（江苏南京高淳人民医院检验科 江苏 南京 211300）
【摘要】目的：探讨亚抑菌浓度抗生素对金黄色葡萄球菌杀白细胞素（PVL）表达的影响，旨在为临床治疗提供有效指导。方法：采用倍比稀释法测定头孢克定、克拉霉素、米诺环素、替考拉宁在PVL阳性金黄色葡萄球菌中的最低抑菌浓度（MIC），用荧光定量PCR法测定PVL阳性金葡菌以及在各抗生素的1/8、1/4、1/2MIC作用下PVL mRNA的表达情况；ELISA测定PVL阳性金葡菌以及在各抗生素的1/8、1/4、1/2MIC作用下PVL的表达情况。结果：头孢克定、克拉霉素、米诺环素、替考拉宁在1/8、1/4、1/2MIC作用下PVL mRNA分别降低17%、53%、81%；15%、57%、75%；25%、63%、77%；7%、15%、18%。PVL水平在1/4MIC及1/2MIC下头孢克定、克拉霉素，以及1/2MIC下米诺环素降低明显。替考拉宁对PVL的表达无明显影响。结论：亚抑菌浓度的抗生素对PVL的表达具有抑制作用，但不同抗生素的影响不同，头孢克定、克拉霉素对PVL的抑制效果最为明显。
【关键词】亚抑菌浓度；金黄色葡萄球菌；杀白细胞素美；抗生素
【中图分类号】R446 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2017）10-0237-02
金黄色葡萄球菌是一种可产生多种毒素因子并导致人类感染的革兰阳性球菌，其对人体的致病毒力主要与其产生的毒素密切相关，包括杀白细胞素、溶血素、肠毒素、凝固酶等。随着各种抗生素的大量使用，金葡菌的耐药株在全球范围内越来越多，耐药性越来越强。临床上对于金葡菌的有效抗生素可选择性越来越少，因此越来越多的学者致力于研究金葡菌感染的新的治疗方法。近年来关于细菌菌体结构成分及其代谢物质在抗生素应用治疗过程中的改变的研究越来越多，Krut[1]等研究发现，不同的抗生素对金葡菌溶血素的表达影响不同，有些具有很强的抑制作用，但是有些则甚至会增加溶血素的表达。本文研究探讨亚抑菌浓度抗生素对金黄色葡萄球菌杀白细胞素表达的影响，旨在为临床治疗金葡菌感染、降低耐药性、更有效发挥抗生素作用提供一个新的思路。
1.资料和方法
1.1 一般资料
PVL阳性金黄色葡萄球菌菌株购自美国模式培养物集存库，头孢克定、克拉霉素、米诺环素、替考拉宁均购自中国药品生物制品检定所。
1.2 实验方法
1.2.1最低抑菌浓度的测定 严格按照美国临床实验室标准化研究所（CLSI）的指导方针[2]，采用倍比稀释法药物敏感性实验测定头孢克定、克拉霉素、米诺环素、替考拉宁在PVL阳性金黄色葡萄球菌中的最低抑菌浓度（MIC）。
1.2.2 PVL mRNA表达情况的测定 将金黄色葡萄球菌接种于TSB液体培养基中，在37℃、200r/min条件下震荡培养，培养至对数生长初期（OD=0.3）时，分装入各玻璃培养管中，加入各浓度的抗生素，与未加抗生素的菌液玻璃管共同在37℃下震荡培养6h后，严格按照上海生工生物工程有限公司总RNA提取试剂盒说明书提取总RNA，采用Takara RNA PCR kit Ver.3.0试剂盒说明反转录获得cDNA，引物序列设计及合成均由上海生工生物工程有限公司完成，PCR反应在94℃预变性5min，94℃变形5min，59℃退火30s，72℃延伸40s进行40个循环。72℃延伸阶段读取荧光染料信号，PVL为扩增目的基因，gyrB管家基因。
1.2.3 PVL表达情况的测定 取含上述个抗生素培养后的菌液，10000r/min离心10min，取上清液，按照美国CLOUD-CLONE 公司的ELISA试剂盒进行操作，抗生素培养后的菌液与无抗生素培养的菌液OD值比较来测定PVL含量。
1.3 统计学处理
采用SPSS 19.0统计学软件对数据进行处理，计量资料用x-±s表示，组间比较用t检验，P＜0.05表示差异具有统计学意义。
2.结果
2.1 最低抑菌浓度
头孢克定、克拉霉素、米诺环素、替考拉宁对该菌株的MIC分别为0.05ug/ml、0.25ug/ml、8ug/ml、0.5ug/ml。
2.2 PVL mRNA表达情况
在1/8MIC下米诺环素、1/4MIC及1/2MIC下头孢克定、克拉霉素、米诺环素，PVL mRNA的相对表达均明显下降，差异具有统计学意义（P＜0.05）。替考拉宁PVL mRNA表达情况无明显变化。见表。
2.2 PVL表达情况
1/4MIC及1/2MIC下头孢克定、克拉霉素，以及1/2MIC下米诺环素PVL的相对表达均明显下降，差异具有统计学意义（P＜0.05）。
3.讨论
杀白细胞素是一种由17种氨基酸组成的不耐热的蛋白质，对人的中性粒细胞及巨噬细胞具有高度特异性，可改变细胞的三磷酸腺苷结构，导致K+、Mg2+向细胞膜外逸出，Na+—K+ATP酶功能受损，并抑制环磷酸腺苷-磷酸依赖性蛋白激酶的活性，c AMP在胞内积聚，细胞内外代谢紊乱，离子浓度失衡[2]。PVL可以增强细胞膜磷脂酶的活力，造成细胞膜破损细胞裂解。因此PVL能够大量杀死炎症细胞，使得炎症扩散并加重，在金黄色葡萄球菌的化脓感染中具有重要作用。
本研究结果表明，在1/8MIC下米诺环素、1/4MIC及1/2MIC下头孢克定、克拉霉素、米诺环素，PVL mRNA的相对表达均明显下降，1/4MIC及1/2MIC下头孢克定、克拉霉素，以及1/2MIC下米诺环素PVL的相对表达均明显下降，差异具有统计学意义（P＜0.05）。替考拉宁PVL mRNA表达情况无明显变化。因此亚抑菌浓度的抗生素对PVL的表达具有抑制作用，但不同抗生素的影响不同，头孢克定、克拉霉素对PVL的抑制效果最为明显。临床上可以根据不同抗生素对金葡菌杀白细胞素表达的影响，选择更加合适的抗生素，从而减少耐药性，增加抗生素疗效。
【参考文献】
[1] Krut O,Koszczol C,Bernardo K,et al.Subinhibitory quinupristin/dalfopristin attenuates virulence of Staphylococcus aureus [J].Journal of Antimicrobial Chem-otherapy.2006,58:564-574.
[2]李春，王中新，方欣.41株金黄色葡萄球菌耐药性分析及PVL基因检测[J].安徽医药，2013，17(3):434-6.
论文作者:赵丹妹
论文发表刊物:《医药前沿》2017年4月第10期
论文发表时间:2017/4/28
标签：抗生素论文; 头孢论文; 葡萄球菌论文; 霉素论文; 浓度论文; 金黄色论文; 白细胞论文; 《医药前沿》2017年4月第10期论文;