董晓[1]2003年在《猪胚胎干细胞（EG）建系影响因素的研究》文中提出1．本实验以中国近交系五指山小型猪(WZSP)和微型白猪为材料，先后从27头猪采集了312枚早期胎儿用于进行猪胚胎干细胞(EG)建系影响因素研究，得出如下结论： (1)d26-28猪胎儿可用于制作胎儿成纤维细胞。制作饲养层时，STO、MEF~1细胞用10μg／mL丝裂酶素C处理1.75h～2h；PEF细胞用丝裂酶素C处理2.25h～2.5h。 (2)分别收集d27 WZSP和微型白猪胎儿，实验结果证明，WZSP和微型白猪在EG细胞培养方面没有显着性差异(P＞0.05)，都可以用来作为EG细胞建系的材料。 (3)分别采集d26、d27、d28胎儿，在相同条件下培养，实验结果证明，d26、d27、d28胎儿PGC细胞培养效果差异不显着(P＞0.05)。 (4)采集d27胚胎，分别放在两种培养液中培养[培养液1：DMEM(丙酮酸钠)+15％FCS+1％L-谷氨酰胺+1％MEM-非必需氨基酸+1％Penicillin-Streptomycin+10μMβ-巯基乙醇；培养液2：DMEM(丙酮酸钠)：HF10(v∶v=50∶50)+15％FCS+1％L-谷氨酰胺+1％MEM-非必需氨基酸+1％Penicillin-Streptomycin+10μMβ-巯基乙醇+1000IU／mL LIF+40ng／mL SCF+20ng／mL bFGF]，结果证明两种培养液培养PGC细胞效果差异不显着(P＞0.05)。 (5)用不同饲养层培养PGC，实验结果证明PGC在新鲜制作的STO和MEF~1饲养层上，可以得到传3代以上的EG集落；PGC在铺有解冻的STO饲养层细胞、PEF或丝裂霉素C处理过的PEF、涂有0.1％明胶的4孔板上，一直没有得到典型的EG集落。 (6)用两种方法从生殖嵴获得PGC细胞：a，机械分离；b，化学消化+机械分离。结果证明两种PGC采集方式培养效果没有显着差异(P＞0.05)；比较了一个胎儿的PGC接种1、2、3、4个培养孔(4孔板)，结果证明接种密度以1个胎儿接种2-3个培养孔的密度比较合适。 (7)对非饲养层培养系统培养猪PGC进行了初步探索。实验结果证明，以STO为饲养层，培养液中加条件培养基对猪EG细胞保持不分化状态有积极作用，但培养板底铺有STO基质或明胶，即使用条件培养基也没有获得典型的EG集落。 (8)以STO细胞为饲养层，培养液中加否生长因子对EG培养效果影响不大(P＞0.05)，但培养液中加入生长因子后，对EG细胞培养传代更有利。而培养板底只铺有0.1％的明胶时，即使培养液中加入生长因子也没有形成典型的EG集落。 (9)对原代出现的EG集落分别在不同时间传代，实验结果证明，在原代出现大批EG集落的(以出现大批EG集落的当天为第1天，d1)第2(d2)、3(d3)、4(d4)天传代效果好；对原代出现的EG集落分别采用叁种消化方式传代：a，消化液1(0.2％Trypsion-0.04％EDTA)+一次离散法；b，消化液2(含0.1％鸡血清的消化液1)+一次离散法；c，消化液2+连续离散法。实验结果证明，用a、b、c叁种方式传代原代EG集落后都能形成新的大量EG集落。 2．将新鲜和培养24h的PGC、6代前的EG细胞进行显微注射。从42头供体猪获得564枚胚胎。419枚胚胎注射PGC／EG细胞，与未注射的145枚胚胎搭配混合后分别移植给22头受体猪。其中3头妊娠，一头(移植注射第2代EG细胞胚胎)妊娠后来终止；一头产下10头白猪仔(移植注射新鲜PGC细胞胚胎)；另一头(移植注射第6代EG细胞胚胎)产下8头猪仔，其中2头经皮肤色素和分子遗传学鉴定证明为嵌合体猪。这是我国首例获得的EG细胞嵌合体猪。
