【摘要】目的：探讨气管切开对细菌形成生物膜能力的影响，指导气管切开术后护理对策改进。方法：采集65例行气管切开的重症病房病人术后3天和术后10天气道分泌物拭子进行细菌培养。采用改良Moskowitz生物膜分析法，标准化稀释细菌悬浮液、生物膜培养、结晶紫染色、干燥和乙醇溶解吸附结晶紫后，用酶标仪读取595nm光密度（OD595），测量生物膜的形成量。以自身对照，比较两次气道分泌物中细菌形成生物膜的能力。结果：气管切开后气道细菌形成生物膜的能力增强，两组差异有统计学意义（U= 1601，P<0.05）。结论：气管切开可诱导细菌获得更强的生物膜形成能力，并且随着气管切开的时间延长而增强。气管切开术后的护理对策改进非常重要。
【关键词】气管切开；生物膜；细菌；护理对策
【中图分类号】R473.76 【文献标识码】A 【文章编号】1007-8231（2016）11-0008-02
The relationship between tracheotomy and bacterial biofilm and nursing countermeasures
Yang Shuyan,Yang Haibin (Communications author), Xu Guohua.
Department of ENT, the affiliated Zhongshan hospital, Xiamen University, 361004,China
【Abstract】Objective To explore tracheotomy on the formation of bacterial biofilm ability influence and guidance after tracheotomy nursing countermeasures of improvement. Methods 3 days and 10 days after operation, 65 days and days after operation, the bacterial culture of airway secretions was collected. Using modified Moskowitz biological membrane method, standard of diluted suspension of bacteria and biofilm cultivation, crystal violet staining, drying and dissolved in ethanol adsorption of crystal violet, enzyme standard instrument read 595 nm optical density (OD595), measuring biofilm formation. The ability of bacterial biofilm formation in the two airway secretions was compared with that of the control group. Results The ability of bacteria to form biofilm after tracheotomy was enhanced, and the difference between the two groups was statistically significant (U = 1601, P < 0.05). Conclusion Tracheotomy can induce the bacteria to get stronger biofilm formation ability, and increase with the time of tracheotomy. Improved nursing after tracheotomy is very important.
【Key words】Tracheotomy; Biofilm; Bacteria; Nursing strategy
气管切开后，呼吸道免疫力降低，易感性增加[1]。术后常出现气道分泌物量及性质的改变，分泌物多且黏稠，并可能引发肺部感染，也是院内感染的常见原因。虽然对于气管切开后细菌感染已有广泛的研究，但有关气管切开对细菌形成生物膜的能力的影响还不清楚，因而护理的对策针对性不强。
1.资料与方法
1.1 临床资料
我院2014年1月至2016年1月重症监护室65例接受气管切开手术的病人，年龄18～75岁，平均48.3岁，男性36例，女性29例。
1.2 研究方法
生物膜分析采用改良Moskowitz生物膜分析法[2]。每个气管切开病例分别于术后3天和术后10天两次用无菌棉签采集病人气道分泌物拭子标本，剪下棉签头，置于5mlLB肉汤试管中，37°振荡培养箱中培养12hr。培养结束后，漩涡混匀，吸取细菌悬浮液，加入透明平底96孔酶标板，每个标本4孔，每孔150?l，用酶标仪测量600nm数值（OD600）。计算平均值，然后做标准化稀释，用LB肉汤将细菌悬浮液稀释到OD600=0.1，再用50%LB肉汤以1:100将细菌悬浮液进一步稀释，稀释后每个标本量1ml。再取透明平底96孔酶标板，每个标本加样4孔，每孔加入125?l细菌悬浮液。每板最后一列加入50% LB肉汤作为阴性对照。加样后，酶标板加盖，水平置于37°培养箱中进行生物膜培养20hr，细菌生物膜将在酶标板微孔壁上生长。培养结束后，去除微孔中细菌悬浮液，每孔加0.9%氯化钠150?l洗涤3次。然后每孔加入2%的结晶紫溶液150?l，染色30min，去除染色液，每孔加入蒸馏水150?l洗涤3次。放入60°干燥箱1hr，然后每孔加入100%乙醇150?l，溶解吸附的结晶紫。15min后用酶标仪读取595nm各孔的数值（OD595），测量生物膜的形成量。如果LB阴性对照孔也有染色，说明阴性对照孔有生物膜形成，提示操作过程中污染，此板放弃不用。
