承德医学院附属医院067000
摘要目的：观察转化生长因子-β1(TGF-β1)在大鼠深Ⅱ度烫伤创面组织中的表达，探讨胸腺素β4对烫伤创面TGF-β1表达及愈合的影响。方法：将60只健康雄性SD大鼠随机分为A、B、C三组，建立大鼠深Ⅱ度烫伤模型后，分别在创面下注射生理盐水、TGF-β1 和TGF-β1 +Tβ4进行干预。结果：烫伤第7、14、21d，B、C两组创面愈合率均明显高于对照组（P<0.05，且C组各时间稍高于B组；B、C两组创面皮肤中TGF-β1表达均明显高于对照组（P<0.05。结论：转化生长因子-β1（TGF-β1）能促进大鼠深Ⅱ度烫伤创面的愈合，胸腺素β4能增加TGF-β1的表达。
关键词 深Ⅱ度烫伤；转化生长因子-β1；胸腺素β4
【中图分类号】R644 【文献标识码】A
深Ⅱ度烫伤创面的修复一直是医学界面临的难题之一。转化生长因子-β1（transforming growth factor-β1，TGF-β1）是参与创面愈合的重要因子，TGF-β1的功能与数量异常直接影响创面的愈合[1]。胸腺素β4（Thymosin β4, Tβ4）是G-肌动蛋白偶联蛋白，能阻断F-肌动蛋白活性，促进皮肤创伤的愈合。本研究探讨TGF-β1在大鼠深Ⅱ烫伤创面组织中的表达，以及应用胸腺素β4治疗对TGF-β1表达及创面愈合的影响，旨在探寻治疗严重烧伤的新方法。
1材料和方法
1.1材料
选取成年健康雄性SD大鼠60只，体质量约240-260g 。随机分为A组(对照组）、B组（TGF-β1干预组)和C组（TGF-β1联合Tβ4干预组），每组各20只。本次研究报请医院动物伦理委员批准。
1.2烫伤建模及创面处理
60只试验大鼠经7d适应性喂养，烫伤前均向腹腔内注射10%水合氯醛（400mg／Kg）麻醉，在背部同一部位脱毛后，用直径3cm试管及100℃的砝码烫13s，制作相同规格的深Ⅱ度烫伤创面模型，随后向腹腔注射0.9%生理盐水5ml复苏处理。
A组大鼠烫伤创面下注射0.5ml生理盐水，B组创面下注射TGF-β1 0.5ml(5ng/ml), C组创面下注射TGF-β1 0.5ml和Tβ4 0.02g/ml。所有大鼠创面均用无菌纱布包扎和塑料隔水处理，隔天注射一次。重组Tβ4由北京诺思兰德生物技术有限公司提供。
1.3研究指标
1.3.1 烫伤创面愈合率
以烫伤后24h创面面积为原始烫伤面积，分别于烫伤后3、7、14、21d测量创面未愈合面积，校对标尺后每个创口重复测量三次，取其平均值来计算创面愈合率。创面愈合率=（烫伤面积-各时间点残余创面面积/原始烫伤面积）×100%。
1.3.2 TGF-β1表达
分别在烫伤第3、7、14、21d，每组各取5只大鼠，腔内注射10%水合氯醛麻醉大鼠，无菌下切取自距创源约1.5mm处至创面的全层皮肤组织，面积约2cm×1cm，随后处死大鼠。将切取的皮肤组织用0.9%生理盐水冲洗3次后置于10%甲醛溶液固定12-24h后石蜡包埋，制作石蜡切片。取不同时间点的创面边缘皮肤石蜡块，采用TGF-β1抗体进行一抗免疫组织化学染色，SD法检测、DAB显色后检查TGF-β1的表达[2]。人重组TGF-β1购自美国Peprotech 公司。一抗TGF-β1由北京博奥森生物技术有限公司提供。选用北京中杉生物技术有限公司提供的PBS缓冲液、SP免疫组化染色试剂盒。操作均按试剂盒说明步骤进行。
1.4 统计学分析
