1.商丘医学高等专科学校 药理学教研室 河南 商丘 476100 ；2商丘医学高等专科学校 病理学教研室 河南 商丘 476100 ；3商丘医学高等专科学校 医学检验教研室 河南 商丘 476100
【摘要】目的：分析甘草多糖体外抗癌活性及对移植瘤小鼠免疫功能的影响。方法：体外培养肿瘤细胞，观察甘草多糖对肿瘤细胞生长的抑制作用；采取随机数字表法将50只小鼠随机分成5组，每组10只，甘草多糖3个剂量组为150、300、600mg/kg体重，阳性对照组为200 mg/kg体重，阴性对照组给予生理盐水，对小鼠的胸腺、肿瘤组织和脾脏进行称重，计算胸腺指数、脾脏指数，抑瘤率。结果：体外抗肿瘤结果，甘草多糖各剂量组IgM、IgG含量、抗体生成细胞水平明显高于阴性、阳性对照组, 其中大剂量组差异显著(P﹤0.05),一定剂量的甘草多糖能显著抑制肿瘤细胞的生长，且剂量过高会影响其抑瘤效果。结论：甘草多糖具有较强的抗癌活性及对移植瘤小鼠免疫功能具有较好的生物活性，值得参考。
Abstract Objective: To analyze Glycyrrhiza Polysaccharide in vitro anticancer activity and its effect on immune function in mice transplanted tumor. METHODS: Cultured tumor cells, the inhibition observed Glycyrrhiza Polysaccharide on tumor cell growth; to take a random number table 50 mice were randomly divided into five groups of 10, three doses of licorice polysaccharide group 150,300,600mg / kg body weight, the positive control group was 200 mg / kg body weight, the negative control group received normal saline on the thymus of mice, tumor tissue and spleen were weighed, thymus and spleen indexes, the inhibition rate. Results: In vitro anti-tumor results, licorice polysaccharide in each dose group IgM, IgG content, antibody-producing cells was significantly higher than the negative, the positive control group, in which the high-dose group were significantly different (P <0.05), licorice polysaccharide certain dose significantly inhibited growth of tumor cells, and the dose is too high will affect the anti-tumor effect. Conclusion: Glycyrrhiza polysaccharide has strong anti-cancer activity and immune function in mice transplanted tumor has good biological activity, it is also useful.
【关键词】甘草多糖；体外抗癌活性；移植瘤小鼠；免疫功能
【中图分类号】R282.77【文献标识码】A【文章编号】1001-5213(2016)08-0328-01
甘草也被称为甜草根，具有缓急止痛、润肺止咳、泻火解毒、缓和药性的功效,主要的成分包括了三萜、黄酮、多糖类化合物[1]。依据相关的研究说明多糖有抗肿瘤、抗病毒、抗炎、降血糖、抗凝血等相关的生物活性。本实验从提取黄酮后的甘草残渣中提取分离甘草多糖，探讨了甘草多糖体外抗癌活性及对移植瘤小鼠免疫功能的影响，现将体会报道如下。
1.资料与方法
1.1实验资料
1.1.1 主要试剂及实验药品
主要试剂包括了注射用环磷酰胺;甘草多糖;一品阁墨汁，其它试剂均为 AR级。
1.1.2 主要仪器
THERMO酶标仪SM2漩涡混匀器,XDS倒置显微镜,5%CO 2培养箱,SORVALL台式高速离心机,电子恒温水浴锅。
1.1.3 实验动物及肿瘤细胞株
（哪种种系）小鼠，雄性，体质量17～21g，6～8周龄，写明（小鼠合格证号），由中国医学科学院放射医学研究所实验动物中心提供，清洁级。（何种肿瘤腹水瘤瘤株，是肝癌、还是S180肉瘤等，应写明）；（用于体外肿瘤抑制试验的肿瘤细胞株类型，可选4-5种，哪里提供，均应写明）
