武警新疆总队医院 新疆乌鲁木齐 830091
【摘 要】目的14g讨医院感染多重耐药铜绿假单胞茵的耐药性及耐药表型。方法：对本院 2013年 l0月至2014年 1O月临床检出菌，用天地人 200B系统鉴定及药敏分析，并用三维法对分离的铜绿假单胞菌进行 AmpC 酶检测，同时用双纸片法进行超广谱 p一内酰胺酶（ESBLs）检测。结果：共检出铜绿假单胞菌 64株，其 中检出 AmpC阳性菌株 18株，产酶率为 28．13；产 ESBLs茵株 16株，产酶率为 25．OO；产 AmpC+ESBLs茵株 8株，产酶率为 12．5O。在 14种抗生素中，耐药率最低的是亚胺培南。结论：住院病人免疫力低下的患者是铜绿假单胞茵的易感人群。亚胺培南是治疗感染多重耐药铜绿假单胞菌的有效药物。
【关键词】铜绿假单胞茵；耐抗药性
铜绿假单胞菌（pseudomonasaeruginosa，PA）属于条件致病菌，广泛分布于自然界中，少量定植于 人体消化道、呼吸道及会阴等部位。近年来，医院感 染中多重耐药 PA感 染日益增多，其 产 AmpC酶 和 超广谱 p一内酰胺酶（ESBLs）是 PA对 B一内酰胺 类抗在临床实践中发现，躯体疾病伴发心理障碍或由心 理障碍而引发躯体疾病的发病率呈逐年增高趋势。本研究表明盆底痉挛综合征患者的焦虑抑郁评分明 显高于对照组，且大 多数患者达到轻中度焦虑抑郁 的评分，提示心 理因素亦是盆底痉挛综合征的发病原因之一，抗焦 虑抑郁治疗可减轻患者症状，改善生活质量。
1 材料与方法
1．1 菌株来源 本院 2013年 l0月至 20lO年 l0月从住院患者的分泌物、血液、脓液、尿液、痰、咽拭 子、腹水、胃液、引流液等 1269份 临床标本中分离所得 64 株 PA。标 准 菌 株：大 肠 埃 希 菌（ATCC25922、ATCC35218）购自卫生部临床检验中心。
1．2 检测方法
1．2．1 菌株鉴定与药敏 标本分离按常规操作规程纯分离后，细菌 鉴定和药物敏感实验采用天地人 200B系统。M—H 琼脂购自杭州天和微生物有限公 司。头孢噻肟（CTX 30~g），头孢 噻肟／棒酸（CTXI 30ug／10gg），头孢他啶（CAZ 30／xg），头孢他啶／棒 酸（CAZL 30>g／1O g），头 孢西丁药敏纸片购自英国 Oxoid公 司。
1．2．2 三维法 AmpC 酶检测』。酶粗提物的制 备：挑选 过夜培养的数个受试菌菌落，加 入 1mL生 理盐水反复冻融 5次（一20℃冰箱），漩 涡混匀，4℃，12000r／min离心 1 h，取上清。AmpC酶检测：将0．5麦氏单位标准大肠埃希菌（A TCC25922）的菌悬液密涂于 M H 琼脂平 m，取 一 3O g头 孢西丁（FOX）纸片置于平皿中心，用无菌刀片在离纸片边缘 5mm 处放射性地由里向外切割一道狭缝，用 微量加样器取 8O L 的酶粗提物由里向外加入狭缝内，避免 酶液溢出狭缝，M H 平板 37℃ 恒温箱孵育 过夜。狭缝与抑菌环交界处出现扩大的长菌区域，视为三维试验阳性，即 AmpC酶试验 阳性。
1．2．3 ESBIS的确证试验 采用 cIsI推荐的双 纸片确证试验，用 药敏纸片分配器同时贴上头孢噻肟、头孢他啶、头孢他啶／克拉维和头孢噻肟／克拉维酸。结果判读依照美国临床实验室标准化研究所 cISI（原美国国家临床实验室标准化委员会 NCClS）标准进行。以大肠埃希菌 ATCC25922为质 控株跟随试验。
1．3 统计学处理 计数资料的比较采用 X 检验。
2 结果
2．1 检出结果 1269份标本进行需氧培养，检出PA 64株，检出率 5．04，共检出耐药 PA 42株，其中产 AmpC酶菌 l8株，产 酶率为 28．13；检 出产 ESBLs菌株 16株，产酶率为 25．OO％；同时产 AmpC酶和 ESBIs菌株 8株，产酶率为 12．50。其中从 386份分泌物标本中检出 42株，检出率为 1O．88；从 349份脓液标本中检出 1O株，检出率为2．86；从 251份大便标本中检出 7株，检出率为2．79；从 180份尿标本中检出 3株，检出率为1．67；从其它标本中检出 2株，占1．94。以妇科 病房检出率最高（P<0．05）。
