严家文 张誉驰
（中国药科大学 江苏 南京 211198）
【摘要】目的：采用液相色谱串联质谱法测定Beagle犬血浆中氢氯噻嗪的浓度及其相对生物利用度。方法：选取12条Beagle犬，随机分为2组，按双周期两制剂双交叉试验设计给药，分别口服受试制剂氢氯噻嗪缓释片2片（15mg/片）与参比制剂氢氯噻嗪片1片（25mg/片），采用LC-MS/MS测定Beagle犬血浆中氢氯噻嗪的浓度。结果：受试制剂氢氯噻嗪缓释片与参比制剂氢氯噻嗪片的T1/2分别为（3.273±1.516）、（2.270±0.703）h，Tmax分别为（3.042±0.689） 、（2.167±0.577）h，Cmax分别为（1043.670±221.975）、 （1352.619±267.277）ng/mL，AUC0-24分别为（4390.980±995.001）、（4105.443±1079.121）ng?h/mL。结论：受试制剂氢氯噻嗪缓释片较参比制剂氢氯噻嗪片具有明显的缓释特征，受试制剂无药物突释现象。
【关键词】 氢氯噻嗪缓释片；相对生物利用度；液相色谱串联质谱法
【中图分类号】R97 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2016）09-0189-02
氢氯噻嗪主治水肿性疾病。可促进体内过多的钠和水的排泄，减少细胞外液容量，从而消除水肿。还可与其他降压药联用或单独使用治疗原发性高血压。也可治疗肾性或中枢性尿崩症[1]。
1.资料与方法
1.1 一般资料
体重在10～12kg范围内的雄性Beagle犬12条。
1.2 实验方案
1.2.1试验分组和用药方案 将Beagle犬按体重配对随机分成2组，按双周期两制剂双交叉试验设计服药。一组服用参比制剂（R），用药量：1片；另外一组服用受试制剂（A），用药量：2片。服药前禁食过夜（12小时以上），于次日早晨8：00空腹状态用100mL温开水灌送。
1.2.2血样采集 分别于给药前（0h）和给药后0.25、0.5、0.75、1、1.5、2、2.5、3、4、5、6、8、12、24h从犬后肢静脉取血2mL，放入试管中，静置半个小时左右，3500r/min离心15分钟，取血浆于离心管中，～70℃冷冻待测[2]。
1.2.3血浆样品处理方法 精密量取100μL血浆样品，加入内标氢氟噻嗪标准溶液（9.300μg/mL）10μL，振荡30s混匀，加入300μL甲醇沉淀，涡旋3min，14000r/min离心10min，取上清液，14000r/min再次离心5min，20μL进样[3]。
1.2.4方法学 该方法测定健康Beagle犬血浆中氢氯噻嗪浓度，血浆中内源性物质不干扰样品的测定，线性良好，定量下限浓度为20.344ng/mL，回收率为85.830%～97.024%，介质效应为93.342%～105.585%，日内和日间RSD均小于15%，血浆样品及标准溶液8小时或4℃冰箱保存30天稳定性良好[4]。该方法符合生物样品分析要求[5]。
2.实验结果
2.1 药代动力学参数
2.1.1各受试犬药代动力学参数
2.1.2相对生物利用度 现以AUC0-24之比F为相对生物利用度的正式值，AUC0-∞之比F'为参考值，结果显示F和F'的均值均在80%～125%内，符合相对生物利用度的要求。
2.2 统计分析
2.2.1方差分析 对受试制剂氢氯噻嗪缓释片和参比制剂氢氯噻嗪片两制剂的ln(AUC0-24)、ln(AUC0-∞)、ln(Cmax)进行方差分析，结果表明ln(AUC0-24)、ln(AUC0-∞)、ln(Cmax)在周期间差异均无统计意义，在药剂间、个体间差异有统计意义（P<0.05）。
2.2.2双向单侧t检验及[1-2α]置信区间分析
ln(AUC0-48)、ln(AUC0-∞)、ln(Cmax)双向单侧t检验结果及[1-2α]置信区间分析结果表明，两种制剂的药代动力学参数ln(AUC0-24)、ln(AUC0-∞)的H0不成立，而接受H1，同时结果表明ln(AUC0-24)、ln(AUC0-∞)的[1-2α]置信区间在80%～125%范围内，说明两种制剂在吸收程度上具有生物等效性。另外，两种制剂的药代动力学参数ln(Cmax)的H0成立，而拒绝H1，同时结果表明ln(Cmax)的[1-2α]置信区间不在75%～133%范围内，说明受试制剂的Cmax低于参比制剂。
2.2.3 Tmax的非参数检验
结果显示，受试制剂与参比制剂间有显著性差异，受试制剂Tmax较参比制剂延迟。
3.讨论
本试验采用LC-MS/MS法测定血浆样品中氢氯噻嗪的浓度，血浆中内源性物质不干扰待测物测定。本方法具有快速、准确、选择性强、灵敏度高的特点，适合氢氯噻嗪在Beagle犬中生物利用度及生物等效性的研究。
Beagle犬口服氢氯噻嗪缓释片后经时血药浓度变化过程，均符合一级吸收的一房室模型。受试制剂和参比制剂中的氢氯噻嗪在周期间无显著性差异，但在药剂间显著性差异；且在个体间有显著性差异，建议临床给药个体化。另外，经双向单侧t检验，两制剂在吸收程度上具有生物等效性。ln(Cmax)经双向单侧t检验，Tmax采用非参数检验，两制剂间有显著性差异，受试制剂较参比制剂Cmax下降，Tmax延迟，具有明显缓释特征[6]。
【参考文献】
[1]云天佑,刘嫱,李佩琼等.氢氯噻嗪对正常大鼠的抗清水利尿作用[J].实用医学杂志,2009(15):2426-2428.
[2]徐婷娟,魏伟,徐维平等.酒石酸美托洛尔缓释片人体相对生物利用度研究[J].中国新药杂志,2006,15(14):1206-1209.
[3]刘茜,王鹭,尚宏伟等.液相色谱串联质谱法测定人血浆中氯沙坦/氢氯噻嗪的浓度及其人体相对生物利用度研究[J].中国临床药理学杂志,2009(4):341-345.
[4]钟大放.以加权最小二乘法建立生物分析标准曲线的若干问题[J].药物分析杂志,1996,16(5):343-346.
[5]Razak OA. Electrochemical study of hydrochlorothiazide and its determination in urine and tablets[J].Journal of pharmaceutical and biomedical analysis, 2004, 34(2):433-440.
[6]张志美,沈志强,郭时金等.复方磺胺间甲氧嘧啶钠蜂胶溶液在鸡体内药代动力学试验[J].中国兽医杂志,2010(4):61-62.
论文作者:严家文,张誉驰
论文发表刊物:《医药前沿》2016年3月第9期
论文发表时间:2016/5/16
标签：制剂论文; 血浆论文; 噻嗪论文; 生物论文; 受试论文; 浓度论文; 动力学论文; 《医药前沿》2016年3月第9期论文;