1.3 统计学分析
应用SSPS 19.0统计分析软件，因资料呈偏态分布，因此采用成组设计Mann-Whitney U非参数检验，并计算中位数和四分位数间距[M(QR)]。
2.结果
气管切开后细菌形成生物膜的能力增强，自身对照差异具有统计学意义（U=1601，P<0.05，表1）。
表1 术后3天和术后10天气道分泌物细菌生物膜形成量的比较
3.讨论
气管切开是危重病人抢救和治疗的常用方法之一，但手术后呼吸道感染也是医疗和护理的棘手问题。通常气管切开3～4天左右，气道内痰液明显变多变稠，容易形成干痂，有时还伴有颜色的改变。重症病房内，气管切开、机械通气和住院时间是下呼吸道感染的独立危险因素[3]。近些年，细菌生物膜在院内感染的作用受到越来越多的重视，但气管切开是否会导致细菌形成生物膜能力增强和护理的对策研究不够。
细菌生物膜由细菌和包裹细菌的细胞外基质组成的细菌群体，细菌的浮游状态和生物膜状态是细菌不可或缺的两种生存状态。浮游细菌在达到一定密度时就会触发细菌密度感应，大量细菌同时分泌细胞外基质将细菌群体包裹起来，进入相对休眠状态[2]，因而细菌生物膜具有很强的耐药性。细菌生物膜还能不断释放浮游细菌，造成慢性感染急性发作或感染播散，也是院内感染的一个重要因素。
细菌生物膜可以形成于所有医疗植入体物体表面，如：导尿管、引流管、气管插管和不同材质的金属气管套管和高分子聚乙烯材料的气管套管表面[4]。套管的内外壁上均可形成生物膜，且生物膜形成量与插管的时间成正比[5]。我们的研究显示：气管切开后的细菌形成生物膜的能力也随着气管切开的时间延长而增强。因此，气管切开术后的护理对策需要改进。我们认为应该从以下三方面着手改进护理对策，减少细菌生物膜形成和防止院内感染。
3.1 加强气管套管的护理。对于气管切开病人，应保持空气湿润，常规气道湿化，吸痰，金属内套管应该每天清洗消毒三次。以往外套管的清洗被忽视，通畅放置数月也不清洗或更换，这将导致大量细菌生物膜在外套管上生长，并不断播散浮游细菌，造成下呼吸道感染。因此外套管也应该每两周更换，清洗并消毒。以上措施都可以减小细菌的密度，阻止细菌的密度感应，避免生物膜过多，从而降低肺部感染和院内感染的机率。一次性朔料套管不利于清洗，消毒，只适合于短期，或必须使用呼吸机时使用。如果需要长期戴管，应尽早更换金属套管。如必须长期使用一次性气囊气管套管，应该每月更换一个，以免套管上细菌生物膜生长过多。
3.2 注意临近器官的护理，特别是口腔护理。气管切开病人容易将唾液和痰吸入气道，如果口腔护理不良，可能将口腔中大量细菌随唾液带入气管，增加细菌的数量，为细菌生物膜形成创造条件。对于清醒的病人可采用电动牙刷进行口腔护理，能有效控制牙菌斑的形成，牙菌斑也是细菌生物膜的一种。也可以用超声波设备，减轻护理工作量，提高工作效率。有利于预防口腔感染，有利于院内感染的控制。此外咀嚼口香糖的方法也可以预防口腔并发症[6]。
3.3 注意防止交叉感染。耳鼻咽喉科有很多慢性中耳炎，鼻窦炎和化脓性扁桃体炎的患者，这些慢性感染的细菌形成生物膜的能力都较强。一旦交叉感染，往往有很强的耐药性。如果条件许可，应和气管切开病人适当隔离，避免化脓菌进入气管切开病人气道。
细菌生物膜是细菌生存的一种方式，只要有气管套管存在，细菌生物膜必然产生。目前还没有办法完全消灭细菌生物膜，只能控制，减少其可能造成的危害和院内感染。只有恢复正常的呼吸功能，人体才能彻底清除细菌生物膜。因此，如病情许可，应该尽早拔出气管套管。
【参考文献】
[1]方慧，姬绍先，欧阳九鸿.气管切开手术后并发症防治与护理[J]. 护理实践与研究,2013,10(5):79-81.
[2]Moskowitz SM,Foster JM,Emerson J,et al. Clinically feasible biofilm susceptibility assay for isolates of pseudomonas aeruginosa from patients with cystic fibrosis. J Clin Microbiol 42:1915-1922, 2004.
[3]李秀云，徐敏.重症监护病房下呼吸道感染的危险因素和预防[J].中华医院感染学杂志, 2005,15(3):266-8.
[4]储诚兵，黎檀实，沈定霞，等.4种内植物材料影响表皮葡萄球菌形成生物被膜的体外研究[J].中华医院感染学杂志，2008,18(7):924-7.
[5] Zur KB,Mandell DL,Gordon RE,et al.Electron microscopic analysis of biofilm on endotracheal tubes removed from intubated neonates.Otolaryngol Head Neck Surg 2004;130:407-14.
[6]农小群.口腔护理研究新进展[J].护理实践与研究，2010,7(8):98-100.
论文作者:杨淑颜,杨海斌(通讯作者）,徐国华
论文发表刊物:《心理医生》2016年11期
论文发表时间:2016/9/8
标签：细菌论文; 气管论文; 生物论文; 套管论文; 术后论文; 悬浮液论文; 院内论文; 《心理医生》2016年11期论文;