山东省安丘市雹泉中心卫生院 262121
摘要：目的 测定自身免疫性结缔组织病中抗Sa抗体的阳性率，着重分析抗Sa抗体在类风湿关节炎（RA）中的意义。方法 从人胎盘中提取Sa抗原，采用免疫印迹法，测定了40例健康人及478例各种自身免疫性结缔组织病患者血清中的抗Sa抗体，并分析了该抗体与RA的某些临床及实验室指标的相关性。结果 抗Sa抗体在各组患者中的阳性率分别为：RA为31.9%（61/191），干燥综合征为3.0%（2/67），系统性红斑狼疮为4.3%（2/46），白塞病、肌炎/皮肌炎、其他自身免疫性结缔组织病及正常人中均为0。研究分析表明，抗Sa抗体对RA的诊断敏感性为31.9%，特异性为98.7%，阳性预报率为93.8%，阴性预报率为71.3%。与抗Sa抗体阴性的RA患者相比，抗Sa抗体阳性的患者在关节受累、晨僵、血沉、抗核抗体、X线分期和二线药物的使用方面有显著差异。结论 我们在国内首次制备了Sa抗原，并建立了Sa抗体的检测方法，它是一种不同于类风湿因子、对RA诊断较为特异的新型自身抗体。该抗体与疾病的严重程度相关，能否有助于RA的早期诊断和分型尚需更多病例的积累和观察。
关键词：关节炎，类风湿性；抗Sa抗体
The significance of anti-Sa antigen in rheumatoid arthritis
Xu Shangdong，Tang Fulin，Shi Li，
et al. Peking Union Medical College Hospital，Beijing 100730
【Abstract】 Objective To set up a Sa antigen extract method and the Western blotting（WB）method used in anti-Sa antibody screening and test anti-Sa antibody in the serum of different autoimmune connective diseases（CTD）. Methods Sa antigen was extracted from human placenta. Anti-Sa antibody was tested in 40 normal controls and 478 CTD patients using WB. The relationship between anti-Sa antibody and clinical manifestations and laboratory findings was analyzed. Results Sa antigen is a protein with molecular weight 50 000 and 55 000. The positive rate of anti-Sa antibodies was 31.9%（61/191）in rheumatoid arthritis（RA）. 3.0%（2/67）in Sjogren syndrome，and 4.3%（2/46）in system lupus erythmatosus，while it was negative in Behcet disease（0/66），in PM/DM（0/66），in other CTD（0/66）and in normal controls（0/40）. Anti-Sa antibody is different from other auto-antibodies found in RA. In RA，its sensitivity is 31.9%，specificity 98.7%，positive prediction 93.8% and negative prediction 71.3%. The RA patients with anti-Sa antibody are significantly different from the patients without antibody in morning stiffness，ESR，ANA and X-ray grading. Conclusion Anti-Sa antibody is a new auto-antibody specific for RA. It may be used as a auxiliary diagnosis tool for RF. Anti-Sa antibody positive patients seem to have more serious inflammation and a more advanced disease process. Sa antigen molecular character and potential pathological mechanism merit further study.
