高宏娥1 高海涛2
1.湖北省十堰市东风医疗集团花果医院检验科 湖北十堰 442000；
2.湖北医药学院化学教研室 湖北十堰 442000
【摘 要】目的：探讨四种检验方法检验阴道念珠茵病的效果比较。方法：同时用盐水法、快速凝集法、培养法和革兰染色法对临床拟诊的125例阴道分泌物检测进行比较。结果：快速凝集法的检出率最高，革兰染色法次之，盐水法的检出率最低。结论：快速凝集法检测念珠菌具有简便、检出率高等特点，在各级医院都可采用，尤其适宜在基层医院推广。
【关键词】阴道念珠菌；凝集法；培养法；革兰染色法
【中图分类号】 R446 【文献标识码】B 【文章编号】1674-8999（2015）8-0242-01
近年来，由于免疫受损人群的出现，各种侵入性诊断和治疗技术的运用，广谱抗生素、皮质类固醇、免疫抑制剂的广泛使用，使得真菌感染有明显上升的趋势，其中最常见的是念珠菌引起的感染。研究表明，近年来非白念珠菌在念珠菌感染中的比例在增高；且随着对念珠菌属耐药性研究的逐步深入，发现克柔念珠菌对氟康唑天然耐药，光滑念珠菌、近平滑念珠菌对此药不敏感。在白血病、肿瘤、获得性免疫缺陷综合征、骨髓或器官移植、烧伤、早产等患者的检测标本中经常可以分离出念珠菌。这些致病菌谱的变迁和耐药菌株的出现，迫切要求在最短的时间里将致病菌鉴定到种的水平，以选择敏感有效的药物进行治疗。当前，临床微生物学检验人员习惯用显色平板分离和初步鉴定念珠菌，用细菌鉴定仪及其配套板条鉴定念珠菌种。但这些显色方法常因培养基中指示剂不同、培养温度和时间的不同影响检验结果的准确性。本文观察应用盐水法、快速凝集法、培养法、革兰染色法对125例阴道分泌物样本进行阴道念珠菌检测情况。
1 临床资料
1.1 一般资料
125例阴道炎患者均来自2014年1月-2015年1月本院保健院妇产科，年龄18-50岁，平均34.5岁。其念珠菌分别来自患者的痰、尿、粪、阴道拭子等标本。标准菌株为热带念珠菌(ATCC 201380)、白念珠菌(ATCC 60193)、克柔念珠菌(ATCC14243)。
1.2 检验方法
1.2.1 盐水法
将生理盐水立即与采集的阴道分泌物涂布均匀，于高倍镜下观察，找到真菌孢子或假菌丝为确诊。
1.2.2 快速凝集法
按念珠菌快速凝集测定试剂盒中操作步骤，滴加专用标本缓冲液至软试管的0．5或1刻度处搅动拭子lO秒钟，充分混合标本，静置5分钟，在凝集卡片的白色环内滴2滴已处理的标本，再滴2滴特异性抗体，用手顺时针摇转卡片，5分钟内观察结果。标本中有念珠菌，则肉眼可见紫色凝集颗粒，判断阳性； 标本中无念珠菌， 肉眼未见紫色凝集颗粒，判断阴性。
1.2.3 培养法
改良沙堡固体培养基：含葡萄糖2%，蛋白胨1%，琼脂2%，氯霉素0.05 mg/mL。混匀标本， 接种于含氯霉素的沙堡弱培养基，于37℃ 孵育24h，生长出白色圆形状的小菌落，取其行革兰染色，见到椭圆形芽生孢子和菌丝即为阳性，无菌落形成为阴性。
1.2.4 革兰染色法
涂片干燥后经革兰染色、镜检， 找到圆形或卵圆形酵母样细胞，单独散在或丛生集聚，呈革兰染色阳性且染色不均匀，有些可见假菌丝，可行初步判断。
1.3 统计分析
实验数据用SPSS15.0程序进行统计学处理。以P<0.05作为具有显著性差异的标准。
2 结果
四种阴道念珠菌检验方法见表1。其中快速凝集法的检出率最高，革兰染色法次之，盐水法的检出率最低。
表1：四种阴道念珠菌检验方法结果比较(例)
3 讨论
随着深部真菌感染的日益增多，由此引起的死亡率居高不下。但是当前经验性用药一段时间常常效果不佳，这可能与某些真菌菌种的耐药性有关。因而，目前对真菌感染的诊断有必要鉴定到种，除此以外，明确或追踪传染源、传播途径及判断预后都需要对致病菌鉴定到种。
念珠菌可以存在于人的体表皮肤、口腔、肠道、阴道等与外界相通的腔道中，是人体的正常菌群。当抵抗力下降时，引起定植部位感染。常见的感染有传染性口角炎、外耳炎症、脑膜炎、肺部炎症、心内膜炎、腹膜炎、关节炎、尿道感染、外阴阴道炎、甲沟炎、甲癣、真菌血症、播散性感染等。念珠菌感染的临床症状与其他疾病的症状很相似，通过临床表现作诊断依据不足，主要靠实验室病原微生物学技术在患者标本中分离、鉴定念珠菌并确定临床意义。当前外阴阴道念珠菌病的主要病原菌为白念珠菌，占80%-90%，其次为少数非白念珠菌如光滑念珠菌，克柔念珠菌，热带念珠菌，近平滑念珠菌等也可致病。近年来有研究表明白念珠菌所占构成比在下降，光滑念珠菌和近平滑念珠菌的感染增多。念珠菌有酵母相和菌丝相两种形态，二者可以互相转化，平时可在阴道中存在而无症状。当阴道微环境改变和局部防御力减退时孢子大量繁殖，并转化为菌丝相粘附于阴道黏膜细胞上使之穿孔，同时通过所分泌的蛋白酶及水解酶而加重炎症损伤。真菌菌种鉴定长期以来都是依靠形态学及生化特性加以区别，少数可以通过免疫学实验进行鉴别，但往往要耗费数天至数周，这不仅会贻误治疗时机，还会因滥用药物加重患者经济负担，甚至造成不必要的药物毒副作用。
在念珠菌的检验方法中，直接生理盐水涂片法虽然操作简便快捷，患者当时就能取到报告，但由于不染色，当分泌物中孢子含量较少时不易发现，造成检出率相对偏低；培养法首先要得到纯培养，这一过程一般需24-72小时，然后进行芽管、菌膜及生化鉴定试验来判断属于哪一种念珠菌。沙保基分离培养的缺点是很可能遗漏念珠菌的混合感染．即使加入TTC也仅能将热带念珠菌分开，而TTC基的配制也较繁琐。快速凝集法虽然相对其他三种方法复杂，但其检出率高最好，说明快速凝集法检测念珠菌具有简便、检出率高等特点，在各级医院都可采用，尤其适宜在基层医院推广。同时在检验中，建议临床实验室操作人员注意时间、温度、培养基品质、生化反应时间长短等对念珠菌检验结果准确性的影响。由于念珠菌感染的常见性、普遍性，提高念珠菌微生物学检验结果的快速与准确是当今面临的一个重要问题，规范检验操作、保证检验结果准确是我们当今的目标。
论文作者:高宏娥1,高海涛2
论文发表刊物:《中医学报》2015年8月
论文发表时间:2015/12/3
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