文江[2]2010年在《猪原生殖细胞的分离、培养及遗传印迹的研究》文中研究指明原生殖细胞(PGCs)是胚胎生殖干细胞(EG)的前体细胞,体外培养后可以获得具有多向分化能力与无限生殖能力的EG细胞。猪EG细胞是研究哺乳动物配子发生、早期胚胎发育、生殖谱系分化的理想实验模型,对现代生物医药研究及畜牧繁殖育种等有重要的意义。到目前为止,人们尚未建立稳定传代的猪EG细胞培养体系。影响猪EG细胞建系效率的因素很多,本研究分析了血清替代品及生长因子对猪EG细胞培养的影响效果。另外,对来源于27天和35天猪胚胎分离的原生殖细胞(PGCs)的遗传印迹状况进行了检测。结果显示:(1)血清替代品获得的猪EG细胞的原代集落数与叁代集落效率和干细胞级胎牛血清无明显区别,但显着高于普通胎牛血清;(2)BIO与SCF,LIF,FGF生长因子的联合应用不仅显着提高了24天猪PGCs原代培养中的增殖能力,而且还导致叁代培养中更高的集落形成效率,显着高于BIO单用或与LIF因子组合及叁因子本身合用的效果。(3)BIO与SCF,LIF,FGF因子的联合应用显示出逆转EG细胞分化状态的能力。(4)27天猪PGCs构建的克隆胚胎和体外培养获得的EG细胞集落均显示了PEG10基因SNP位点的双等位基因表达,而35天PGCs构建的克隆囊胚和EG细胞集落为该位点的单等位基因表达,提示27天猪原生殖细胞发生了PEG10基因的去甲基化。(5)来源于雌性与雄性猪胚胎的PGCs经核移植技术获得的克隆胚在PEG10基因SNP位点上检测到的印迹状态一致,表明PEG10印迹基因的去除是广泛的。本研究探讨影响猪EG细胞建系因素及猪原生殖细胞的遗传印迹状态,为猪ES细胞的应用奠定了一定的理论基础。
刘立新[3]2003年在《猪胚胎干细胞（EG）嵌合体制作研究》文中研究表明本研究首先利用近交系昆明白小鼠进行胚胎显微注射观察发育效果，然后利用所获五指山猪EG细胞制作嵌合体检验EG细胞多能性，最终获得国内首例胚胎干细胞(EG细胞)嵌合体猪，经DNA分析确认在多种组织中存在嵌合状态。叁个试验所得结果如下： 试验一，不同胚期注射小鼠ES细胞对胚胎发育能力的影响。本试验先后将109枚胚胎用于此项研究，通过将小鼠ES细胞注入8-16细胞桑椹胚和囊胚，观察两个不同时期注射胚胎的发育能力。经显微注射的57枚8-16细胞桑椹胚体外培养的发育率和孵化率分别为94.7%(54/57)和70.2%(40/57)。52枚注射囊胚体外培养的发育率和孵化率分别为84.6%(44/52)和80.8%(42/52)。结果表明，两个不同时期胚胎注射后体外培养的发育率和孵化率差异不显着(P＞0.05)。8-16细胞桑椹胚注射法不失为一种可取的方法。 试验二，猪胚胎干细胞(EG)嵌合体制作研究。建立了本实验室条件下猪胚胎干细胞(EG细胞)嵌合体的制作方法，所用固定针的外径为130～150μm，内径为40μm，注射针内径为25μm。在本试验中，获得胚胎311枚，26枚注射体外培养发育率为65.4%(17/26)，将164枚注射胚和121枚未注射胚混合移植到14头受体。其中，159枚囊胚、早囊及桑椹胚混合胚移植到6头受体，3头妊娠(其中一头母猪产仔8头，两头为皮肤色素嵌合体)，妊娠嵌合率为17%(1/6)；126枚扩张混合囊胚移植到5头受体均按时返情，妊娠嵌合率为0(0/5)。结果表明，囊胚、早囊及桑椹胚同扩张囊胚两种注射胚胎制作嵌合体所产生的结果差异显着(0.01＜P＜0.05)。 试验叁，猪胚胎干细胞(EG)嵌合体的DNA分析。通过DNA分析进一步得出，所产8头仔猪，其中六头白猪体组织未发现嵌合现象；其中一头皮肤色素嵌合体猪的皮肤、大脑、胰、甲状腺、血是嵌合的，而心、肺、肝、脾、肾、空肠、卵巢这些组织并没有嵌合；另一头皮肤色素嵌合体猪的检测结果和五指山猪取得相似的结果。结果表明该EG细胞系具有多能性，是否可以进入种系有待进一步验证。
