（重庆沙坪坝区疾病预防控制中心 重庆 沙坪坝 400038）
【摘要】 目的：探讨酶联免疫法（ELISA）检测血清丙肝抗体（HCV-Ab）假阳性的状况、原因。方法：选择沙坪坝区疾病预防控制中心收到的68例应用ELISA检测血清HCV-Ab阳性的血清标本，再以重组免疫印迹试验（RIBA）行确证实验，明确ELISA假阳性率，分析影响ELISA检测方法产生假阳性的因素。结果：用ELISA检测血清HCV-Ab阳性的68份血清标本中通过RIBA实验法进行检测发现阳性48例，不确定6例，阴性14例，以RIBA检测作为金标准，ELISA检测真阳性率是70.59%（48/68），假阳性率为20.59%（14/68）。结论：应用酶联免疫法检测血清丙肝抗体仍存在标本假阳性问题，标本内物质干扰、操作不当等多种因素可造成其出现假阳性，检验人员需严格按照规范操作，做好质控，避免不利因素，以降低假阳性率，同时在条件允许下应对可疑假阳性标本进行RIBA实验确证。
【关键词】 酶联免疫法；丙肝抗体；假阳性
【中图分类号】R446.61 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2017）14-0032-02
Clinical analysis of enzyme-linked immunosorbent assay for detection of serum HCV antibody false positive
【Abstract】 Objective To investigate the enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) detection of serum HCV antibody (HCV-Ab) false positive status. Methods Of Shapingba District Center for Disease Control and prevention received detection of serum HCV-Ab in 68 cases with ELISA positive serum samples by recombinant immunoblot assay (RIBA) for confirmatory test, clear ELISA false the positive rate of ELISA detection method of influence analysis of factors of false positive results 68 serum samples were detected by HCV-Ab ELISA positive by RIBA test detected 4 positive In 8 cases, 6 cases of uncertain, negative in 14 cases, detected by RIBA as the gold standard, ELISA detection of the true positive rate is 70.59% (48/68), false positive rate was 20.59% (14/68). Conclusion The detection of serum HCV antibody by ELISA has false positive specimens, interference within the specimen, improper operation etc. many factors can cause the appearance of false positives, inspection personnel need to do a good job of quality control in strict accordance with the norms of operation, to avoid unfavorable factors, to reduce the rate of false positives, while under conditions allowing to deal with suspicious false positive samples were RIBA experimental confirmation.
【keywords】 ELISA; Hepatitis C antibody; False positive
丙型肝炎为一种因丙型肝炎病毒（HCV）感染所导致的传染性疾病，在HCV慢性感染后还可造成肝脏出现慢性炎症坏死与纤维化，严重者甚至可进展为肝硬化与肝癌，危及其生命安全[1]。酶联免疫法（ELISA）为当前临床测定血清丙肝抗体（HCV-Ab）的重要方法，其检测敏感性高，特异性强，成为鉴别诊断丙肝的一种重要实验室依据。但研究指出，实验室于检测HCV-Ab时，存在多种因素影响ELISA测定，可能会造成假阳性结果[2]。本研究选择68例应用ELISA检测血清HCV-Ab阳性的血清标本，再以重组免疫印迹试验（RIBA）行确证实验，以观察ELISA检测血清HCV-Ab假阳性的状况、原因，报道如下。
1.资料和方法
1.1 一般资料
选择2014年6月至2016年8月沙坪坝区疾病预防控制中心68例应用ELISA检测血清HCV-Ab阳性的血清标本，标本均来自于沙坪坝区疾病预防控制中心收到的医院送检样本。
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1.2 方法
1.2.1仪器与试剂 仪器：ELISA采用郑州安图仪器公司生产的酶联免疫检测仪与配套洗板机等；RIBA实验应用丙肝抗体确证试剂盒（由北京万泰生物药业股份有限公司提供）。
