算角膜新生血管的生长情况、HE染色、RT-PCR、Western bolt检测碱烧伤后不同浓度的角膜组织中CD31的表达情况。结果：1、血管抑素对体外培养的人脐静脉内皮细胞的抑制实验表明：随着血管抑素作用时间的延长和浓度的递增对人脐静脉内皮细胞的抑制作用也逐渐增强,且与对照组相比差异均有显着性意义(P<0.01)；2、大鼠角膜碱烧伤后各时间点A、B、C组CNV面积较盐水组少(P<0.05),C组碱烧伤14天各时间新生血管面积较其他叁组明显减少(P<0.05)；血管抑素治疗两周后,对照组大鼠角膜全层可见大量新生血管形成及慢性炎细胞浸润；各治疗组角膜新生血管均不同程度较对照组减少；3、各实验组角膜组织中CD31-mRNA及CD31表达均少于对照组(P<0.05),同时在实验组中与血管抑素的浓度呈负相关性。结论：1、通过体外细胞培养技术,证明血管抑素对人脐静脉内皮细胞的抑制作用与血管抑素浓度和作用时间成双重负相关性。2、血管抑素作用VEGF靶点后抑制血管新生,从而抑制内皮细胞的迁移、生成、重组,减少内皮细胞的生长；本实验中通过检测各组角膜组织中CD31这一血小板内皮细胞粘附分子的表达量,证明新生血管的生长在血管抑素制剂治疗下的情况。试验中可以明显观察到各组角膜新生血管的生长情况,可得知对新生血管的抑制效果与血管抑素的浓度呈相关性变化,及浓度越高,新生血管越少。3、血管抑素是机体正常情况下生成的细胞因子,同时由于血管抑素的高效性选择性等优点,在治疗角膜新生血管疾病方面,具有很大的潜能；为血管抑素制剂的临床开发奠定了基础。
江艳[7]2009年在《急性脑梗死患者血vWF和VEGF含量的动态变化与临床意义》文中认为目的本课题通过动态检测急性脑梗死(ACI)患者不同时期外周血血浆血管性假性血友病因子(vWF)和血清血管内皮细胞生长因子(VEGF)的含量水平的动态变化,探讨急性脑梗死患者的病情变化与血管内皮细胞功能的关系。方法选取急性脑梗死患者46例,依据改良爱丁堡+斯堪的那维亚卒中量表评分分轻、中、重组,同时依据梗死面积分大面积梗死组及非大面积梗死组。观察测定脑梗死患者发病后第2d、7d、14d血浆vWF和血清VEGF,分析其动态变化规律,并分析它们与神经功能评分和梗死面积之间的关系。另外选取30例既往健康体检者作为对照组。入选者须除外脑卒中史及冠心病史,肾脏、肝脏、肿瘤疾病及血液系统疾病患者。患者在近期内未服用抗凝,抗血小板,溶栓及降压降糖类药物。vWF测定采用免疫比浊法, VEGF测定采用双抗体夹心酶联免疫分析(ELISA)法检测。结果脑梗死组血浆vWF及血清VEGF含量在第2、7、14d均高于对照组(vWF:p<0.01 VEGF:p<0.01)。脑梗死组血浆vWF发病第2d明显高于第7、14d(p<0.01)。脑梗死组血清VEGF第7天明显高于第2、14d(p<0.01)。脑梗死组血浆vWF和血清VEGF含量在神经功能评分重度的患者含量高于轻度与中度(vWF:p<0.05 VEGF:p<0.05)。大面积脑梗死组vWF和VEGF的含量明显高于非大面积脑梗死组(vWF:p<0.01 VEGF:p<0.01)。结论急性脑梗死患者血浆vWF和血清VEGF含量明显增高,并与脑梗死时相及梗死面积相关,内皮细胞损伤及修复新生参与了脑梗死早期的病理生理变化过程。
王翠兰[8]2014年在《急性脑梗死患者血清VEGF与bFGF水平动态变化的研究》文中研究表明目的观察急性脑梗死患者在发病后不同时间点血清血管内皮细胞生长因子（VEGF）和碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）水平的动态变化，探讨二者在急性脑梗死发病中的作用及与脑梗死面积、预后的关系。方法收集发病2d内的急性脑梗死患者150例为脑梗死组，对照组为年龄和性别相匹配的门诊健康查体者80例。脑梗死组分别于脑梗死第2d、7d、14d相同时间点空腹抽取静脉血3ml，以3500r/min离心10min，提取血清于-80℃冰箱保存待测。对照组空腹采血1次，标本处理同上。应用ELISA法检测VEGF和bFGF水平，根据头颅CT或MRI测量梗死灶最大直径，3个月后应用mRS评分评估预后。所有数据以EXCEL数据库整理后使用SPSS13.0统计学软件包进行数据分析。