况玲, 冯书堂, 余四九, 牟玉莲[4]2004年在《猪胚胎干细胞培养和建系的影响因素及对策》文中研究指明为解决胚胎干细胞的培养和建系受血清、饲养层、细胞因子、传代时机以及其他一些不明因素影响而很不稳定的问题 ,在总结猪胚胎干细胞 (EG)培养和建系的经验教训的基础上 ,对一些常规的实验方法进行了改进 ,提出了消除上述影响因素的对策。
刘岚[5]2005年在《五指山猪近交系EG细胞建系影响因素研究》文中进行了进一步梳理本实验以五指山小型猪(WZSP)近交系为实验材料,先后由18头妊娠母猪采集了200枚早期胎儿,分别从不同饲养层、条件培养基、是否添加生长因子、传代过程中所用消化液等方面对其EG细胞的建系影响因素进行了研究;并对传代获得的EG细胞集落进行了鉴定。 (1) 从26～28d的新鲜猪胎儿可以获得大量的猪胎儿成纤维细胞(PEF),经传代培养后即可纯化。实验过程中,PEF传至10代以上,可以在体外长期培养并可冷冻保存。本实验对F_5代的PEF进行了核型分析,结果表明其在体外培养核型正常。 (2) 采集26.5d的WZSP胎儿53枚,其中33枚以经丝裂霉素C处理的STO细胞作为饲养层;其余20枚采用未经丝裂霉素C处理的PEF与EG细胞共培养的方式进行培养。在使用同种培养基的条件下,比较不同饲养层对猪的EG细胞分离培养与传代的影响。结果表明,STO细胞适合用作猪EG细胞分离培养、传代的饲养层;而采用PEF与EG细胞共培养的方式只适于原代PGCs的分离培养,传代后,仍需以STO细胞制备饲养层才能维持EG细胞的未分化状态,PEF不能维持EG细胞的传代培养。 (3) 采集26.5d的WZSP胎儿35枚,其中的15枚用BRL条件培养基进行培养;其余20枚以高糖DMEM+15%FCS+2mmol/ml L-谷氨酰胺+0.1mmol/ml非必需氨基酸+0.1mmol/ml β-巯基乙醇+100IU/ml青霉素+100μg/ml链霉素常规培养基进行培养,研究BRL条件培养基对猪EG细胞培养与传代的影响。结果表明,以STO细胞作饲养层,使用BRL条件培养基与常规培养基在猪EG细胞分离培养、传代后均可获得细胞集落,而且使用BRL条件培养基培养产生的集落数多,细胞生长速度快。因此,BRL条件培养基适于猪EG细胞的培养传代。 (4) 采集26.5d的WZSP胎儿78枚,其中的43枚用常规培养基(培养基Ⅰ)进行培养;剩余35枚在添加LIF、SCF、bFGF叁种生长因子的培养基(培养基Ⅱ)中进行培养。研究不添加生长因子对猪的EG细胞分离培养与传代的影响。实验结果表明,以STO细胞作为饲养层,在两种培养基中都能得到可以传代的EG细胞集落。但在培养基Ⅰ中原代EG集落出现时间晚,生长速度较慢,传代时间间隔长,EG细胞形态扁平;而在培养基Ⅱ中原代EG集落很快出现,生长速度较快,传代间隔短。两种培养条件下获得的EG细胞都具有胚胎干细胞的形态和特征。结果提示,以STO细胞作为饲养层,不添加生长因子的培养基也可以维持EG细胞的培养、传代。 (5) 采集26.5d的WZSP胎儿34枚,分离胎儿PGCs,以STO细胞为饲养层,以常规培养基进行培养。在EG细胞传代过程中,分别用dispase和0.25%的Trypsin-EDTA对其进行消化传代,比较两种消化液对传代的影响。结果表明,用两种消化液消化传代都能够获得新的可传代的EG细胞集落。因此,两种消化液均可用于EG细胞的传代培养。 (6) 对培养获得的3～4代的细胞集落进行鉴定,结果表明分离培养的EG细胞形态多样,集落内细胞排列紧密,集落边缘清晰,AKP染色呈强阳性,SSEA-1免疫荧光染色为阳性,Oct-4免疫荧光表达亦为阳性,体外悬浮培养可以形成简单类胚体,具有胚胎干细胞的诸多特征。
