（江苏省扬州市江都人民医院病理科 江苏 扬州 225200）
【摘要】 常规苏木素-伊红（hematoxylin-eosin，HE）染色是病理学技术中最常用的染色方法。近年来随着医院规模的扩大，病理科工作量也随之增长，传统的手工操作已难以适应大批量制片工作的要求。本科室自2014年引进Thermo全自动染色封片机应用于常规HE染色，制片工作效率和染色质量显著提高。现将应用体会报告如下。
【关键词】 全自动染色封片机；苏木素-伊红染色；使用；维护保养
【中图分类号】R446 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2016）27-0333-02
1.Thermo全自动染色封片机系统
Thermo全自动染色机由软件和硬件两部分组成，具有以下特点：可预置多种染色程序；可通过计算最快染色途径和最短移动距离来实现高效率染色；可监控所有正在运行的染色程序，定位染色架的试剂位点及显示每一染色架的开始时间、预计结束时间；有加急染色功能，可用最快的速度完成“加急”样本染色且不会与当前运行的染色程序冲突；试剂管理系统可记录每个试剂缸的使用次数，提醒用户及时更换；配有内置电池，突发停电后能继续工作40分钟完成剩余染色工作（HE染色程序约40分钟左右）。Thermo全自动封片机具有以下特点：可同时处理组织学和细胞学玻片，自动识别不同样本、自动调节封片胶量；配备内置电池，突发停电后能继续完成剩余盖片工作。
2.使用方法
2.1 仪器设备
美国Thermo Varistain? Gemini ES全自动染色机和ClearVue?封片机，12个染色架（每架可盛放20张玻片）。
2.2 试剂
Baso HE染液（Harris苏木素、醇溶性伊红、碳酸锂返蓝液），80% 乙醇，95% 乙醇，无水乙醇，1%盐酸酒精，二甲苯、中性树胶。
2.3 方法
首次使用需将常用染色程序输入全自动染色机。
切片前，染色机和封片机需提前开机待用。
期刊文章分类查询,尽在期刊图书馆蜡块切片后，将蜡片贴附于已打印病理检查号的载玻片上，以纸巾吸干玻片边缘的水分，按次序插入染色架，放入烤箱65℃烤片15min，之后将染色架放入Thermo全自动染色机中染色，Thermo全自动染色机HE染色程序：（1）二甲苯5min，（2）二甲苯5min，（3）二甲苯5min，（4）无水乙醇1min，（5）无水乙醇1min，（6）95%乙醇1min，（7）80%乙醇1min，（8）流水冲洗：1min，（9）苏木素 10min，（10）流水冲洗1min，（11）1% 盐酸酒精1s，（12）流水冲洗 1min，（13）碳酸锂返蓝 1min，（14）流水冲洗1min，（15）伊红（醇溶性）根据情况选择时间，（16）流水冲洗1min，（17）80% 乙醇 1min，（18）95% 乙醇1min，（19）100%乙醇1min，（20）100% 乙醇 1min，（21）二甲苯30s，（22）二甲苯30s，（23）二甲苯 30s。
染色完毕后，取出染色架，置于Thermo全自动封片机中封固。
3.结果
HE染色结果：石蜡切片色彩亮丽，对比鲜明，红蓝适度，组织结构和细胞形态清晰，整个切片透明洁净，无溢胶，无汽泡。
4.讨论
4.1 Thermo全自动染色封片机系统的优势
4.1.1染色效果可靠、切片整洁美观
与手工染色相比，Thermo全自动染色机制作的HE石蜡切片染色均匀，色彩鲜明，胞质和胞核着色良好、对比清晰，深得病理医师认可。人工封片速度慢，容易发生溢胶、漏胶等现象，手法不当时会有气泡产生。全自动封片机通过调节滴胶量和胶长等参数，能有效解决人工封片的缺陷，所制作的切片透明洁净、整洁美观。
4.1.2高效
传统手工染色操作繁琐、费时费力。Thermo全自动染色机通过计算机的精确编程，能同时进行大批量石蜡切片的染色处理(最少200片/h，每个染色架装载20张切片，每隔5分钟即可加载下一个染色架)。Thermo全自动封片机可同时处理11架玻片（约5分钟完成一架玻片的盖片），与手工封片相比，Thermo全自动封片机速度快、效率高，省时省力。