2.方法
2.1甘草多糖的制备
实验用甘草多糖，实验室自行制备。甘草原料: 人工种植4年生甘草根侧枝干燥切片。甘草多糖提取方法:将甘草切片粉碎,加入80%乙醇进行除杂,，蒸馏水保持在90℃，水浴提取2次,每次2h，将提取液进行合并、浓缩, 加预冷无水乙醇促进多糖沉淀,并且进行静置、抽滤,滤渣使用丙酮、无水乙醇、无水乙醚进行淋洗,同时进行真空干燥,获得粗甘草多糖粉末。等到粉末复溶之后,滤去不溶物, 滤液加Sevage液对蛋白质进行脱除。对水层进行真空浓缩,冻干等待备用。得率为6.7%，苯酚硫酸法测得多糖含量为68.3%。
2.2对体外培养的小鼠的抑制作用 此项目应为（甘草多糖对体外培养的几种肿瘤细胞的抑制作用
取处于生长期的（哪几种肿瘤）细胞，以5×107/L的密度接种于96孔板，在37℃、5%CO2饱和湿度条件下培养12个小时。设立阴性对照组、阳性对照组以及不同浓度给药组。每个培养孔加入420Lg/mL的AD，其中每个浓度设置8个复孔, 在37℃、5%CO2饱和湿度条件下的孵箱只培养48个小时,培养4 小时之后,对培养液进行吸弃,同时轻度振荡直至溶解结晶,放入自动酶标仪570nm波长处测定相关的OD值。
2.3血清溶血素和抗体生成细胞水平实验
小鼠50只,取接种7 d的（何种肿瘤）腹水移植瘤株制成1×107mL的瘤细胞悬液,每鼠右后背部接种0.2 mL,24 h后，随机分成5组，每组10只，每天给药1次，甘草多糖3个剂量组为 150、300、600mg/kg体重，阳性对照组为200 mg/kg体重，阴性对照组给予生理盐水，连续给药 7 d之后，依据每只小鼠20%SRBC0.2 mL腹腔注射，致敏7天后使用同样剂量的SRBC进行免疫，在免疫12 d末次给药2 h后对小鼠眼球进行摘除，并且取血，放置1h之后进行离心。将每只小鼠的血清分为两份，一份测定IgM，另一份加等量2-巯基乙醇后3.7℃水浴保温 10min，测定IgG。
2.4移植瘤小鼠实验
小鼠50只,取接种7 d的（何种肿瘤）腹水移植瘤株制成1×107mL的瘤细胞悬液,每鼠右后背部接种0.2 mL,24 h后将 50只雄性小鼠随机分成 5组，每组 10只。甘草多糖 3个剂量组为 150、300、600mg/kg体重，环磷酰胺组隔天给予一次，剂量：30 mg/kg体重，阳性对照组给予同体积生理盐水。末次给药30 min之后，对小鼠进行颈椎脱臼处死，解剖小鼠取胸腺、肿瘤组织和、脾脏进行称重。分别计算胸腺指数、脾脏指数，并且计算抑瘤率。
2.5统计学分析
采用SPSS12.0统计学软件对数据进行处理，采用t检验。
结果
3.1 甘草多糖体外对肿瘤细胞的抑制率
3.2甘草多糖对（移植瘤）小鼠血清溶血素及抗体生成细胞产生的影响
甘草多糖各剂量组IgM、IgG含量、抗体生成细胞水平明显高于阴性、阳性对照组, 其中大剂量组差异显著(P﹤0.05), 则说明甘草多糖对小鼠体液免疫功能有增强作用。并且阳性对照组的IgM的含量高于阴性对照组(P﹤0.05)。详见表1。
4.讨论
动物、植物和微生物中广泛地的存在着多糖类化合物广泛存在，并且可以在多个层面、多条途径上调节免疫系统，本实验把醇提甘草黄酮后的甘草残渣展开二次应用，可以相应的提取分离获得甘草多糖，防止浪费了甘草资源，同时初步探讨了甘草多糖体外抗癌活性及对移植瘤小鼠免疫功能的影响[2-5]。本研究结果显示，（甘草多糖体外对胃癌、肝癌、乳腺癌、肺癌等肿瘤细胞有明显的抑制作用；）体内实验结果可见，一定剂量的甘草多糖能显著抑制肿瘤细胞的生长，且剂量过高会影响其抑瘤效果，甘草多糖对移植小鼠体液免疫功能有增强作用，可以直接诱导小鼠B淋巴细胞进行增殖，甘草多糖提高将机体免疫抗肿瘤的作用机制，感觉此句语句及意思不清。因此，我们认为，甘草多糖具有较强的抗癌活性，可增强移植瘤小鼠免疫功能。
综上所述，提取分离得到的甘草多糖具有较好的生物活性，可以为从中草药中筛选免疫和抗肿瘤新药给予更多的理论依据，值得进一步研究和开发。
【参考文献】
[1]王丽君,姜虹.龙牙楤木多糖抗肿瘤活性及对荷瘤小鼠免疫功能的影响[J].中国免疫学杂志,2014，33(16):3369-3372.
[2]戴伟娟,司端运.无花果多糖对移植性肿瘤生长及对小鼠免疫功能的影响[J].中国药理学会通讯,2015，13(2):221-223.
[3]任中海,赵擘,叶萌,等.龙力胶囊对正常小鼠和移植瘤S180小鼠免疫功能影响的实验研究[J].中华实用中西医杂志,2014,23(19):1659-1661.
[4]张雪梅,鞠玉琳,熊焕章.中药制剂肠宁对正常小鼠免疫功能的影响[J].黑龙江畜牧兽医,2016,14(8):35-36.
[5]程鹏,白云静,于晓红,等.甘草多糖提取工艺的研究及其对小鼠免疫口蹄疫疫苗后细胞免疫的影响[J].北京农学院学报,2016(10):1135-1137.
论文作者:陈永顺1,刘伟2 李静3
论文发表刊物:《中国医院药学杂志》2016年8月
论文发表时间:2016/10/26
标签：多糖论文; 甘草论文; 小鼠论文; 免疫论文; 肿瘤论文; 体外论文; 剂量论文; 《中国医院药学杂志》2016年8月论文;