杜伟[1]2003年在《半滑舌鳎的胚胎发育光镜观察与核型研究》文中研究说明本文对半滑舌鳎进行了早期胚胎发育的光镜观察，并对半滑舌鳎的核型作了研究。 将半滑舌鳎雌雄亲鱼进行人工诱导，使其产卵受精。孵化条件为：培养水温20.4～21.6℃；盐度35％；pH：7.8～8.6。对受精后不同发育期胚胎进行连续取样，在解剖镜下进行观察，纪录其具体的发育时段和形态变化。根据结果表明，在上述孵化条件下，半滑舌鳎的卵子受精后，原生质向动物极集中，油球多分布于植物极。半滑舌鳎的卵属于典型的端黄卵，卵裂方式为盘状卵裂。1小时30分受精卵开始第一次分裂；2小时10分进入4胞期；2小时20分进入8胞期：3小时12分进入32胞期，细胞出现分层现象；4小时05分进入多细胞期；5小时进入高囊胚期；6小时50分进入低囊胚期。11小时45分囊胚开始下包，胚环出现，油球出现重新扩散的现象。15小时出现胚盾，15小时55分，胚体下包一半。18小时左右，出现褐色点状色素胞，22小时20分胚孔关闭。24小时30分形成尾芽，此时出现心脏。38小时40分胚体绕卵黄囊约一周，39小时50分仔鱼孵出，仔鱼孵出时卵黄囊内的油球已大大减少。整个孵化过程大约需要40小时。 通过对孵化时的温度和时间的记录，由积温法则计算出半滑舌鳎各个发育期所需要的积温，整个孵化期所需总积温为各个发育期的积温之和，最终结果为50275.1(min~*℃)，孵化的平均温度通过总积温和孵化总时间计算得，孵化阶段的平均温度为21.0℃。 本文还使用秋水仙素直接取材法对半滑舌鳎的核型进行分析。选取孵化时间为12～50天的幼鱼，在不同浓度的秋水仙素溶液中处理5～6小时，分别剪取冠状幼鳍、鳃丝和身体周围的鳍条，通过低渗、固定、解离，得到细胞悬液，热片法滴片，Giemsa染色。显微镜下观察分散比较良好的中期分裂相并统计染色体的数量，选取较好的分裂相进行显微照相，放大和测量，分析半滑舌鳎的核型。染色体的分类按Levan的分类标准。通过实验发现半滑舌鳎的最好的取材部位为鳍条，分裂指数高。使用的秋水仙素的浓度对染色体的形态有较大的影响，最适的浓度为0.02％mol／L，使用的KCl低渗液的浓度决定着细胞破碎的程度，将对滴片的效果产生间接影响，相对来说，浓度为0.0375mol／L要比浓度为0.075mol／L的要好。 通过对517个清晰的中期分裂相的观察和统计，最终确定：半滑舌鳎的 半滑舌姻的早期胚胎光聪观察及核型研究染色体众数Zn—42，臂数NF二42，核型为42t，全部为端部着丝粒染色体。在核型中发现有部分个体存在一条形态大小超过其他染色体的异型染色体。出于有异型染色体的个体数目与不含有的个体数目相当，故怀疑所观察到的异型染色体为性染色体，确切的结论有待进一步的研究。：
宁静允[2]2010年在《半滑舌鳎早期性腺发育的研究》文中认为鱼类在早期性腺发育时期,生殖细胞的前体为原始生殖细胞(Primordial germ cells, PGCs)。本文对半滑舌鳎的胚胎前期和胚后的仔鱼、稚鱼和幼鱼进行组织切片,结合电子显微镜技术和免疫组织化学方法,追踪半滑舌鳎的早期性腺中PGCs的起源和迁移分化以及生殖嵴发育的过程。这项研究一方面可为半滑舌鳎的发育生物学提供基础资料,另一方面也为半滑舌鳎良种培育和养殖生产实践提供参考。通过半滑舌鳎胚前期和胚后期的组织切片的显微结构,观察了各个时期的早期性腺的发育特征。半滑舌鳎的PGCs起源于胚盾尾侧的内胚层,并且在囊胚期的囊胚腔处观察到了多核卵黄合胞体,这与PGCs的出现密切相关。PGCs随后出现在肌肉期的脊索壁上,在孵化前期迁移到肠原基附近。PGCs在仔鱼期沿着背肠系膜向背中线的体腔壁迁移,并且在迁移过程中不断增殖,最终到达肠管和肾管之间的原始生殖嵴。60天幼鱼期的性腺开始出现组织学上的分化,出现了两种形态的性腺：一种具有裂隙,以裂隙腔为中心向四周呈辐射状排列,已基本形成卵巢腔的雏形,另一类型的性腺不具有裂隙,将会发育为精巢。超微结构观察结果显示：半滑舌鳎的原始性腺中的PGCs细胞界线明显,与体细胞相比有较大的体积。细胞质中存在线粒体以及与粗面内质网相连的环形片层结构,内质网不发达,在核区附近存在无膜包围的电子致密体,呈大小不等的颗粒状,少部分沿核膜外侧分布。当PGCs进入迁移时期,具有伸出的伪足,细胞质中的线粒体数量及体积明显增多增大,有的呈棒状,其内嵴较多。免疫组织化学实验结果显示：半滑舌鳎的生殖细胞中能够特异地表达Nanos1蛋白,该蛋白存在于PGCs中,可作为PGCs的标记蛋白。同时也证明了生殖嵴最初出现在肠管和肾管之间,然后PGCs沿着脏壁中胚层迁移并不断增殖,与出现在鳔管的两侧生殖嵴,共同形成了原始性腺。半滑舌鳎的原始性腺在稚鱼时期最易受到外部环境因子温度的影响,是向幼鱼期过渡的重要时期。
参考文献：
[1]. 半滑舌鳎的胚胎发育光镜观察与核型研究[D]. 杜伟. 中国海洋大学. 2003
[2]. 半滑舌鳎早期性腺发育的研究[D]. 宁静允. 河北大学. 2010