计数资料采用百分比表示，显着性检验用χ2检验，计量资料采用均数±标准差（x±s）表示，两组间参数比较采用独立t检验，多组间比较采用单因素的方差分析，以P＜0.05为有显着性差异。结果1脑梗死组患者高血压、糖尿病的发生率明显高于对照组，差异有统计学意义，而年龄、性别、吸烟、饮酒、高脂血症百分比在两组之间无显着性差异。2脑梗死组在2d、7d、14d的VEGF和bFGF水平均高于对照组，VEGF水平在2d开始升高，7d最高，14d开始降低，bFGF水平在梗死后第2d最高，第7d下降，14d降至最低，但仍高于对照组。3单纯脑梗死组与脑梗死合并危险因素组在脑梗死发生后不同时间点VEGF、bFGF水平比较，差异无统计学意义。4血清VEGF和bFGF水平与脑梗死面积有关，同一时点，大梗死组VEGF和bFGF水平显着高于中、小梗死组患者，中梗死组VEGF和bFGF水平显着高于小梗死组。5预后较好组的中、大梗死组患者各时间点血清VEGF和bFGF水平均明显高于预后较差组，差异有统计学意义。结论1急性脑梗死发生时VEGF、bFGF表达增加，并随病程发展呈动态变化。2在是否合并危险因素的脑梗死患者中VEGF、bFGF表达无显着性差异。3随脑梗死面积增大，VEGF、bFGF水平呈升高趋势，提示脑梗死面积大小可能与VEGF和bFGF表达有关。4相同梗死面积患者中，预后较好患者VEGF、bFGF水平较预后较差患者高。
郝翠萍[9]2014年在《低分子肝素对COPD大鼠肝细胞生长因子、血管内皮生长因子及白介素-6的影响》文中进行了进一步梳理目的观察慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠模型血浆中的白细胞介素(IL)-6及肺组织中肝细胞生长因子(HGF)、血管内皮生长因子(VEGF)蛋白的表达及低分子肝素(LMWH)干预对它们的影响。方法将SPF级健康雄性Wistar大鼠30只随机分为叁组：①COPD模型组(n=10)：采用熏烟并多次气管内注入脂多糖的方法建立动物模型,于熏烟前半小时在其皮下注射(IH)生理盐水(约1mL,与LMWH等量)；②LMWH干预组(n=10)：制备COPD模型的同时熏烟前半小时给予LMWH(150U/kg,IH)；③空白对照组(n=10)：不做任何干预,正常环境下饲养。观察各组大鼠肺组织的病理改变等结果,分别用ELISA方法检测血浆中IL-6及免疫组化检测大鼠肺组织中HGF、VEGF的表达。分别对HGF、VEGF及IL-6与BALF中的中性粒细胞进行相关性分析。结果建立的COPD大鼠模型的病理学改变与人类肺气肿的病理改变特点基本一致,干预组大鼠肺组织改变较轻,叁组大鼠的肺组织病理形态定量分析有明显差异(P<0.05)；血气分析结果示COPD组与LMWH干预组与对照组相比,Pa02下降,PaC02升高,差异均有统计学意义(P<0.01),但LMWH组Pa02与PaC02水平介于正常组和模型组之间,差异具有显着性(P<0.05)；BALF中细胞总数及中性粒细胞比例在LMWH干预组及COPD模型组较正常组升高,巨噬细胞比例降低(P<0.01),LMWH干预组BALF中细胞总数及中性粒细胞比例较COPD模型组减少,巨噬细胞比例增高,差异均有统计学意义(P<0.05)；HGF、VEGF及IL-6水平在COPD组及LMWH干预组均明显高于对照组(P<0.01),而LMWH组叁项指标介于模型组与正常组之间(P<0.05)；相关性分析显示,HGF、VEGF及IL-6的表达与BALF中的中性粒细胞比例呈明显正相关(相关系数r分别为0.725、0.829及0.891,P<0.01)。结论HGF、VEGF及IL-6均参与COPD的气道炎症,LMWH可能通过干预叁者的表达来减轻气道炎症。
李春深[10]2011年在《抵挡汤对STZ诱导糖尿病大鼠视网膜病变影响的实验研究》文中研究表明背景：糖尿病性视网膜病变(diabetic retinopathy, DR)是最严重和常见的糖尿病并发症之一。糖尿病因糖代谢障碍致全身各组织器官的微血管异常,在眼部可引起视网膜缺血缺氧,新生血管形成,纤维增殖等,以致视网膜脱离,甚至导致视力丧失。糖尿病性视网膜病变的发病机制十分复杂,至今尚未完全阐明。中医则根据糖尿病性视网膜病变所引起视功能障碍的程度不同而有不同的称谓,如“暴盲”、“消渴目病”、“视瞻昏渺”等。因本病具有外眼正常,从内而蔽之的特点,故归属于中医学的“内障”眼病范畴。