孙忱[1]1999年在《PTA1在巨核细胞/血小板谱系中的表达，分布与功能研究》文中研究表明1985年Burns等用活化T淋巴细胞为免疫原免疫小鼠，通过淋巴细胞杂交瘤技术制备的LeoA1 mAb识别人T细胞活化抗原TLiSA1(T lineage-specific activation antigen 1)，并证实该分子与杀伤性T细胞的分化有关。Scott等进一步研究发现TLiSA mAb可以诱导人血小板活化聚集，竞争结合试验结果显示，每个血小板表面约有1200个TliSA分子，遂将此分子更名为PTA1(platelet and T cell activation antigen 1)。 本实验室与Burns教授实验室合作，对PTA1分子表达与分布及结构与功能进行了长期研究。主要实验结果包括：(1)多克隆T细胞刺激剂例如PHA、PMA、CD3单抗等诱导的人活化T细胞、长臂猿白血病细胞系MLA-144、T细胞杂交瘤47C7均表达PTA1分子，IL-1、IL-2、TNF-α和PMA等对人活化T细胞PTA1的表达有上调作用，而转化生长因子-β(TGF-β)则显示出明显的下调作用。PTA1多克隆抗体对NK细胞的分化有明显影响。(2)对全血细胞进行了系统的FACS分析表明，人静止T细胞、B细胞、粒细胞系统、单核细胞及红细胞系统均不表达PTA1分子。而正常人脐带血内皮细胞、早期髓样细胞系及部分巨核细胞系组成性表达PTA1分子，提示PTA1分子对髓系和巨核／血小板谱系发育、分化及细胞功能可能具有重要影响。(3)已完成PTA1／Ig融合蛋白真核表达载体的构建和表达及PTA1配体的部分鉴定工作。 最近，Sherrington等由TPA活化的人T细胞性白血病Jurkat细胞cDNA
菅金龙[2]2002年在《人CD226基因启动子序列和单核苷酸多态性研究》文中研究说明CD226又称为血小板和T细胞活化抗原1(platelet and T cell activation antigen 1,PTA1)，最早在1985年由Bums等发现，主要表达于活化T细胞、NK细胞、巨核及血小板谱系，参与T细胞的活化与分化以及血小板的活化和聚集。IL-2、TNF-α、PMA可以使T细胞PTA1表达上调，TGF-β可以下调PTA1的表达，而PMA加上钙离子载体A23187可以显著抑制PMA的上调作用，且这种抑制作用不被Calcineurin抑制剂FK506所逆转，1997年Burns教授从PMA活化的Jurkat细胞cDNA文库中克隆了PTA1cDNA全长，证实PTA1是一个新分子，属于免疫球蛋白超家族，胞膜外区有两个V样结构域。同年，我室成功克隆了猿和猴的PTA1基因，在cDNA及蛋白水平同源性为93％-95％。PTA1以及我室制备的一套mAb FMU1-7在2000年第7届人类白细胞分化抗原国 第四军医大学硕士学位论文 中文摘要 际协作会议中被命名为CD226。新近我室又成功克隆了小鼠CD226 CDNA，并发现有不同异型。 广义的启动子（promotor）包含有转录起始部位、RNA聚合酶与DNA 结合部位（也就是狭义的启动子）以及上游调控序列。转录水平是调控 蛋白质表达效率最高的环节，通过影响相应的转录因子与启动子和上游 调控序列的相互作用调控目的基因的表达，因此研究基因的启动子对于 了解基因的表达调控规律、阐明分子的结构和生物学功能乃至疾病的发 生都有重要的意义。随着人类基因组计划（Human Genome Project，HGP） 的完成和计算机科学的发展，生物信息学成为非常重要的研究手段，具 有高效、可预见性、综合性强的特点，已广泛应用于基因的筛选、基因 结构分析、RNA和蛋白质结构预测以及序列分析中。本研究应用生物信 息学方法分析了人CD226基因启动子序列和单核苦酸多态性位点，为今 后研究CD226基因表达调控奠定了良好的基础。 研究发现，人 CD226基因有两个启动子（狭义的启动子）PI和 PZ， 分别位于上 和J 处。PI、PZ序列中均有两个v干扰素反应元件 （INF－Y response elements；V－IRE人 PI和 PZ 3’侧 10－20hp内均有转录 因子 PEA3、EtS－1和 PU．1的共有结合序列。另外，在＊ 3侧有 GC bOX 和 IAIA bOX，在 PZ 3侧没有发现 TAJA bOX和 GC bOX，但有 GAGA boX。 在CD226基因上游还有AP一1、EtS一l、Spl、P300、PU．