徐小明[6]2003年在《影响小鼠胚胎干细胞和牛胚胎生殖细胞分离克隆的因素》文中研究表明本研究以BALB／c小鼠为材料，建立免疫外科分离克隆小鼠ES细胞方法；并以牛胎儿为材料，从牛原始生殖细胞中分离克隆出牛EG细胞。对影响小鼠ES细胞、牛EG细胞分离与克隆的影响因素进行了探讨，为进一步建立小鼠ES及牛EG细胞系奠定了基础。实验主要结果如下： 1．用免疫外科法从45枚BALB／c小鼠囊胚中分离得到20枚除去滋养层细胞的ICM，接种在MEF饲养层上，使用DMEM(高糖)+15％FBS+0.1mMβ-巯基乙醇+0.01mM非必需氨基酸+1000 IU／ml LIF+100 IU／mL青霉素+100 IU／ml链霉素培养液，17枚形成典型的ICM集落，有一枚胚胎传至第10代。用于全胚培养的BALB／c小鼠胚胎共102枚，使用与免疫外科相同的培养方法，66枚形成典型的ICM集落，其中一枚胚胎传至第8代。 2．收集妊娠29～100d牛胎儿46例，使用DMEM(高糖)+15％NBS(或FBS)+0.1mMβ-巯基乙醇+2mM谷氨酰胺斗0.01mM非必需氨基酸牛100 IU／mL青霉素+100 IU／ml链霉素培养液从生殖嵴(腺)或类似物原始生殖细胞中分离克隆牛EG细胞，25例出现EG细胞集落，最高一例传至6代。胎龄为29～45d牛胎儿最适合牛EG细胞分离与克隆，胎龄大于70 d，很难得到牛EG细胞。 3．从45d牛胎儿中分离培养出牛胎儿成纤维细胞，传至28代。发现α-MEM是一种很好牛胎儿成纤维细胞分离培养的培养基。 4．小鼠胚胎贴壁率及ICM集落形成率在MEF、STO及BEF叁种饲养层上无显着差异(P＞0.05)；MEF、STO、BEF及HEF饲养层均能促进牛EG细胞体外增殖，但STO效果最好，MEF及BEF次之，HEF效果最差。 5．DMEM培养基对牛PGCs的分离培养及传代明显好于F12；15％NBS在小鼠胚胎贴壁率及ICM集落形成率上明显好于10％NBS(P＜0.05)；15％FBS较15％NBS有利于小鼠ES细胞(P＜0.05)、牛EG细胞的分离与克隆。 6．添加LIF(10ng／ml)有利于小鼠ES细胞(P＜0.05)、牛EG细胞的分离与克隆；LIF、SCF及bFGF(添加浓度均为10 ng／ml)叁种因子联合作用能明显促进牛EG细胞分离克隆。 7．BALB／c小鼠ES细胞对胰酶很敏感，0.05％胰酶+0.008％EDTA是较好的ES细胞消化液，对细胞综合损伤力小，且传代后ES细胞集落形成能力也较高(P＜0.05)。 分离得到的小鼠ES细胞、牛EG细胞，经形态学观察，AKP(或PAS)染色，体外分化实验，核型分析证明其具有胚胎干细胞的诸多特性。
李明, 李永海, 焦丽红, 郑行, 王维华[7]2002年在《猪胚胎干细胞/胚胎生殖细胞的分离和培养》文中认为胚胎干细胞(ES)/胚胎生殖细胞(EG)是一种来源于早期胚胎的多能性干细胞,在合适的培养条件下能在体外持续增殖而不分化,并具有向各种组织细胞分化的潜能,在细胞分化、发育、基因调节以及转基因动物的生产等方面具有重要的应用价值。最早由Evans等在小鼠上分离培养成功,后又陆续在兔、猪、牛等动物及人类有建系的报道,但除小鼠外,其它动物均未获得能参与生殖系嵌合的全能性ES细胞,其主要原因可能是尚未找到
况玲, 冯书堂, 余四九, 牟玉莲, 张勇[8]2004年在《猪胚胎多能性干细胞的分离培养》文中研究指明收集妊娠 2 6 .0～ 2 9.0d的猪胚胎 ,分离培养原始生殖细胞 (PGCs) ,在STO细胞饲养层上生长 ,形成了多能性干细胞 (EG)。发现其具有干细胞的显着特性 ,并能在体外定向分化为神经细胞、上皮细胞和胚泡细胞。试验使用A、B、C 3种不同的培养基培养PGCs ,结果在形成EG细胞集落的数量和EG细胞分化上有着明显的差距 ,说明血清的质量和浓度以及细胞因子对干细胞的生成和增殖有着重要的影响
