（江苏省南京市江宁中医医院 江苏 南京 211100）
【摘要】 目的：分析乌梢蛇及其混伪品的鉴别方法，确保临床中药饮片质量。方法：对比分析乌梢蛇及其混伪品的鉴定方法，除了传统的性状鉴别，还有显微鉴别法、薄层层析法、紫外吸收光谱法、DNA图谱验证法、骨骼鉴别法等方面的差异。结论：乌梢蛇及其混伪品均有不同的性状和理化特征。注重乌梢蛇及其混伪品的特征差异，从性状、显微、理化特征等多方面综合鉴定，为饮片鉴别提供参考依据。
【关键词】 乌梢蛇；伪品；鉴别
【中图分类号】R281 【文献标识码】B 【文章编号】2095-1752（2016）34-0316-02
乌梢蛇为常用动物药材，分布于华东、华南、湖南、湖北、江西等地。其化学成分主要含有氨基酸类。善祛风通络，治风湿痹痛、麻木拘挛、中风口歪、半身不遂及麻风疥癣；定惊止痉，治小儿急慢惊风、破伤风。是一味常用的舒筋活络药，始载于宋《开宝本草》。2010年版药典收载的乌梢蛇为脊索动物门游蛇科动物乌梢蛇Zaocys dhumnade（Cantor.)除去内脏的干燥体。市场上人工养殖乌梢蛇没有形成较大的规模，药材供应以野生者为主，用药需求逐年增加，资源严重紧缺，因此从2010年之后价格节节攀升，一些不法分子为了牟取暴利，导致市场中常有伪品出现，给药材市场造成混乱，给临床用药带来危害。常见的乌梢蛇伪品主要是同科动物，如王锦蛇、黑眉锦蛇、红点锦蛇、玉斑锦蛇、赤链蛇、滑鼠蛇、灰鼠蛇、草游蛇、水赤链游蛇、中国水蛇等。因此，为了保证中医临床疗效，对乌梢蛇及伪品的鉴定有着重要的意义。目前，除了传统的性状鉴别，还有显微鉴别、薄层层析法、紫外吸收光谱法、DNA图谱验证法、骨骼鉴别等方法。下面笔者就乌梢蛇及常见伪品从几个鉴别方面加以比较，为科学应用乌梢蛇提供参考意义。
1.性状鉴别
正品乌梢蛇：形体较粗大，头颈区分不明显，全长可达2m以上。乌梢蛇呈圆盘状，盘径13～16cm。表面黑褐色或乌黑色，密背菱形细鳞片，背鳞行数成双为偶数，背中央2～4行鳞片强烈起菱，形成两条纵贯全体的黑线。头盘中间，扁圆形，似龟头，大多眼大不凹陷而有光泽；颊鳞1枚，眼前下鳞1枚，较小，眼后鳞2枚；口内有多数刺状牙齿。脊部高耸成屋脊状，俗称“剑脊”。腹部剖开边缘向内卷曲，脊肌肉厚，黄白色或淡棕色，可见排列整齐的肋骨。尾部渐细而长。剥皮者仅留头尾之皮，中段较光滑。气腥，味淡[1]。乌梢蛇混伪品较多，伪品与正品的主要鉴别点在于：蛇的头形非龟头状；蛇体背鳞行数为奇数；尾部粗短；“剑脊”不明显或没有。而各个伪品的蛇体表面颜色及鳞片数目又各有特征，如滑鼠蛇，颈部与蛇身为棕色，上唇鳞8片；灰鼠蛇，头颈部与蛇身为棕色，上唇鳞8片，颊鳞多为2片；赤链蛇，蛇体背部黑色，具多数红色横斑纹，上唇鳞8片，颊鳞1片入眶，头顶棕黑色，鳞缘红色，颅顶鳞有黑纹，左右斜向颈侧呈“人”字形。红点锦蛇，蛇身红棕色，尾下正中线为黑棕色，头背部具有不规则的倒“V”形黑斑纹，上唇鳞7片，颊鳞1片。王锦蛇，蛇体背部有黄色横纹，头背部鳞中央呈黄色，边缘具黑色斑纹，上唇鳞8片。
期刊文章分类查询,尽在期刊图书馆黑眉锦蛇，头侧眼后具黑眉线，蛇体背部灰棕色，具有黑色斑纹，上唇鳞9片，颊鳞1片。
2.显微鉴别
取蛇样品细粉，用甘油试液装片，在光学显微镜下观察组织形态，利用鳞片碎片的显微特征进行鉴别。乌梢蛇与伪品的粉末、表皮碎片、骨、肌纤维的特征相似，没有鉴别意义，而角质鳞片碎片特征各不相同，是粉末显微鉴别的重要特征[2]。从蛇的背部取下鳞片分别用水清洗，以稀甘油装片置光学生物显微镜下观察。乌梢蛇鳞片碎片表面具纵向弯细条纹，滑鼠蛇具同向交互排列条纹，以此可区别。利用端窝数的差异，脊棱有无，背鳞纹理、形状、大小进行鉴别。如乌梢蛇及其伪品滑鼠蛇、王锦蛇、水赤链游蛇、中国水蛇、红点锦蛇、玉斑锦蛇、草游蛇、灰鼠蛇的鉴别。乌梢蛇无脊棱，有端窝2个，背鳞菱形，两端略圆，表面有多数颗粒状物和纵条纹，几方面相结合，可与伪品区别。