【Key words】Rheumatoid arthritisAnti-Sa antibody
类风湿关节炎（RA）是一种危害人们健康的常见病，在自身免疫性结缔组织病中其患病率列首位。我国初步调查该病患病率在0.24％～0.40%之间［1］。该病如不能及时诊断治疗，即可发展为关节僵直、畸形、致残而严重影响劳动力。目前，国际上通用的美国风湿病学诊断RA的标准中主要是临床症状和X线诊断。类风湿因子（RF）虽然是一项重要的血清学指标，但并不特异，它在其他结缔组织病、感染性疾病、肿瘤和正常老年人中均可呈阳性［2］。因此，寻找RA的特异抗体是多年来临床风湿病学家的愿望。1994年Despres等［3］首先报道抗Sa抗体对RA诊断的特异性，他们发现：在未经选择的RA患者中，抗Sa抗体的阳性率为42.7%，特异性为98.0%。我们在此报道了抗Sa抗体测定的方法，并分析了抗Sa抗体阳性患者的有关临床和实验室特点。
材料和方法
一、标本收集
收集我院住院、门诊患者及正常献血者的血清共518份。其中RA 191例，干燥综合征（SS）67例，系统性红斑狼疮（SLE）46例，白塞病66例，肌炎/皮肌炎（PM/DM）60例，其他结缔组织病60例，正常献血者40名。所有血清分装后置于-20℃保存备用。抗SSA、SSB、核糖核酸蛋白（RNP）、Sm、Jo-1及Scl-70抗体均采用我院风湿免疫科常规检测的标准血清。标准Sa抗原和标准Sa抗体阳性血清均由加拿大Menard HA教授提供。
二、抗原提取［3］
新鲜人胎盘经匀浆后离心，取上清，加入DE52阴离子交换剂，搅拌，用不同的洗脱液洗脱，再行透析冷冻干燥，-20℃下保存。
期刊文章分类查询,尽在期刊图书馆抗原经用国外标准抗原和标准抗体进一步鉴定。
三、抗Sa抗体的测定［4～6］
20 mg胎盘提取物（Sa抗原）溶于180 μl SDS-PAGE样品缓冲液中，沸水中煮3分钟，加样，在10%的Tris-甘氨酸SDS聚丙烯酰胺凝胶中电泳。将分离的蛋白转移至硝酸纤维膜上，所有待测血清均用缓冲液1∶40稀释，与硝酸纤维膜孵育1小时。洗涤后，加入1∶1 000稀释的辣根过氧化物酶标记的鼠抗人IgG结合物。洗涤后，加入底物溶液（OPD-H2O2），反应10分钟，加入终止液，观察结果。出现分子量为50 000和55 000的2条印迹带者被判为阳性。
注：RF：类风湿因子，RNP：核糖核酸蛋白，ANA：抗核抗体
1.两组患者在年龄、性别、病程、合并SS、皮下结节上差异无显著性；但在晨僵、关节受累部位（包括近端指间关节、远端指间关节、掌指关节、腕关节、肘关节、肩关节、膝关节和趾关节）、使用二线药物方面差异有显著性。抗Sa抗体阳性组其病情明显重于抗Sa抗体阴性组。
2.两组患者的γ球蛋白、IgG、C反应蛋白、类风湿因子（RF）、抗SSA、抗SSB、抗RNP、总补体及补体C3等差异均无显著性，但抗Sa抗体阳性的RA患者其血沉增高、抗核抗体阳性率以及X线Ⅲ、Ⅳ期病期的比例明显增高。
讨 论
RA是一种慢性全身性炎性疾病，目前仍以临床表现作出诊断为主，而在临床上，许多慢性关节炎常与RA表现类似，加之RA早期表现的多样性，以及至今没有特异的生化、免疫或组织学诊断指标，常造成误诊。多年来，人们试图寻找一种RA特异的诊断指标，研究的领域主要集中在自身抗体、遗传标志物和组织特异性标志物上。直至近年，国外才发现抗Sa抗体是RA较特异的自身抗体，而国内至今尚未见报道。我们采用原作者Despres介绍的方法，进行了Sa抗原和抗Sa抗体的研究。
Sa抗原最早在人脾中发现，后又发现Sa存在于人的胎盘及类风湿滑膜翳中，推断Sa抗原可能存在于正常人体组织中，是人体的正常组成成分。从人脾中提取出的Sa抗原在免疫印迹上表现为分子量为50 000的条带；而从人胎盘中抗取出的Sa抗原在免疫印迹上多表现为分子量为50 000和55 000的2条带，有时亦可只有50 000的1条带，这可能是抗原在提取过程中降解所致。抗Sa抗体的产生机制尚不清楚。在RA患者的关节液中已发现抗Sa抗体的存在［7］，提示可能在原位发生抗原抗体反应，Sa抗原和Sa抗体反应可能在起始和保持RA的慢性损伤病程中起着潜在的作用。
抗Sa抗体不同于在RA中已发现的其他自身抗体，包括RF、抗RA33、抗Ro（SSA）、抗La（SSB）、抗RNP、抗Sm、抗Jo-1和抗Scl-70抗体，这在本实验中已得到验证。抗Sa抗体亦不同于核周因子（APF）［8］、RA核抗原和抗Hat-1［9］抗体。RF阳性和阴性的RA患者抗Sa抗体均可阳性，因此作为一种新的高特异性和高阳性预报率的抗体，抗Sa抗体可作为对RF的补充，尤其对RF阴性的RA患者，可成为诊断RA的一个指标。本研究得出的敏感性比Despres报道的42.7%低（31.9%），而特异性、阳性预报率和阴性预报率与国外报道相近。敏感性低可能与种族、病例选取、病期不同有关；也可能由于实验条件所限，抗原在提取过程中降解所致。
