李婧辉1 周 恒1 徐鸿雁2
（1河北省迁安市中医医院内一科 河北 唐山 064400）
（2承德医学院附属医院中医科 河北 承德 067000）
【摘 要】目的：观察清上蠲痛合剂对偏头痛大鼠的预防作用及对血清中降钙素相关基因肽（CGRP）、一氧化氮（NO）；β—内啡肽（EP）的影响。方法：分组方法及给药方式 采用硝酸甘油(GTN)皮下注射法建立偏头痛大鼠模型，将成年健康SD大鼠72只，雌雄各半，体重188.29g±7.60g，随机分为正常组（生理盐水剂量：与等效剂量等容积），模型组（生理盐水剂量：与等效剂量等容积），清上蠲痛合剂高中低剂量治疗组（等效剂量，7.46g/(kg?d)），舒马普坦组（等效剂量，4.5mg/(kg?d)，浓度是1ml/mg），以上每组12只。预防组及模型组连续给药6天后造模用药。除正常组外，其余各组采用皮下注射硝酸甘油方法复制大鼠偏头痛模型，观察其耳红、甩头或挠头、爬笼出现时间、次数及持续时间等行为学指标后，采用酶联免疫法吸附法（ELISA）测定各组大鼠血清中CGRP、NO、EP的含量。结果：与正常组相比，造模后模型组大鼠血清CGRP和NO含量较正常组升高（P≤0.001），清上蠲痛合剂高、中剂量治疗组及琥珀酸舒马普坦治疗组均能抑制上述改变（P < 0.05），高、中剂量治疗组和舒马普坦对照组之间无统计学意义（（P > 0.05））。清上蠲痛合剂高、中剂量治疗组与清上蠲痛合剂低剂量治疗组比较，CGRP、NO的含量下降（P < 0.05），有统计学意义。造模后模型组大鼠血清β-EP含量较正常组下降（P <≤0.001）；清上蠲痛合剂高、中剂量治疗组及琥珀酸舒马普坦治疗组大鼠血清中β-EP含量较模型组明显升高（P < 0.05），舒马普坦对照组、及清上蠲痛合剂高、中剂量治疗组之间无统计学意义（（P > 0.05））。清上蠲痛合剂高、中剂量治疗组与清上蠲痛合剂低剂量治疗组比较，EP的含量上升（P < 0.05），有统计学意义。清上蠲痛合剂能明显预防和改善大鼠偏头痛发作，可能与调节机体CGRP、NO、EP的释放有关。
【关键词】清上蠲痛合剂；偏头痛；降钙素相关基因肽；一氧化氮；β—内啡肽
【中图分类号】R747.2 【文献标识码】B 【文章编号】1003-5028（2015）5-0064-02
清上蠲痛合剂是我院全国第三批名老中医万政据明代●龚延贤《寿世保元》中古方清上蠲痛方结合多年临床经验研制而成院内制剂--清上蠲痛合剂。具有养血活血、祛风通络、兼以调补气血固本之效，在临床中应用于各类急、慢性头痛取得了可喜的疗效。但其作用机制尚不清楚，也缺少相关的动物实验。本研究便是从实验研究方面对清上蠲痛合剂对偏头痛大鼠模型行为学及血清中的降钙素相关基因肽、β-EP、NO及的表达等方面进行研究，为进一步传承名老中医良方和临床推广运用清上蠲痛合剂防治偏头痛提供实验依据。
1 材料与方法
1.1 动物及分组 实验用SPF级SD大鼠72只，雌性各半，体重160-180g，在河北联合大学实验动物中心屏障环境动物实验室进行，实验动物使用许可证为：SYXK（冀）2010-0088，动物合格证号为：0002027，动物生产许可证号为：SCXK-（军）2009003。适应症饲养7天后（体重205.22g±6.65g）随机分为正常组（生理盐水剂量：与等效剂量等容积），模型组（生理盐水剂量：与等效剂量等容积），清上蠲痛合剂高、中、低剂量治疗组（等效剂量，7.46g/(kg?d)），舒马普坦组（等效剂量，4.5mg/(kg?d)，浓度是1ml/mg），以上每组12只。分别单独在代谢笼中饲养于恒定温度（21±3）℃的屏障实验室内，湿度（75±5）%，光暗周期为12h，动物自由摄食及饮水。
1.2 药物及试剂 清上蠲痛合剂(250ml/瓶，浓度：0.836g/ml，由迁安市中医医院制剂室制备，批准文号：冀药制字Z20051014)，硝酸甘油注射液（每支5mg/1ml，由北京益民药业有限公司生产，批准文号：国药准字HI3023201），琥珀酸舒马普坦片（每片100mg，由天津华津制药有限公司生产，批准文号：国药准字H20040700）。CGRP试剂盒（Elisa）、β-EP试剂盒、NO试剂盒（Elisa）（天津市灏羊生物制品科技有限责任公司提供，货号：RATCCGP2013、RATNO2013、RATEP2013）
1.3 造模和干预 根据成人清上蠲痛合剂及琥珀酸舒马普坦片每日用量，按体表面积换算[1]成大鼠用药量为7.46g/(kg?d)及4.5mg/(kg?d)， 适用性喂养6天。第7天除正常组外，采用改进的Christina tassorelli[4]方法，用硝酸甘油颈部皮下注射造模，正常组大鼠颈部皮下注射相同剂量的生理盐水。造模30分钟按组灌胃给药。正常组及模型组灌胃等容积的生理盐水。