l、PEA3、CBP 等转录因子结合位点，可能参与 CD226基因的表达调控。在编码 CD226 胞浆区第307位氨基酸的密码子上存在AGT—GGT单核昔酸多态性 （single nucleotide polymorphism，SNP）；分别编码丝氨酸和甘氨酸。在 我们检测的 10例正常人PTAI CDNA中；有4例丝氨酸和6例甘氨酸； 这种多态性与CD226分子胞浆区信号转导的关系值得进一步研究。 另外，我室用天然分子制备了一套 CD226的单克隆抗体 FMUJ， FMUI－5识别的是 CD226分子胞膜外区 domain，FMU6和 FMU7识别 domain 2。通过这套抗体研究了 CD226在 T细胞表面结构和功能的关系： 发现 FMUl可以与 T细胞结合，F刚47不能与 T细胞结合。我们利 用FMU刁研究了CD226在血小板表面结构和功能的关系，发现与T细 胞类似，FMU 13可以与血小板结合，而 FMU47不能结合血小板；其 中 FNftJ和 FMUZ可以刺激血小板发生活化和凝集。
马东初[3]2005年在《CD226分子表达于造血干/祖细胞和巨核细胞谱系及神经细胞谱系参与巨核细胞倍体化调控》文中研究指明[目的]本课题旨在研究CD226分子在造血干/祖细胞和相关粒系,红系和巨核细胞谱系细胞上的表达,及造血干细胞跨胚层向神经细胞分化后,CD226分子表达的变化,探索了CD226分子在巨核细胞成熟过程中的作用及与淋巴细胞功能相关抗原-1的关系。 [方法]使用血小板生成素(thrombopoietin,TPO)和粒细胞集落刺激因子(granulocyte colony-stimulating factor,G-CSF)分别诱导成人和胎儿CD34~+细胞向巨核细胞和粒细胞分化。使用红细胞生成素(erythropoietin,EPO)诱导胎肝单个核细胞和成人CD34~+细胞向红细胞分化。使用含TPO的无血清培养基中长期培养扩增人胎肝CD34~+细胞,将扩增细胞置于Neurobasal培养基中,诱导其向神经细胞分化。使用RT-PCR,流式细胞术和免疫组化技术分析CD226分子和淋巴细胞功能相关抗原-1(lymphocyte function associated antigen 1,LFA-1)α亚单位(CDlla)在造血过程中表达的变化。使用抗体交联技术研究CD226分子和LFA-1分子在巨核细胞倍体化过程所起的作用。使用流式细胞仪和免疫组化染色技术分析CD34~+细胞向神经细胞分化过程中,CD226分子以及造血和神经细胞相关抗原表达的变化。
菅金龙[4]2005年在《CD226基因表达调控的研究》文中指出目的:研究人CD226基因表达调控的规律,确定CD226基因启动子的位置,研究细胞因子、刺激剂和转录因子对其的调节作用。 方法:①从50ng/ml PMA刺激48小时的Jurkat细胞中提取mRNA,采用5′-RACE的方法经过反转录和巢式PCR确定人CD226基因的转录起始点。②从GenBank中获取CD226基因的上游调控序列,利用www.ifti.org中的转录因子扫描程序,分析可能存在的转录因子结合位点,用手工比对的方法剔除分析结果中可能存在的假阳性,筛选可能性比较大的转录因子进行功能研究。③从正常人外周血中提取基因组DNA,以GenBank中获得的序列为模板设计引物,克隆了长约2kb的CD226基因上游调控序列。在此基础上,制备了不同的截断体,连入pGL3荧光素酶报告基因表达载体,转染Jurkat细胞48小时后检测荧光素酶活性,确定CD226的启动子的位置。④将含有CD226基因启动子序列的报告基因载体转染Jurkat细胞,用50ng/ml PMA和0.5μg/ml A23187分别刺激4小时和1小时,在转染48小时后检测荧光素酶活性,观察PMA和A23187对CD226基因启动子的调控作用。⑤把两个启动子间可能存在的负调控元件(NRE)通过PCR的方法,克隆到CMV启动子的下游,DNA测序正确后将CMV-NRE
参考文献：
[1]. PTA1在巨核细胞/血小板谱系中的表达，分布与功能研究[D]. 孙忱. 第四军医大学. 1999
[2]. 人CD226基因启动子序列和单核苷酸多态性研究[D]. 菅金龙. 第四军医大学. 2002
[3]. CD226分子表达于造血干/祖细胞和巨核细胞谱系及神经细胞谱系参与巨核细胞倍体化调控[D]. 马东初. 第四军医大学. 2005
[4]. CD226基因表达调控的研究[D]. 菅金龙. 第四军医大学. 2005