抵挡汤出自东汉张仲景《伤寒杂病论》,由水蛭、桃仁、虻虫、大黄4味药组成,是治疗蓄血实证的经典破血逐瘀名方,具有活血通络、逐瘀攻下之功效。本实验以抵挡汤为主线,通过形态学和基因表达两条途径,分析抵挡汤对STZ诱导糖尿病大鼠视网膜病变的可能作用机制,以求寻找中医药防治糖尿病性视网膜病变的新思路。目的：通过STZ诱导建立糖尿病大鼠模型,探讨不同时间段给予抵挡汤干预对糖尿病大鼠视网膜病变相关血清学指标、形态学及基因表达的影响及其作用机制。方法：利用链脲佐菌素(STZ)尾静脉注射,配合高脂饲料饮食制备糖尿病大鼠模型,将大鼠分为正常对照组、模型对照组、抵挡汤晚期组、抵挡汤中期组、抵挡汤早期组、辛伐他汀组、罗格列酮组。观察抵挡汤对糖尿病大鼠生长状态、体重、血糖、血胰岛素的影响,HE染色后观察视网膜形态学改变,免疫组化染色观察ICAM-1和VCAM-1蛋白的表达,RT-PCR方法检测视网膜VEGF、TGF-β1和PKC-β2mRNA的表达,探讨抵挡汤影响糖尿病性视网膜病变的可能作用机制。结果：成功建立了STZ诱导糖尿病大鼠模型。到实验12周时,与正常对照组比较,其他各组大鼠体重明显升高,说明高脂饲料饮食可明显增加大鼠体重,而有助于糖尿病大鼠模型的建立。与正常对照组比较,STZ诱导糖尿病造模各组大鼠血糖明显升高；与模型对照组比较,罗格列酮组大鼠血糖明显降低,而抵挡汤干预各组及辛伐他汀组大鼠血糖则无明显变化。与正常对照组比较,光镜下HE染色可见模型对照组大鼠视网膜结构不规则,水肿,细胞排列紊乱,有部分细胞突出于内界膜；与模型对照组比较,抵挡汤早期组大鼠视网膜病变相对轻微。与正常对照组比较,模型对照组大鼠视网膜ICAM-1和VCAM-1表达增多,表明糖尿病大鼠视网膜组织有明显病理改变；而与模型对照组比较,抵挡汤早期组、抵挡汤中期组、辛伐他汀组和罗格列酮组的大鼠视网膜免疫组化染色ICAM-1和VCAM-1表达减少,病理改变相对较轻。RT-PCR检测显示,正常对照组大鼠视网膜组织内VEGF、TGF-β1和PKC-β2的mRNA均有少量表达；与正常对照组比较,模型对照组大鼠视网膜组织内VEGF、TGF-β1和PKC-β2的mRNA表达均有一定程度的升高；而与模型对照组比较,抵挡汤早期组、抵挡汤中期组、辛伐他汀组和罗格列酮组的大鼠视网膜组织内VEGF、TGF-β1和PKC-β2的mRNA表达均明显降低,其中以抵挡汤早期组大鼠视网膜组织内VEGF、TGF-β1和PKC-β2的mRNA表达减弱更为明显。结论：本研究在建立STZ诱导糖尿病大鼠模型基础上,观察糖尿病大鼠视网膜病变,发现抵挡汤一定时间段给药干预具有影响糖尿病性视网膜病变发生和发展的作用,尤其在抵挡汤早期干预后,糖尿病大鼠视网膜受到明显的保护,其病变发展得到延缓,这可能与抵挡汤降低ICAM-1和VCAM-1蛋白在视网膜组织表达,降低VEGF、TGF-β1和PKC-β2的mRNA在视网膜组织表达,从而抑制糖尿病大鼠视网膜病变的炎症反应等机制有密切联系。
参考文献：
[1]. 血管内皮细胞生长因子（VEGF）在大鼠糖尿病发病中的意义[D]. 王艳. 青岛大学. 2001
[2]. 眼底病专题[C]. 佚名. 中华医学会第九届全国眼科学术大会论文汇编. 2004
[3]. 血管内皮生长因子在脂质肾毒性作用中的实验研究[D]. 殷蓓. 第二军医大学. 2002
[4]. 臭氧对糖尿病大鼠视网膜氧化应激、炎症相关因子及Müller细胞功能的影响[D]. 谢婷玉. 新疆医科大学. 2016
[5]. 腹膜血管新生引起腹膜超滤衰竭的机制及其阻断干预实验[D]. 赵占正. 郑州大学. 2010
[6]. 血管抑素溶液在大鼠角膜新生血管中的作用研究[D]. 刘子彬. 南方医科大学. 2012
[7]. 急性脑梗死患者血vWF和VEGF含量的动态变化与临床意义[D]. 江艳. 安徽医科大学. 2009
[8]. 急性脑梗死患者血清VEGF与bFGF水平动态变化的研究[D]. 王翠兰. 河北联合大学. 2014
[9]. 低分子肝素对COPD大鼠肝细胞生长因子、血管内皮生长因子及白介素-6的影响[D]. 郝翠萍. 青岛大学. 2014
[10]. 抵挡汤对STZ诱导糖尿病大鼠视网膜病变影响的实验研究[D]. 李春深. 天津医科大学. 2011
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