况玲[9]2004年在《猪胚胎干细胞的分离、培养、鉴定和分化的研究》文中研究说明胚胎干细胞是从哺乳动物的早期囊胚内细胞和原始生殖细胞中分离、体外培养所获得的多能性干细胞。多能干细胞是研究哺乳动物胚胎早期发育、细胞分化、基因调控等发育生物学基本问题的理想模型，在组织工程学，药理学、家畜品种改良、动物转基因和动物克隆等方面具有重要的研究和应用价值。嵌合体是鉴定EG细胞多能性的方法之一，同时嵌合体的制作，也是EG细胞在研究发育遗传以及细胞分化过程中基因表达和调控的有效手段。精原干细胞是成体干细胞中唯一贯穿于整个生命过程中并能够自我更新和传输遗传基因到后代的细胞，对于雄性生殖力的恢复和生殖系基因修复精原干细胞具有重要的意义。本文以猪为试验材料，通过多方面的研究，对其原始生殖细胞建立EG细胞系的影响因素进行了研究，并就猪EG细胞的鉴定和体外诱导分化的方法进行了探索；通过对猪嵌合体的制作及对其进行的DNA分析，进一步证实EG细胞具有胚胎干细胞的多能性；此外，本文对猪精原干细胞的分离和培养进行了探讨。通过研究，我们获得了如下结论：（1）通过对26.5~29天的94个猪胚胎进行胚胎成纤维细胞的培养，证实其能够作为成纤维细胞培养的材料，也证明猪成纤维细胞可以用做饲养层细胞的制作以及作为动物克隆的核供体细胞。（2）作为EG细胞的饲养层细胞，STO细胞要求细胞形态整齐、边缘清晰、生长旺盛、立体感强，用丝裂酶素C处理后，其形态没有变化；将PGC细胞接种到STO细胞7～10天后，STO细胞没有出现发暗和空泡化等凋亡现象，能保证EG细胞集落的正常生长而不分化和凋亡。（3）作为培养EG细胞的猪胚胎，其胎龄不能超过28天，否则PGC将失去对刺激生长因子的反应，开始出现分化，并没有EG细胞集落的形成。通过对19个29天胚龄的猪胚胎的培养，发现没有胚胎形成EG细胞集落。（4）通过对ES专用胎牛血清、Hyclone特级胎牛血清和四季青优级胎牛血清的比较，作为EG细胞的培养，ES专用血清质量最好、四季青优级胎牛血清最差；在相同血清的前提下，将培养STO细胞的血清从10%提高到15%，STO细胞从其形态到生长速度都有明显改善。<WP=5>（5）10 ng/ml的SCF和10ng/ml的bFGF同样能使EG细胞增殖和维持未分化的状态；生长因子对原代EG细胞的培养影响不大，但随着EG的传代，生长因子的作用不可替代，否则EG细胞即开始明显分化。（6）EG细胞的传代时机直接影响到EG细胞建系的培养，在原代培养超过9～10天（即EG细胞生长最旺盛后的4-5天）后再传代，在新的饲养层上很难出现新的EG细胞集落。（7）在猪原始生殖细胞培养过程中，19个胚胎作为单胚培养有6个传代后明显分化，没有新的EG细胞集落形成；而以2～4个胚胎混合培养的分化程度低于单胚培养，其原因可能是混合培养中胚胎与胚胎之间的细胞分泌因子和细胞基质相互影响抑制EG细胞分化。（8）猪EG细胞AKP染色、SSEA-1抗体荧光免疫反应和Oct-4荧光免疫反应均为阳性，表明猪EG细胞表面有SSEA－1抗原和Oct-4基因的表达，同时也证明猪EG细胞具有胚胎干细胞多能性特性。（9）将EG细胞培养在无饲养层但涂有0.1%明胶的培养皿中，EG细胞将分化为成纤维样细胞、滋养层样细胞和神经样细胞。（10）猪EG细胞悬浮培养形成类胚体，再将类胚体贴壁培养，用维甲酸和二甲基亚枫诱导分化，类胚体可以形成神经样细胞、类桑椹胚、ES样细胞集落和滋养层样细胞。（11）取2～6天雄性仔猪睾丸进行精原干细胞的培养，发现睾丸支持细胞先于精原干细胞贴壁，其作为精原干细胞的饲养层维持精原干细胞的生长和增殖；精原干细胞呈集落状生长，AKP染色呈阳性反应，证明精原干细胞具有干细胞的多能性。（12）用五指山猪的PGC和EG细胞制作嵌合体，获得两头皮肤嵌和的小猪，经DNA微卫星分析，皮肤嵌和的猪在其皮肤、大脑、胰、甲状腺、血等各种组织中均发生了嵌合，同时也证明PGC和EG细胞具有多能性特性。
