（1浙江大学医学院附属第二医院生殖医学科 浙江 杭州 310000）
（2 浙江省立同德医院神经外科 浙江 杭州 310000）
【摘要】 目的：研究大黄减轻急性脑出血时脑水肿的作用机制。方法：72只SD大鼠随机分为模型组，大黄组及对照组，模型组及大黄组采用立体定向注射自体无肝素动脉血法制作大鼠急性脑出血模型，大黄组给予大黄注射液干预，比较各组大鼠第1、3、5、7天神经功能评分，脑组织含水量及伊文思蓝含量。结果：模型组1天神经功能缺损下降，3天下降到最低点；大黄组与模型组相比，各时间点神经功能缺损无显著差异 (P＞0.05)。模型组脑组织含水量在第1天开始上升(P<0.01)，3天达到高峰；大黄组在1、3、5、7天与模型组比较差异有显著性(P<0.01)。建模后第1天模型组大鼠的EB含量最高，其次是大黄组，与假手术组相比差异有显著性(P<0.01)，此后两组大鼠EB含量逐渐下降，第7天与假手术组无明显差异 (P＞0.05)。结论：大黄改善脑出血大鼠脑水肿，其可能通过改善血脑屏障损伤发挥作用。
【关键词】 大黄；脑出血；脑水肿；血脑屏障
【中图分类号】R285 【文献标识码】B 【文章编号】2095-1752（2016）19-0321-02
脑出血发病率占脑卒中的10％～20％，有极高的病死率和致残率，脑水肿是脑出血的主要并发症之一。既往研究[1]表明，大黄可减轻脑出血后出血半球脑水肿，改善神经功能，但其机制尚不明确。为此，我们通过大黄干预脑出血大鼠模型，进一步研究其改善脑出血时脑水肿的机制。
1.材料与方法
1.1 动物与分组
雄性12周龄SD大鼠72只，体重250～300g，适应环境1周后随机分为模型组、假手术组、大黄组，每组24只。每组分4个时间点：1天、3天、5天和7天，每时间点各6只。
1.2 动物造模
实验大鼠采用10％水合氯醛(3.6ml/kg)腹腔注射麻醉，固定解剖板上消毒，自腹股沟区分离出股动脉，自股动脉采集血液100μl，然后将动物固定于离体定向仪上，定位纹状体，使用微量泵将自体股动脉采集的血液注入纹状体，留针5分钟。假手术只将针置入纹状体，但不注血，留针时间相同。神经功能缺损评分采用Zausinger法[2]引进行。
1.3 大黄干预
大黄注射液由浙江省立同德医院药剂科负责制备，每毫升相当于大黄0.25g，含总蒽醌50mg，大黄用药量根据60kg体重的成人每日用20g大黄换算得出，每100g大鼠使用药液1ml，腹腔注射，每天2次，模型组及对照组给予同体积生理盐水干预。
1.4 检测方法
各组大鼠非别与造模后1天、3天、5天和7天进行检测。
1.4.1脑含水量测定采用干湿法测定。采集大鼠脑组织内血肿中心外侧缘1mm范围的脑组织约150mg，进行准确称重后置入烤箱中烘烤至完全脱水，一般约24小时，烘烤脱水完成后将脑组织标本再次进行精准称重，然后计算两次称重差值，计算血肿脑组织的含水量。
1.4.2神经功能缺损评分。根据Zausinger法，分别于造模后1天、3天、5天和7天对大鼠进行神经功能缺损评分的评定。评分采用单盲法减少误差。
1.4.3血脑屏障通透性测定采用伊文思蓝甲酰胺法。分别测定脑出血后各时间点脑组织EB含量(μg/g湿重脑组织)。大鼠处死前1小时经尾静脉注入2％EB(2ml/kg)，称取左半球湿重后置于甲酰胺(1ml/100g脑组织)中。60℃孵育24h。1000rpm/min，离心5min，分光光度计(x=632nm)测定上清液OD值，根据标准曲线计算出EB含量。
1.4.4统计学方法用SPSS 12.0统计软件对数据进行分析。检验方法采用单因素方差分析，组间比较采用SLN-q检验，P<0.05认为差异具有统计学意义。
2.结果
2.1 各组大鼠神经功能缺损评分比较
模型组及大黄组大鼠造模后第1天神经功能缺损评分下降，第3天下降到最低点；第5天及第7天评分较前升高，大黄组第大黄组与模型组相比，各时间点神经功能缺损无显著差异，假手术组同大黄组及模型组比较，各时间点神经功能缺损评分均高于模型组及大黄组 (P＞0.05)。
表1 各组大鼠神经功能缺损评分比较（分）
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注：与假手术组比较，*P<0.01；与模型组比较，#P<0.01
2.3 不同组造模后对脑组织EB含量的影响
建模后第一天模型组大鼠的EB含量最高，其次是大黄组，与假手术组相比差异有显著性(P<0.01)，此后两组大鼠EB含量逐渐下降，第7天与假手术组无明显差异 (P＞0.05)。
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图1 各组大鼠脑组织EB含量的测定
3.讨论
脑出血，属中医学中风范畴，又名“卒中”，大多数是高血压病伴发脑小动脉病变在血压骤升时发生。中医学认为，本病病因虽较复杂，但多由阴阳失调，脏腑气偏，气血逆乱所致，形成本虚标实的证候。近几年，将大黄用于治疗脑出血水肿成为研究热点。周氏发现大黄对脑出血后降温、降颅压有一定作用[3]。曹氏等用复方大黄液对幕上出血进行治疗发现治疗组在血肿吸收和神经功能缺损评分的治愈率方面均优于对照组[4]。此外，盖亚男[5]等早期应用生熟大黄煎剂观察脑出血患者急性期运动功能的恢复发现大黄通腑泻热，活血化瘀，可使脑功能改善，使病人运动功能恢复更快。本研究发现，大黄能够抑制伊文思蓝透过血脑屏障，而且能够减轻脑出血大鼠模型脑组织水肿，其可能通过减轻脑出血时脑血屏障功能损伤进而发挥减轻脑组织水肿，保护神经功能的作用。
【参考文献】
[1]孔令越，陈汝兴，邹刚.生大黄治疗脑出血大鼠的实验研究[J]. 辽宁中医学院学报. 2003(03): 272-273.
[2] Zausinger S, Hungerhuber E, Baethmann A, et al. Neurological impairment in rats after transient middle cerebral artery occlusion: a comparative study under various treatment paradigms[J]. Brain Res. 2000, 863(1-2): 94-105.
[3]周建燮，来华安，刘竹生等.生脉注射液云南白药和大黄粉治疗急性脑出血32例疗效观察[J]. 中西医结合实用临床急救. 1999(01): 20-21.
[4]曹利民，夏志荣，胡志诚.复方大黄液合西药治疗急性脑出血45例[J]. 中国中医急症. 2003(03): 267-268.
[5]盖亚男，王强，许海燕.早期应用生熟大黄煎剂对脑出血患者急性期运动功能恢复的影响[J].中国临床康复.2002(09): 1292.
浙江省中医药科学研究基金项目 编号 2016ZA001
论文作者:刘青1,金心2,贺军华2,曾剑平2
论文发表刊物:《医药前沿》2016年7月第19期
论文发表时间:2016/7/27
标签：大黄论文; 脑出血论文; 大鼠论文; 模型论文; 组织论文; 评分论文; 神经功能论文; 《医药前沿》2016年7月第19期论文;