（许昌市食品药品检验所 河南 许昌 461000）
【摘要】 目的：建立安神清心丸中盐酸小檗碱的高效液相色谱法测定。方法：采用反相高效液相色谱法，色谱柱Venusil ASB C18（5?m，150A，4.6×250mm）；流动相：乙腈-0.05mol/L磷酸二氢钾溶液（用磷酸调pH值至3.0）（50：50）；检测波长：345 nm；流速：1.0mL/min；柱温：30℃。结果：盐酸小檗碱进样量在0.03～0.6?g范围内与峰面积呈良好线性关系，r=0.99999；平均加样回收率为99.43%，RSD为0.98%(n=9)。结论：本法操作简便可靠，重复性好。可用于安神清心丸的质量控制。
【关键词】安神清心丸；盐酸小檗碱；高效液相色谱法
【中图分类号】R927.2 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2016）27-0397-02
Determination of Berberine Hydrochloride in Anshen qingxin Pills by HPLC
Wei Xiaorui.Xuchang Institute for Food and Drug Control, Henan Xuchang 461000
【Abstract】 Objective To establish a reversed–phase HPLC assay for determining the berberine hydrochloride in Anshen qingxin pills.Method The chromatographic system consisted of Venusil ASB C18 5?m，150A，4.6 ×250mm column:mobile phase of acetonitrile -0.05mol/L potassium dihydrogen phosphate solution (Adjusted to pH3.0 with Phosphoric Acid)(50:50) with a detection wavelength at 345nm. The flow rate was 1.0 ml/min and the column temperature was 30 ℃ .Results The linear range of berberine hydrochloride was 0.03～0.6μg, r =0.99999.The average recovery was 99.43% and the RSD was 0.98%(n=9).Conclusion This method is simple , reliable ,accurate, which offers advantages of higher sensitivity and higher precision and suitable for control the quality of berberine hydrochloride in Anshen qingxin pills.
【Key words】 Anshen qingxin pills, berberin hydrochloride,HPLC,determination of content
安神清心丸为医院中药制剂，系由珍珠母、琥珀、黄连、当归、栀子、地黄、炙甘草七味中药材组成，具有清心养血，镇静安神。用于胸中烦热，心悸失眠。黄连为该制剂的主药，为了控制该制剂质量，保证临床用药安全有效，故选择该制剂中的主药黄连的主要有效成分盐酸小檗碱作为指标成分，进行分析研究。本文建立了安神清心丸中盐酸小檗碱的含量测定方法。结果表明，该方法专属性强，干扰小，并具有较好的重现性，可用于安神清心丸中盐酸小檗碱的质量控制。
1.仪器与试药
LC-2010CHT高效液相色谱仪（日本岛津一体机）；MSA225S-000-DU电子天平。盐酸小檗碱对照品（中国食品药品检定研究院 批号：110713-201212）；安神清心丸（批号151201、160103、160216）与缺少黄连的阴性样品均为中医院制剂室制备；乙腈为色谱纯，水为超纯水，其余试剂均为分析纯。
2.方法与结果
2.1 色谱条件及系统适应性试验
色谱柱：Venusil ASB C18 5?m，150A，4.6×250mm；流动相：乙腈-0.05mol/L磷酸二氢钾溶液（用磷酸调pH值至3.0）（50:50）；流速：1.0mL/min；柱温：30℃；检测波长：345nm；进样量：10?L。理论板数按盐酸小檗碱峰计算应不低于4000。
2.2 对照品溶液的制备
精密称取盐酸小檗碱对照品6.9540mg，置100mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀。精密量取25mL，置50mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，制成每1mL含盐酸小檗碱30.1456μg的溶液，即得。
2.3 供试品溶液的制备
取本品适量，研细，取细粉约0.3g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入盐酸-甲醇（1∶100）的混合溶液50ml，称定重量，置50℃水浴中温浸15分钟，再超声处理（功率250W，频率50kHz）30分钟，放冷，再称定重量，用盐酸-甲醇（1∶100）的混合溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
2.4 阴性样品溶液的制备
按处方工艺制成缺黄连药材的阴性样品，按供试品溶液的制备方法制备阴性对照溶液。
2.5 干扰试验
精密吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性样品溶液各10μL，进行分析，记录色谱图。结果表明，安神清心丸中其他成分对盐酸小檗碱的测定无干扰（见图A、B、C）。
图 盐酸小檗碱对照品（A）、安神清心丸样品（B）、
安神清心丸阴性对照（C）
2.6 线性关系考察
精密吸取对照品溶液1、4、7、10、13、17、20?L，注入液相色谱仪，进行分析。以盐酸小檗碱峰面积为纵坐标Y，进样量为横坐标X(?g)绘制标准曲线，得到回归方程Y=4.3575×106X +4.2726×103，r=0.99999，结果表明，盐酸小檗碱在0.03～0.6?g之间呈良好的线性关系。
2.7 稳定性试验
取同一供试品溶液，室温放置，于0、2、4、6、8、12h进行测定，计算供试品中盐酸小檗碱峰面积值RSD为1.02%（n＝6）。结果表明，供试品溶液在12h内稳定性良好。
2.8 精密度试验
取盐酸小檗碱对照品溶液10?L，重复进样6次，记录色谱图，计算盐酸小檗碱峰面积值RSD为0.89%（n＝6）。
2.9 重复性试验
精密称取供试品细粉（160103）5份，制备供试品溶液，测得平均含量10.5875mg/g，计算供试品中盐酸小檗碱含量的RSD为1.06%（n＝5）。结果表明重复性良好。
2.10 回收率试验
采用加样回收法，精密称取已知含量的安神清心丸（160103）约0.15g，分别精密加入盐酸小檗碱对照品适量，按2.3项下方法制备供试品溶液，依法进行含量测定，计算回收率，结果见表1。
表1 盐酸小檗碱加样回收率测定结果（n=9）
3.讨论
3.1 《中国药典》2015年版一部中，黄连药材的含量测定采用盐酸-甲醇（1∶100）的混合溶液超声提取，本实验比较了超声20、30、40分钟盐酸小檗碱的提取效率，结果30分钟与40分钟提取效率相同，本着节能环保的理念，因此确定超声时间为30分钟。
3.2 本实验考察了不同比例的流动相，即乙腈-0.05mol/L磷酸二氢钾溶液（用磷酸调pH值至3.0）（35:65）和乙腈-0.05mol/L磷酸二氢钾溶液（50:50）（用磷酸调pH值至3.0）。结果表明乙腈-0.05mol/L磷酸二氢钾溶液（用磷酸调pH值至3.0）（50:50）的分离效果为最好，故选取此流动相。实验证明，本法回收率高，精密度、重现性好，样品处理简便，可作为安神清心丸的质量控制方法之一。
【参考文献】
[1]中国药典[S]. 2015年版一部 . 1477.
[2]金杏芳.高效液相色谱法测定黄连胶囊中盐酸小檗碱含量[J].中国药业，2012；21（11）：21.
[3]夏鹏霄，杨瀚春，袁洪泽，黄居兴.高效液相色谱法测定黄柏地榆胶囊中盐酸小檗碱的含量[J].中国药师，2009；12（2）：206-207.
论文作者:魏晓锐
论文发表刊物:《医药前沿》2016年9月第27期
论文发表时间:2016/10/9
标签：盐酸论文; 溶液论文; 小檗论文; 精密论文; 磷酸论文; 色谱论文; 黄连论文; 《医药前沿》2016年9月第27期论文;