王木[10]2006年在《小鼠原始生殖细胞的分离和培养》文中研究指明本研究以昆明白小鼠为材料，从624例小鼠胎儿中分离培养原始生殖细胞(Primordial Germ Cells)并进行传代克隆和鉴定研究，探讨了影响胚胎生殖细胞(EG细胞)分离与培养的因素，为建立昆明白小鼠EG细胞系奠定了基础，试验结果如下： 1．试验从7.5dpc～14.5dpc的昆明白小鼠胎儿分离培养原始生殖细胞，7.5dpc～9.5dpc取胎儿后1／3部分，包括原条后端和尿囊，10.5dpc～11.5dpc取泌尿生殖嵴，包括中肾和生殖嵴原基，12.5dpc～14.5dpc取生殖嵴，并克隆传代，最高传至第8代； 2．试验用分次消化法处理胎儿，对比不同的消化液对PGCs分离克隆的影响。0.125％胰蛋白酶+0.02％EDTA、0.05％胰蛋白酶+0.008％EDTA和0.25％胰蛋白酶+0.04％EDTA，叁组消化差异不显着(P＞0.05)，都可以用于消化分离小鼠胎儿生殖嵴及复合物来获得PGCs； 3．试验比较了不同的培养系统：饲养层添加白血病抑制因子(LIF)，饲养层不添加细胞因子，饲养层添加大鼠心肌细胞条件培养基，结果是SD大鼠心肌条件培养基能够较好地用于分离培养昆明白小鼠PGCs，与添加LIF组差异不显着(P＞0.05)，但明显好于未添加细胞因子组，可以用于昆明白小鼠PGCs的分离培养； 4．试验比较了不同传代方法对小鼠胚胎生殖细胞(EG细胞)传代的影响，发现“手工传代”和“连同成纤维细胞一起消化”相比获得了较高的传代比率(P＜0.05)，手工传代“消化+连续离散”有利于保持传代细胞的增殖活力，尤其适合于EG细胞的后期传代； 5．试验比较了取胎儿身体后1／3部分共培养、生殖嵴共培养、“差速贴壁”培养和穿刺生殖嵴4种分离PGCs的方法对EG细胞分离克隆的影响，结果表明：生殖嵴共培养和差速贴壁方式获得了较好的分离效果(P＜0.05)； 6．对所分离的EG细胞经形态观察、AKP染色、体外分化能力检测，证实其符合小鼠EG细胞的一系列特征。
参考文献：
[1]. 猪胚胎干细胞（EG）建系影响因素的研究[D]. 董晓. 中国农业大学. 2003
[2]. 猪原生殖细胞的分离、培养及遗传印迹的研究[D]. 文江. 吉林大学. 2010
[3]. 猪胚胎干细胞（EG）嵌合体制作研究[D]. 刘立新. 中国农业科学院. 2003
[4]. 猪胚胎干细胞培养和建系的影响因素及对策[J]. 况玲, 冯书堂, 余四九, 牟玉莲. 中国兽医科技. 2004
[5]. 五指山猪近交系EG细胞建系影响因素研究[D]. 刘岚. 中国农业科学院. 2005
[6]. 影响小鼠胚胎干细胞和牛胚胎生殖细胞分离克隆的因素[D]. 徐小明. 西北农林科技大学. 2003
[7]. 猪胚胎干细胞/胚胎生殖细胞的分离和培养[C]. 李明, 李永海, 焦丽红, 郑行, 王维华. 中国动物学会全国显微与亚显微形态科学（细胞及分子显微技术科学）分会第十一次学术研讨会论文摘要集. 2002
[8]. 猪胚胎多能性干细胞的分离培养[J]. 况玲, 冯书堂, 余四九, 牟玉莲, 张勇. 中国兽医科技. 2004
[9]. 猪胚胎干细胞的分离、培养、鉴定和分化的研究[D]. 况玲. 甘肃农业大学. 2004
[10]. 小鼠原始生殖细胞的分离和培养[D]. 王木. 河南农业大学. 2006
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