1.4 行为学指标观察和内容：文献报道[2]模型复制成功的行为学症状为大鼠造模后出现耳红、前肢频繁挠头、爬笼次数增多及烦躁等。根据预实验，确定本实验的观察指标如下：①耳红时间，观察大鼠造模后耳红出现和消失的时间。②挠头时间，挠头出现的时间以大鼠出现连续挠头次数达5次以上为标志，消失时间以一个时间段中大鼠挠头次数少于5次为标志。以出现双耳发红，前肢频繁挠头，爬笼次数增多提示模型动物头部不适的症状为造模成功的指标。
1.5 大鼠血清CGRP、NO和β-EP含量测定 大鼠皮下注射硝酸甘油4小时后采集标本。经1%戊巴比妥钠30mg/kg麻醉后开胸，于右心房和上腔静脉交接处采血3～4ml。放置2小时后3000r/min离心10分钟，分离血清-70℃保存，CGRP、NO和β-EP含量测定均应用酶联免疫法吸附法（ELISA）测定。
1.6 统计学处理 计量资料用均数±标准差（x±s）表示，两组间比较用t检验，多组间比较采用重复测量的方差分析，用统计软件SPSS17.0进行分析，（P < 0.05）为差异有统计学意义。
2 结果
各组大鼠血清CGRP、NO和EP含量变化 ：与正常组相比，模型组大鼠CGRP、NO的含量升高（P≤0.001），舒马普坦对照组、清上蠲痛合剂预防组、高、中剂量治疗组CGRP、NO的含量下降（P < 0.05），与模型组比较有统计学意义（P < 0.05）。清上蠲痛合剂预防组、治疗组高、治疗组中、舒马普坦对照组之间无统计学意义（（P > 0.05））。清上蠲痛合剂治疗组高、治疗组中与清上蠲痛合剂治疗组低比较，CGRP、NO的含量下降（P < 0.05）。详见下表。
3 讨论
偏头痛是一种临床常见的慢性神经血管疾患，除患病率高外，还具有反复发作、无法根治、容易伴随其他系统疾病及精神障碍等特点。各国报道的年患病率女性为3.3% ～32.6%，男性为0.7%～16.1%[3]。偏头痛对生活质量的影响是巨大的，超过1／2的患者的头痛会影响工作或学习，近1／3的患者可因头痛而缺工或缺课。世界卫生组织（WHO）发布的2001年世界卫生报告将常见疾病按健康寿命损失年（Years Lived with Disability，YLD）进行排列，偏头痛位列前20位，并将严重偏头痛定为最致残的慢性疾病，类同于痴呆、四肢瘫痪和严重精神病[4]。因此防治偏头痛仍是当今医学界函待解决的重要课题。
清上蠲痛合剂是我院全国第三批名老中医万政据明代●龚延贤《寿世保元》中古方清上蠲痛方结合多年临床经验研制而成院内制剂--清上蠲痛合剂。方中当归、川芎、天麻补血活血、熄风通络，为君药，川芎为治头痛之圣药，通行十二经，上达巅顶，下行血海，走而不守，具有活血行气、祛风止痛之功效；葛根缓解颈枕部肌肉挛急，且为阳明经头痛引经药；红花活血祛瘀通络；菊花、蔓荆子、防风、羌活、独活、苍耳子、细辛等祛风止痛，蔓荆子、羌活为为太阳经引经药，共为臣药；苍术、白芍、生地黄、麦冬、黄芩健脑益胃、养阴柔肝共为佐药；甘草调和诸药，缓和药性，为使药。诸药合奏养血活血、祛风通络、兼以调补气血固本之效，在临床中应用于各类急、慢性头痛取得了可喜的疗效。与《寿世保元》中原方相比，加大菊花、甘草、葛根、天麻、白芍的用量，万老尤重用天麻，减少麦冬、黄芩用量，使本方寒溫并用，润燥结合，气血双调，相辅相制，配伍严谨，相得益彰，效如桴鼓。
本研究选用了硝酸甘油导致偏头痛的大鼠模型。硝酸甘油模型较其他模型相比而言，具备良好的表面效度 [5]，且造模简单经济、机制单一、再现性强、易于复制、适用性广[6]。模型组大鼠血清CGRP和NO含量较正常组升高（P < 0.05～0.01），β-EP含量较正常组下降（P < 0.05～0.01），这与国内外实验结果基本一致[7] ，清上蠲痛合剂可以抑制模型大鼠外周血浆NO、降钙素相关基因肽（CGRP）的升高（P < 0.05），上调血浆β-EP的水平；上调偏头痛模型大鼠中脑P物质mRNA表达，减弱下丘脑、脑干神经元的兴奋性，阻止痛觉信息的传递；从而调节偏头痛大鼠血管活性物质和神经递质的水平，缓解偏头痛症状，有效预防及治疗偏头痛的发作。
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课题名称：
清上蠲痛合剂对偏头痛大鼠中脑P物质mRNA表达的影响（拟申请河北省科技厅2014年度河北省科技计划自筹经费项目项目）
论文作者:李婧辉1,周,恒1,徐鸿雁2
论文发表刊物:《河南中医》2015年5月供稿
论文发表时间:2015/10/10
标签：合剂论文; 偏头痛论文; 剂量论文; 大鼠论文; 模型论文; 硝酸甘油论文; 含量论文; 《河南中医》2015年5月供稿论文;