国外报道在RA的头几个月就可测出抗Sa抗体，且抗体滴度随疾病活动度和治疗而波动，提示抗Sa抗体的测定对RA的早期诊断、病情监测及指导治疗有所帮助。近期，我们发现1例患不对称少关节炎2年的女性患者，多次检查RF阴性，双手相无异常，经查Sa抗体阳性，是否为不典型RA，仍在随访之中。
我们发现Sa抗体阳性与阴性的RA患者在年龄、病程上差异无显著性；但晨僵、关节受累明显重于抗Sa抗体阴性者，且血沉增高、X线Ⅲ、Ⅳ分期比例亦明显高于阴性者；服用二线药物的患者也多。由此提示抗Sa抗体阳性者病程发展可能较抗Sa抗体阴性者快，炎症亦较重，故对疾病的分型有一定意义。如在疾病早期测得抗Sa抗体，对患者采取更为积极的治疗，或许可以防止关节畸形的发生。
国外已有用ELISA法检测抗Sa抗体的报道，但其结果与免疫印迹法所得结果不平行，究其原因，可能是Sa抗原在两种方法中其抗原性表现为不同的表位。抗Sa抗体的免疫印迹法检测如能进一步开发成试剂盒，可大量用于临床，具有一定的经济价值和社会效益。对Sa抗原、抗Sa抗体的进一步研究，将有助于探讨RA的发病机制，解决患者的疾苦。
参考文献：
1 张乃峥，Wigley R，曾庆馀，等.关于某些风湿性疾病在中国流行情况的调查.中华内科杂志，1995，34：79-83.
2 Morgan GJ Jr，Chow WS. Clinical features，diagnosis，and prognosis in rheumatoid arthritis. Curr Opin Rheumatol，1993，5：184-187.
3 Despres N，Boire G，Lopen-Longo FJ，et al. The Sa system：a novel antigen-antibody system specific for rheumatoid arthritis. J Rheumatol，1994，21：1027-1033.
4 J. 萨姆布鲁克，E.F. 弗里奇，T. 曼尼阿蒂斯，著. 分子克隆.金冬雁，黎孟枫，译.第2版.北京：科学出版社，1994.880.
5 Towbin H，Staehelin T，Gordon J. Electrophoretic transfer of proteins from polyacrylamide gels to nitrocellulose sheets：procedure and some applications. Proc Natl Acad Sci U S A，1979，76：4350-4354.
6 Kaufmann SH，Ewing CM，Sharper JH. The erasable Western blot. Anal Biochem，1987，161：89-95.
7 Despres N，Boire G，Menard HA. The rheumatoid arthritis specific Sa autoantigen is present in high concentration in the target tissue. Arthritis Rheum，1992，35（Suppl）：S72.
8 Westgeest AA，van Loon AM，van der Logt JT，et al. Antiperinuclear factor，a rheumatoid arthritis specific autoantibody：its relation to Epstein-Barr virus. J Rheumatol，1989，16：626-630.
9 Abe Y，Inada S，Torikai K. A new autoantibody in patients with rheumatoid arthritis：characterization of the anti-HaT-1 antibody system. Arthritis Rheum，1988，31：135-139。
论文作者:范宗军
论文发表刊物:《健康世界》2017年第5期
论文发表时间:2017/5/8
标签：抗体论文; 抗原论文; 阳性论文; 阴性论文; 患者论文; 关节论文; 结缔组织论文; 《健康世界》2017年第5期论文;