2．2 耐药情况 14种抗生素对 PA 的耐药率显示：耐 药率最低的是亚胺培南，其次 为左旋氧氟沙星 和环丙沙星，与 其他抗生素比较有显著性差异（P <O．01）；氨苄西林、头孢唑啉、头孢曲松
和头孢噻肟 的耐药率显著高于其他抗生素的耐药率（P <0．01）。[1]见表 2。
3 讨论
第 3代 头孢类抗生素如头孢噻肟、头孢曲松和 头孢他啶等具有抗菌谱广、毒性低和耐酶等特点，是 目前常用抗生素之一。在临床上的广泛应用，导 致 对这类抗生素耐药的细菌不断增多，这种对第 3代 头孢类抗生素耐药的主要原因是细菌产生由染色体 或质粒传播的头孢菌素酶一AmpC酶及 ESBIS。PA 具有多药耐药性，耐药 机制复杂。近年来的研究表明，主 要与细菌外膜蛋白的低渗透性、生物膜的形 成、多耐药泵出系统及 ESBIs的 产生等因素有关 ]。住 院病人由于免疫力下降或居住环境的改 变，容易 感染该菌。[2]本院病房 1269份 临床标本中医学临床研究共分离出 64株 PA，占全 院感染患者的 5．04％，与 刘兰等 报道的 5．35 的检出率相近。而且 10．88 的菌株都是从分泌物标本中分离出来。由 此说明，女性 住院病人是 PA 的易感人群，且 以接触 性感染为主。这除了与患者的性别特征与所患疾病 及免疫力下降有关外，可能与病房空气流通差、可能 存在空气感染、接触性的交叉感染等外源性的细菌 感染或与医疗措施的应用不科学或不正确有关。PA对 14种抗菌药物的药敏结果显示，不论单 产 ESBLs、AmpC 酶还是同时产 ESBLs和 AmpC酶的 PA对前 ESBLs代 头孢菌素、青霉素类、黄胺类及单环内酰胺类抗菌药物均高度耐药，耐药率从 80 ～100；但 对碳青霉烯类的亚胺培南有较 高的敏感性，耐药率为 0～4．00，对阿米卡星和左 氧氟沙星亦有一定的敏感性，耐药率为 15．00．0％ ～ 60．0。哌拉西林 ／他唑巴坦抑制剂复合抗生素 对产 ESBLs菌 株有较高的敏感性，但 对产 AmpC 酶菌株的耐药率较高，这与文献报道的较敏感有所 不同[3]。本结果显示产酶菌株的耐药率明显高于非 产酶菌株。亚胺培南对产 ESBLs和 AmpC酶 的 PA具有很强的抗菌活性，可作为治疗 PA引起感染 的首选药物，其 次是喹诺酮类药物，尽管 亚胺培南是 ArnpC酶的强诱导剂，但它能在诱导产生足量的AmpC酶之前快速地杀死细菌。本次检出的 64株 PA 中，产耐药酶 PA42株，产酶率为 65．63。产酶率较高的原因不仅由于产 酶菌株在医院可通过手、各种器械检查、吸痰操作等 各种途径传播，而且可通过耐药质粒在细菌间传 播；另外，也与滥用抗生素，特别是第 3代头孢菌 素关系较大，解决细菌耐药问题最重要 的措施仍是合理使用抗生素。本文有 16株 PA 的 ESBLs表 型筛选阳性，但究竟为哪一种类型的 ESBLs，还需要 设计特异性的引物，扩 增特异性基因才能确定。AmpC酶是由染色体编码的头孢菌素酶，AmpC酶 由 ampC基 因编码产生，在 AmpC酶蛋白合成过程 中，有 ampR、ampD、ampE、ampG 调节基因参与调 控，AmpC酶 蛋白合成受到 ampD 的负性调控，am— pR基因编码的 AmpR蛋白具有激活和抑制两种作 用，控制 ampC基因的表达，PA持续高产 AmpC酶 与调节基因的突变有关。但 PA 调节基因的突变 是如何影响到 AmpC酶产生，必须设计引物扩增特 异性调节基因，然后对调节基因克隆测序才能最终确定。
参考文献：
[1]文细毛，任南，吴安华，等.864例次耐亚胺培南铜绿假单胞菌医院感染特征分析[J].中华医院感染学杂志，2014，第16期：2416-2418.
[2]孙景勇，倪语星，汪复，等.2007年中国CHINET铜绿假单胞菌耐药性监测[J].中国感染与化疗杂志，2013，03期：192-195.
[3]褚海青，李惠萍，何国钧.铜绿假单胞菌的耐药机制[J].中国感染与化疗杂志，2003，01期：54-57.
论文作者:鲁雅诵,尹小鹏
论文发表刊物:《航空军医》2015年19期
论文发表时间:2016/3/2
标签：头孢论文; 检出论文; 铜绿论文; 菌株论文; 率为论文; 标本论文; 抗生素论文; 《航空军医》2015年19期论文;