采用SPSS20.0软件包录入数据并进行统计学分析，烫伤愈合情况、TGF-β1表达等计量资料用（±s）表示，采用t检验，P＜0.05为有统计学意义。
2结果
2.1烫伤愈合情况比较
三组烫伤第3d愈合率比较无差异性（P>0.05）；烫伤第7、14、21d，B、C两组创面愈合率均明显高于对照组（P<0.05），B组与C组各时间比较，差异无统计学意义(P>0.05)。见表1。
3讨论
目前我国广泛采用三度四分法进行烧伤分度，根据烫伤深度、创面的病理改变及临床表现划分为Ⅰ度、浅Ⅱ度、深Ⅱ度、Ⅲ度烧伤。深Ⅱ度烧伤时损伤真皮网状层，表皮及真皮浅层坏死形成焦痂。创面局部肿胀，表皮呈暗红色，创面渗出不多。深Ⅱ度烫伤创面的愈合牵涉到细胞的增殖、分化、迁移、上皮化及基质的合成与沉积等过程，不同类型细胞、结构蛋白和生长因子参与其中。愈合有赖于残存的上皮小岛，如无感染，一般2-3周可痊愈。
随着分子生物学与细胞生物学研究进展的加深，各种影响创面愈合过程的细胞因子的作用受到临床的重视[3。深Ⅱ度烫伤创面受损的真皮部分由肉芽组织增生修复，转化生长因子-β1（TGF-β1）是细胞因子超家族成员之一，调节胚胎发育、器官形成、细胞增殖、分化及凋亡，参与烫伤创面愈合的全程。如TGF-β1含量降低、信号通路失调，则直接创面的愈合[4。因此，应用外源性生长因子TGF-β1能促进烫伤创面的愈合。重组胸腺β4（Tβ4）是一种G-肌动蛋白偶联蛋白，能够调节肌动蛋白平衡，降低炎性因子的水平,抑制细胞凋亡及炎症过度表达，抑制创面炎症反应；Tβ4还能能调节多种生长因子的表达，增加VEGF 表达，促进创面新生血管的生成，有利于创伤的修复[5]。
本研究中，烫伤第7、14、21d，B、C两组创面愈合率均明显高于对照组，创面皮肤中TGF-β1表达均明显提高，且C组各时间点均稍高于B组。由此可知，转化生长因子-β1（TGF-β1）能促进大鼠深Ⅱ度烫伤创面的愈合，胸腺素β4能增加TGF-β1的表达。
【参考文献】
[1]李艳，王冠．于虎，等．重组胸腺紊β4调节创伤皮肤层粘连蛋白5表达的研究[J]．中国修复重建外科杂志，2008，22(11)：1306—13lO．
[2]张连波,李健宁,孙颖.大鼠慢性皮肤溃疡创面愈合中转化生长因子-β1、胶原Ⅰ、胶原Ⅲ的蛋白表达[J]. 中华实验外科杂志, 2011，28（09）：1445-1447.
[3] Cha HJ，Jeong MJ，Kleinman HK．Role of thymosin beta 4 in tumor metastasis and angiogenesis[J]．J Natl Cancer Inst，2003，95：1674-1680．
[4]王文婷，单菲，王晓川，等. TGF-β1对糖尿病大鼠深Ⅱ度烫伤创面愈合的影响[J].山东大学学报（医学版），2011，49（07）：19-23.
[5]龙安华,李明,王晓坤,等. 重组胸腺素β4调节兔角膜碱烧伤后MMP-2和TIMP-2的表达[J]. 眼科新进展, 2010，30（08）：723-726.
论文作者:李树松 吴晓明 马滢,戴文英 孙喜平,赵晓玉
论文发表刊物:《解放军预防医学杂志》2015年第6期供稿
论文发表时间:2016/1/18
标签：创面论文; 烫伤论文; 胸腺论文; 大鼠论文; 蛋白论文; 生长因子论文; 皮肤论文; 《解放军预防医学杂志》2015年第6期供稿论文;