哈药集团制药六厂 黑龙江哈尔滨 150056
摘要：目的 采用HPLC法测定六味地黄颗粒中马钱苷的含量。方法 色谱柱为Hypersil C18（4.6mm×250mm，5μm），流动相为四氢呋喃-乙腈-甲醇-0.05%磷酸溶液（1：8：4：87），检测波长为236nm，柱温40℃，理论板数按马钱苷蜂计算应不低于4000，进样量10μL，外标法定量。结果 马钱苷在6.000～60.000μg/ml范围内呈良好的线性关系（r=1.0000），平均回收率为98.7%，RSD=1.06%（n=9）。结论 本法简便、快速、准确，可作为该制剂含量测定的方法。
关键词：高效液相色谱法；六味地黄颗粒；马钱苷；含量测定
[Abstract] Objective To determine loganin in liuwei dihuang granule by HPLC。Method The HPLC systerm consisted of Hypersil C18（4.6mm×250mm，5μm）.The mobile phase is tetre hydrofuran-acetonitrile- methanol-0.05%phosphoric acid solution—（1：8：4：87）.The detection wavelength was 236nm.The temperature of detection wavelength column is 40℃.The theoretical plates is not lower than 4000 as calculated according to loganin area.The quantity of inputting samples is 10μL.Its contents were determined with external standard method。Results The calibration curve was linear in the range of 4.000～40.000μg/ml with correlation coefficient of 1.0000，the average recovery was 99.4% and RSD =1.16%（n=9）。Conclusion This method is accurate with good reproducibitity，can be used for quality control of banlangen tea。
[Key words] HPLC；liuwei dihuang granule；loganin；content determination
六味地黄颗粒是由山茱萸、牡丹皮、熟地黄等六味中药组成的复方制剂，具有滋阴补肾之功效。临床上用于肾阴亏损、头晕耳鸣、腰膝酸软、骨蒸潮热、盗汗遗精、消渴等症的治疗。山茱萸为山茱萸科植物山茱萸Cornus officinalis Sieb.et Zucc的干燥成熟果实，主要含有马钱苷、熊果酸、齐墩果酸等有效成分。其中马钱苷具有显著增强机体免疫功能等作用，是山茱萸主要活性成分之一。为有效地控制其质量，确保疗效，本文采用高效液相色谱法对于六味地黄颗粒中所含马钱苷进行了定量测定，结果表明该方法简便、准确，并且重现性好，可作为本制剂质量控制方法。
1 仪器与试药
1.1 仪器 LC—10ATvp串联双柱塞泵（日本岛津），SPD—10Avp紫外检测器，浙大N-2000色谱工作站。
1.2 试药 马钱苷对照品（购自中国药品生物制品检定所，供含量测定用，批号：111640~200401），水为重蒸馏水，四氢呋喃、乙腈、甲醇、磷酸为色谱纯，其余试剂为分析纯。六味地黄颗粒（自制，批号分别为060501、060502、060503）。
2 试验方法与结果
2.1 色谱条件 Hypersil C18（4.6mm×250mm，5μm）；四氢呋喃-乙腈-甲醇-0.05%磷酸溶液（1：8：4：87）为流动相；流速1.0ml·min-1；进样量为10μl；柱温40℃；检测波长236nm。
2.2 对照品溶液的制备：精密称取马钱苷对照品20mg，置100ml容量瓶中，用50%甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取10ml，置100ml量瓶中，加50%甲醇稀释至刻度，摇匀，即得（含马钱苷20μg/ml）。
2.3 供试品溶液的制备：取六味地黄颗粒供试品50g，研细，精密称取本品粉末1.0g于50ml容量瓶中，加入50%甲醇适量，超声30min，过滤，取续滤液，即得。
2.4 方法学考察：
2.4.1 线性关系考察 取马钱苷对照品60mg，精密称定，置100ml容量瓶内，用50%甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为贮备液。精密量取1、2、4、8和10ml，分别置100ml量瓶中，加50%甲醇稀释至刻度，摇匀，依次进样10μl，按上述色谱条件，测定峰面积，以峰面积与马钱苷对照品浓度进行线性回归，得回归方程：y=ax+b（a=4.03E-004，b=-1.16E-001），R=0.9999，结果表明：马钱苷在6.000～60.000μg/ml范围内呈良好线性关系。
2.4.2 精密度试验 精密量取马钱苷对照品溶液10μl，重复进样6次，测定峰面积，结果马钱苷峰面积RSD为0.76%（n=6），说明本法精密度良好。
2.4.3 专属性 按处方组成量依工艺及制法制成不含山茱萸的阴性样品，按照“2.3”项下供试品溶液制备方法制备阴性样品溶液，取10μl测定。结果在与对照品主峰保留时间相同的位置上无色谱峰出现，说明其它成分对马钱苷测定无干扰，该方法具有一定的专属性。
2.4.4 稳定性试验 取同一批供试品溶液（批号：060503），分别在0，1，2，4和6h注入液相色谱仪测定峰面积，结果马钱苷峰面积RSD为0.69%（n=5），表明供试品溶液在6h内稳定。
2.4.5 重复性试验 精密称定同一批供试品（批号：060503）5份，按照“2.3”项下方法制备供试品溶液进行测定，结果RSD为0.88%（n=5），表明本法的重复性较好。
2.4.6 回收率试验 精密称取已知含量为1.28mg/g（批号：060503）的样品（约1.0g）9份，分别置于100ml量瓶中，分别精密加入马钱苷对照品溶液（200μg/ml）5.0、5.0、5.0、6.0、6.0、6.0、7.0、7.0、7.0ml于样品溶液中，依法测定，其结果见表1。
结果表明：本测定方法马钱苷的回收率为99.3%，RSD为0.79%（n=9），说明该方法准确可靠，符合HPLC的定量分析要求。
3 讨论
3.1本方法建立了六味地黄颗粒中马钱苷的定量分析方法，方法操作简便，重复性好，准确性高。通过对提取溶剂和提取方法的考察确定以50%甲醇为溶剂，超声提取30min，省时快捷，提取完全。
3.2吸收波长的选择 根据马钱苷的紫外扫描结果，在236nm有较大吸收，且样品在此处干扰峰较少，因此选择236为测定波长。
参考文献：
[1] 国家药典委员会．中华人民共和国药典（2005年版一部）．[S]．北京：化学工业出版社。
论文作者:盛丽波,赵国
论文发表刊物:《健康世界》2015年19期供稿
论文发表时间:2016/2/15
标签：溶液论文; 精密论文; 甲醇论文; 地黄论文; 山茱萸论文; 色谱论文; 方法论文; 《健康世界》2015年19期供稿论文;