1.2.2检测方法 采集所有患者3ml空腹静脉血，离心获得血清，以ELISA测定血清HCV-Ab，严格依照实验室标准操作；再对ELISA检测血清HCV-Ab阳性的血清标本，应用RIBA实验法进行确证，方法为：以RIBA原理于硝酸纤维膜条之上对HCV合成抗原、重组抗原NS3以及对照线蛋白进行预包被；并将硝酸纤维膜条浸泡于稀释血清或者血浆样品中进行反应，再加入酶标记抗人IgG抗体温育，若样品中存在HCV特异性抗体，会合成“包被抗原-抗体-酶标二抗”复合物，置入底物液显色，依据出现不同条带状况进行结果判断。每条实验结果，对照线-1与对照线-2必须出现，若均未出现或者均出现1条则词条检测结果无效，同时条带强度判定标准为：在对照线-1强度之上为“＋＋”；与对照线-1强度相同为“＋”；在对照线-1强度以下为“＋/－”；空白为“－”；并依据各条带显色的强度对样品结果进行判定，标准为：出现HCV抗体的特异性条带至少2种（NS3、NS4、NS5、Core）强度在“＋”及以上则判定HCV抗体阳性；出现HCV抗体的特异性条带1种强度在“＋”及以上则判定HCV抗体不确定；未出现HCV抗体的特异性条带强度在“＋”及以上则判定HCV抗体阴性[3]。
1.3 观察指标
观察ELISA检测假阳性率。
2.结果
用ELISA检测血清HCV-Ab阳性的68份血清标本中通过RIBA实验法进行检测发现阳性48例，不确定6例，阴性14例，以RIBA检测作为金标准，ELISA检测真阳性率是70.59%（48/68），假阳性率为20.59%（14/68）。
3.讨论
HCV为常见血源性传播疾病病原体之一，感染者容易转变为慢性丙型肝炎与慢性HCV的携带者，且丙型肝炎自然转阴率较低，预后较差，严重影响患者身体健康及社会公共卫生。当前，临床应用较广泛的HCV感染诊断方法分为两大类：测定患者血清HCV-RNA与血清HCV-Ab。其中检测血清HCV-RNA是临床诊断HCV感染的常用方法之一，诊断准确率较高，但其检测技术较复杂，需要特殊设备、检测成本高，在基层医院难以推广。HCV-Ab检测方法主要包括胶体金试纸法与ELISA，胶体金试纸法虽操作简单、反应迅速，但敏感性较低、重复性较差，一般仅在做初步筛查时应用；ELISA具有敏感度较高、特异性强、能早期检出抗体、可进行半定量与定量检测等优点，已成为诊断HCV感染的主要实验室依据。
ELISA检测应用包被抗原为基因工程抗原与合成多肽抗原，通过将血清置入已包被抗原反应孔内进行孵育，如果血清标本中存在抗-HCV抗体，该抗体则会和微孔内抗原合成抗原抗体复合物，置入酶结合物之后酶结合物可与抗体抗原复合物连接，在3,3,5,5-四甲基联苯胺底物参与反应情况下可出现显色反应。当测定血清标本吸光度值在cottoff值5倍以上则判定为阳性；处于cottoff值3.8～5倍时，化学发光试验显示阳性则判定为阳性；小于cottoff值时则判定为阴性[4]。王燕等[5]研究指出，其可应用基因工程酶放大技术以提高其敏感性与特异性，操作简单、成本较低，同时能应用自动化操作，检测结果客观准确，检测HCV抗体的真阳性率为91.9%，对诊断鉴别HCV感染具有较高价值。
但应用该方法检测仍存在一定假阳性问题，本研究结果中，以RIBA检测作为金标准，ELISA检测真阳性率是70.59%（48/68），假阳性率为20.59%（14/68）。可见如何避免ELISA检测血清HCV-Ab假阳性出现，是在血清HCV-Ab检测中需加以重视的问题。影响其检测HCV假阳性因素较多，主要包括：（1）标本内物质干扰：干扰物质主要有非特异免疫球蛋白、类风湿因子、补体、异嗜性抗体等，在抗-HCV间接法测定中最终步骤为加入酶标抗人IgG，而血清中高浓度非特异IgG可吸附在固相表面，与之后加入酶标抗人IgG相结合，导致假阳性；在类风湿性关节炎与部分患有免疫性疾病等患者体内存在大量的类风湿因子，类风湿因子多属于IgG，可与变性IgG产生非特异性结合，所以在抗-HCV的测定中，若血清标本中含有类风湿因子，则其可与固相上及酶标的IgG向结合，产生假阳性反应等。（2）检验过程中的操作因素，标本凝固不全、细菌污染、标本溶血、洗板机中洗液量不足、洗板针被堵塞与标本加样时间、显色反应时间、孵育温度控制等多种因素，均有可能造成血清HCV-Ab假阳性的出现。因此为降低ELISA检测血清HCV-Ab假阳率，需做好质控工作，严格按照实验室标准进行检验操作，避免上述不利因素出现，同时在条件允许下应对可疑假阳性标本进行RIBA实验确证。
综上，应用酶联免疫法检测血清丙肝抗体仍存在标本假阳性问题，检验人员需严格按照规范操作，做好质控，避免不利因素，以降低假阳性率，同时在条件允许下应对可疑假阳性标本进行RIBA实验确证。
【参考文献】
[1]周双艳，胡敏，赵克斌，等.全自动酶联免疫吸附法检测血清丙型肝炎抗体精密度评价[J].中国药物与临床，2016，16(3):305-309.
[2]李新建.酶联免疫法检测血清丙肝抗体的测量不确定度的评估[J].中国输血杂志，2013，26(7):630-632.
[3]刘义庆，张淼，王盛华，等.化学发光免疫分析检测丙型肝炎病毒抗体与重组免疫印迹试验确证阳性的关联研究[J].检验医学与临床，2014，11(s1):203-205.
[4]杨燕，李洪波，单万水，等.122例丙肝抗体阳性血清核酸及抗体复检结果分析[J].检验医学与临床，2013，10(A1):39-41.
[5]王燕，尹秋霞，窦恒利.化学发光法和酶联免疫法作为筛选试验测定丙肝抗体的评价[J].标记免疫分析与临床，2013，20(4):246-250.
通讯作者：赵欣,女,汉族，副高，本科，研究方向：卫生检验和实验室管理
论文作者:杜文静,赵欣（通讯作者）
论文发表刊物:《医药前沿》2017年5月第14期
论文发表时间:2017/5/23
标签：血清论文; 阳性论文; 抗体论文; 标本论文; 丙肝论文; 免疫论文; 抗原论文; 《医药前沿》2017年5月第14期论文;