董磊 张鹏 楚中亚
（河南省漯河市中医院 河南漯河 462000）
【摘要】目的：建立中药注射液中辅料吐温80的含量测定方法，为中药注射液的安全性检测提供方法和理论依据。方法：采用分子排阻－蒸发光散射（SEC-ELSD）法测定中药注射液中吐温80的含量。结果：中药注射液中吐温80含量差异较大。结论：文献表明吐温80可引起不良反应，因此为保证产品质量的 安全性，应在现行标准中增加吐温80的含量检查项，对其用量进行有效控制。
【关键词】丹参注射液；香丹注射液；吐温80；含量测定
【中图分类号】R927.2 【文献标识码】A 【文章编号】1007-8231（2015）14-0235-02
吐温80（聚山梨酯80），其化学名为聚氧乙烯20山梨醇酐单油酸酯，为淡黄色至橙黄色的粘稠液体，在水、乙醇、甲醇或乙酸乙酯中易溶，在矿物油中极微溶解。是由山梨醇及其失水化合物的单油酸酯与环氧乙烷在碱性条件下缩合而成。我国常采用其作为注射液中的助溶剂。但随着近年来药理学研究的深入，人们认识到吐温80是具有一定生物和药理活性的物质，并与药物临床上出现的不良反应相关[1]。本文建立了中药注射液中辅料吐温80的SEC-ELSD含量测定方法，以此对中药注射液质量的稳定性和安全性进行综合评价和分析。
1.材料与试药
1.1 仪器
岛津SHIMADZU LC-2010A型高效液相色谱仪（配有四元梯度泵、自动进样器、柱温箱、SEDEX ELSD 75型蒸 发光散射检测器、CLASS VP色谱工作站）日本岛津公司；FA2104N分析天平（上海四瑞仪器有限公司）。
1.2 试药及试剂
吐温80（上海申宇医药化工有限公司，批号090115）；丹参注射液样品（四川某制药厂，批号1311053，1311054，1311055）；乙腈（色谱纯，山东禹王实业有限公司化工风公司）；其他均为分析纯。
2.吐温80含量测定方法的建立
2.1 色谱条件的确定
2.1.1色谱柱的确定 采用TSKgel G2000SWXL（7.8mm×30 cm，5 μm）色谱柱。
2.1.2流动相的选择 分别考察乙腈-0.02mol/L乙酸铵比例为（30:70），（20:80）、（10:90）三个比例，对分离效果进行综合分析，最终确定流动相为乙腈-0.02mol/L乙酸铵比例为（10:90）。
2.1.3流速的选择 以乙腈-0.02mol/L乙酸铵比例为（10:90）为流动相，分别考察了0.2ml/min，0.4ml/min，0.6 ml/min三个流速，最终确定基线较平稳，分离效果较好且分析时间适当的流 速0.6 ml/min。
2.1.4柱温的选择 分别考察了25℃，30℃，35℃，40℃四个柱温，对出峰时间和色谱分离情况进行综合分析，最终确定柱温为35℃。
2.2 对照品溶液的制备
精密称取吐温80对照品适量，加流动相制成每1mL含有4.0 mg的溶液，作为对照品溶液，即得。
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2.3 供试品溶液的制备
取本品，0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。
2.4 含量测定方法的确定
最终确定吐温80含量测定方法如下：色谱条件：TSKgel G2000SWXL（7.8mm×30cm）色谱柱；以0.02mol/L乙酸铵－乙腈（90:10）为流动相；流速为0.6ml/min；柱温为35℃；蒸发光散射检测器检测。供试品溶液的制备：取本品0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。
测定法：精密吸取对照品溶液及供试品溶液各10μL，注入高效液相色谱仪，测定，即得。
3.方法
3.1 精密度考察
取2.2项下对照品溶液，连续进样6次。结果峰面积的RSD为0.96%，表明仪器精密度良好。
3.2 线性关系考察
精密量取吐温80对照品100.50mg，置10mL量瓶中，加流动相制成浓度为10.05mg/mL的溶液，精密吸取1μL、5μL、10μL、15μL、20μL、25μL，进样测定。将所得峰面积与所对应的对照品进样量（μg）进行线性回归，得回归方程Y=29000X-26000，r=0.9995，结果表明，吐温80进样量在10.05～251.25μg范围内与峰面积呈良好线性关系。
3.3 专属性试验
按注射液制法制成缺吐温80的试样，按供试品溶液制 备方法制成阴性供试品溶液，进样10μL依法测定。结果在吐温80峰对应的保留时间处无干扰杂质峰，说明方法专属性良好。
3.4 重复性试验
取同一批号的样品，按含量测定方法，分别制备6份供 试品溶液，测定吐温80的含量，结果RSD为1.05%，表明方法重复性良好。
3.5 稳定性试验
精密吸取同一样品的供试品溶液10μL，分别于0h、2h、4h、8h、12h、16h、24h、48h进样测定，结果的RSD为1.38%，表明供试品溶液在48h内稳定性良好。
3.6 加样回收率试验
精密量取已测知吐温80含量（0.752mg/mL）的丹参注 射液样品6份（批号1111053），每份5mL置10mL量瓶中，分别精密加入4.02mg/mL吐温80对照品溶液0.5mL、1mL、2mL，每个梯度平行2份，按上述方法制备供试品溶液，进样10μL，按拟定色谱条件测定，计算回收率。
4.样品含量测定
取3批样品按供试品制备方法制备供试品溶液，依法测 定。结果3批丹参注射液中吐温80含量分别为0.752mg/mL、 0.751mg/mL、0.783mg/mL。
5.讨论
吐温80是常用的药用辅料，在中药注射液中起到助溶的作用，因能够引起动物出现类似人临床表现的严重不良反应症状，且用量与不良反应的出现和严重程度间存在相关性[1-2]。应考虑增加吐温80的含量检查项，对其用量进行有效控制，减少临床使用时不良反应的发生。
试验过程中，吐温80含量测定的回收率高，符合中药质 量标准分析方法验证指导原则的要求，方法较成熟，为了更好 的控制产品质量和保证患者用药安全，减少不良反应的发生，本试验建立了分子排阻-蒸发光散射（SEC-ELSD）法测定注射液中辅料吐温80的含量，并对注射液进行了吐温80的检测，结果显示，本方法专属性强，操作简单，结果准确，出峰时间比较合适，且分离度好能够满足注射液中吐温80的检查。
【参考文献】
[1]孙伟伟，李贻奎，张金艳等.吐温80及其配制的鱼腥草注射液致豚鼠过敏反应的实验研究[J].中药新药与临床药理，2011，01:53-57.
[2]丛英，张明令，苏柘僮等.中药注射剂用辅料“吐温80”的增溶适宜性研究[J].中成药，2011，03:76-79.
论文作者:董磊,张鹏,楚中亚
论文发表刊物:《心理医生》2015年14期供稿
论文发表时间:2016/5/11
标签：注射液论文; 吐温论文; 溶液论文; 含量论文; 色谱论文; 精密论文; 中药论文; 《心理医生》2015年14期供稿论文;