3.薄层层析法
取蛇样品粗粉，制成脂溶性溶液，分别点于硅胶板上。以氯仿-丙酮(9.5:0.5)或甲苯-乙酸乙醋-冰醋酸为展开剂展开，用10%硫酸乙醇液或25%磷钼酸乙醇液喷雾后，烘15分钟。氯仿-丙酮(9.5:0.5)展开剂展开者置365nm紫外灯下观察，显较强荧光，甲苯-乙酸乙醋-冰醋酸展开剂展开者直接观察，可见清晰、分离效果好的一个斑点，并显强烈荧光。可利用该色谱斑点的差异进行鉴别。如乌梢蛇及其伪品滑鼠蛇、红点锦蛇、灰鼠蛇、王锦蛇、水赤链游蛇。结果乌梢蛇的薄层色谱显示出一个斑点(Rf=0.57)，特征明显，可作为乌梢蛇与其伪品的一个重要鉴别指标[3]。
4.紫外吸收光谱
取乌梢蛇及其伪品粉末各1.0g，石油醚10mL浸泡24h，前6h每隔一小时振摇1次，过滤，滤液稀释到一定浓度，置于1cm比色池中，在紫外可见分光光度计上测定吸收曲线，扫描范围190～400nm[4]。结果表明石油醚浸出液紫外吸收曲线的最大吸收峰峰形、波长及吸收峰数目均有一定差异。其中，乌梢蛇的紫外吸收光谱与红点锦蛇石油醚浸出液的最大吸收波长值虽然比较接近，但结合紫外吸收光谱图观察，二者是有明显差异的。紫外吸收检测方法重现性好，比较容易将乌梢蛇与伪品区别，具有一定的鉴定意义，可以补充形态与显微鉴别的不足。
5.氨基酸指纹图谱
氨基酸指纹图谱是一种新的乌梢蛇药材鉴别和质量控制方法。精密称取乌梢蛇粉末适量，加入盐酸溶液，在110℃烘箱中水解24h，提取乌梢蛇水解氨基酸，在全自动氨基酸分析仪上测定[6]。黄文琦等以17种氨基酸标准图谱为参照，采用保留时间标定共有指纹峰，记录时间为30min的水解氨基酸色谱图，以图谱中甘氨酸为参照物，将各指纹峰保留时间与参照峰保留时间比较，氨基酸指纹图谱共标定16个共有特征峰，建立了乌梢蛇指纹图谱。从共有氨基酸特征峰的相对保留时间、相对峰面积和相似度中可以看出，不同批次乌梢蛇药材中16种氨基酸含量存在差异。经方法学考察和17批产品测定，结果表明，该方法可靠、稳定、重复性好、专属性强，有利于假冒伪劣产品辨别，可为乌梢蛇药材标准的建立提供依据。
3.讨论
由上可见，正品乌梢蛇及其混伪品在性状、显微等方面均有不同的特征，鉴别乌梢蛇及其混伪品应从多方面综合考虑，防止以假乱真。随着科学技术的发展，乌梢蛇真伪鉴别已由传统性状鉴别发展到DNA鉴别、显微鉴别、鳞片和骨骼鉴别、凝胶电泳鉴别、生物学技术鉴别。这些先进技术的运用，将逐步引导乌梢蛇的真伪鉴别向信息化、标准化、高速化方向发展。
【参考文献】
[1]任天驰，张学顺.全国中医药专业技术资格考试大纲与细则[M].1版.北京：中国中医药出版社，2015：653.
[2]杨小平，屈菊兰，林劲松.中药乌梢蛇的光镜及扫描电镜鉴别研究[J].中草药.1999，30(8)：615.
[3]何蓓.乌梢蛇真伪鉴别研究概况[J].中药材，2001，24(2):151
[4]肖寄平，黄青等.乌梢蛇及其常见伪品的鉴别研究[J].吉林中医药，2009，29(10)：884.
[5]唐晓晶，冯成强等.高特异性PCR方法鉴别乌梢蛇及其混淆品[J].中国药学杂志，2007，42（5）：334.
[6]黄文琦.林葵等.乌梢蛇氨基酸图谱研究[J].蛇志2015，27（1）：4.
论文作者:马凤鸣
论文发表刊物:《医药前沿》2016年12月第34期
论文发表时间:2016/12/8
标签：乌梢蛇论文; 伪品论文; 氨基酸论文; 图谱论文; 鳞片论文; 特征论文; 性状论文; 《医药前沿》2016年12月第34期论文;