4.1.3稳定
传统手工染色过程主要靠技术员的经验控制，且常涉及多人操作，受人为因素的影响，同一批次石蜡切片常常出现染色效果不一致的现象[2]。Thermo全自动染色机的各步骤由计算机精确控制，在相同染色程序的控制下，同一批次组织切片染色效果一致，避免了人工染色的随意性和不稳定性。
4.1.4安全
脱蜡、透明需要用到二甲苯，中性树脂类封片胶也采用二甲苯进行溶解，而二甲苯是一种具有挥发性的有毒物质，如果操作者长期接触或吸入，容易对其神经、生殖等系统造成损害[1]。Thermo染色机和封片机是在相对封闭的空间内完成操作的，且二者都装有活性炭过滤系统，有效减轻了二甲苯等有害气体对环境的污染和工作人员的伤害，安全性好。
4.2 Thermo全自动染色封片机系统使用过程中出现的问题及解决方案
Thermo全自动染色封片机系统虽然有诸多优点，但在实际应用中如果管控不当也会出现一些问题，总结如下。
4.2.1石蜡切片上出现斑点状不规则未着色区
全自动染色机盛放脱蜡液的染色缸体积较小，空间有限，若二甲苯（最理想的脱蜡液是二甲苯；从生物安全和环境保护上考虑，可以选择环保脱蜡液）更换频率较低，则很容易出现脱蜡不尽的现象。石蜡切片组织上脱蜡不完全的区域，苏木素和伊红无法着色，因此切片上会出现不规则未着色区。这提示，技术人员在应用Thermo全自动染色机制片的工作中要及时更换脱蜡液。
4.2.2石蜡切片上出现区域性苏木素着色不良的现象
石蜡切片上伊红着色较好，仅部分区域出现苏木素着色不良，这说明脱蜡效果尚可，此现象主要是梯度乙醇未能充分洗脱用于脱蜡的二甲苯导致的。因此石蜡切片上会出现伊红着色而苏木素不着色的现象。与传统染缸相比，Thermo全自动染色机的染缸较小，装载的乙醇有限，若梯度乙醇更换不及时，很容易导致石蜡切片上的二甲苯洗脱不彻底。
4.3 试剂更换及机器的管理与维护
为确保染色机的最佳工作状态和染色质量，合理的使用和日常维护必不可少。在使用Thermo全自动染色封片机的过程中，我们的体会如下。
4.3.1试剂更换
每次开机，应先检查各缸试剂的液面高度，不足部分及时添加，并根据试剂管理日志对试剂进行更换或调整。脱蜡的二甲苯和脱二甲苯的乙醇按前面介绍的方法进行更换；苏木素每周过滤1次，每月更换；伊红的更换需要根据染色效果进行调整，一般一缸染液可连续使用3～4周，新的伊红染液染色时间只需1s，随切片量的增加和使用时间的延长染色时间需逐渐加长；为节约成本，脱水透明的试剂采用“前移法”更换，即废弃第一缸乙醇或二甲苯，将后面的液体依次前移，只在最后一缸相应的乙醇或二甲苯槽中加入新的液体[2]。
4.3.2机器的管理与维护
染色机内部染色缸之间的溢液应及时用酒精擦拭。染色缸每2周倒出液体后清洗，先用漂白液浸泡以清除染液残留，再用温和清洁剂和水冲洗。水槽的进出水口较小，长期使用易生霉、堵塞，需定期清理：每天运行结束后水槽内的积水需放净；每周以84消毒液彻底清洗水槽一次；定期用10ml注射器抽吸进水阀以达到清洗和疏通的目的。
Thermo全自动染色封片机系统不但能显著提高常规制片的染色质量，减轻技术人员的工作强度，还具有安全环保等特点，若管理维护得当，该系统对于标本量较大的医院而言具有明显的效率优势，值得推广应用。
【参考文献】
[1]马恒辉，章如松，周航波等.全自动染色机在常规染色中的应用[J].中华病理学杂志，2006，35(3):183-184.
[2]杨军，姜冰，彭长缨等.全自动染色工作站的临床应用体会[J].华中医学杂志，2008，32(3):195-196.
论文作者:赵鑫,丁岚
论文发表刊物:《医药前沿》2016年9月第27期
论文发表时间:2016/10/9
标签：全自动论文; 甲苯论文; 切片论文; 苏木论文; 乙醇论文; 伊红论文; 石蜡论文; 《医药前沿》2016年9月第27期论文;