1.佳木斯大学；2.佳木斯大学附属第一医院 黑龙江佳木斯 154002
摘要：目的：观察地塞米松对博来霉素致大鼠肺纤维化的防治作用。方法：90只大鼠随机平分为对照组、治疗组和博来霉素组。造模后，于不同时期（7 d、14 d、28 d）处死大鼠后进行肺泡灌洗，瑞氏染色细胞分类，肺组织HE染色，测定肺组织胶原总量。结果：病理切片显示博来霉素组大鼠肺泡间隔明显增宽，较多纤维母细胞增生及炎性细胞浸润，后期肺组织实变；治疗组各期病理变化较博来霉素组明显减轻，且在后期肺泡壁有恢复的倾向。结论：地塞米松通过抑制肺部炎性细胞在肺组织中的聚集、浸润，以及纤维细胞增殖导致的胶原分泌增加，有效防治肺纤维化。
关键词：博来霉素；肺纤维化；地塞米松
肺纤维化是因肺胀受到损害，器官自行修复而造成的死亡率极高的疾病，根据肺纤维化形成原因可分为矽肺、尘肺、心脏疾病导致的肺纤维、药物导致的纤维化以及特发性肺纤维化等[1]。肺纤维化的发病原因及机制并不清楚，但肺纤维化引起不可逆性的肺功能障碍和呼吸衰竭，造成非常严重的致死性结果。糖皮质激素仍是目前治疗肺纤维化的主要药物，但长期应用激素治疗肺纤维化的同时又面临各种病原体感染这一棘手问题。本实验探讨地塞米松在一定条件下对肺纤维化的控制和改善作用，以及对肺组织的修复作用。
一、材料与方法
1.主要材料
健康SD大鼠（周龄6-8周）90只，体重180-220g。佳木斯大学动物实验中心提供，饲养在佳木斯大学动物实验室，饲养环境无特殊病原（SPF），温度为20±2℃，相对湿度70%，常规饲养。注射用盐酸博莱霉素；地塞米松磷酸钠注射液；HYP检测试剂盒。
2.动物模型的制作
大鼠麻醉后固定于鼠板，常规备皮、消毒，逐层分离颈部组织至暴露气管，将1 ml注射器内的博莱霉素溶液（按5 mg/kg计算）注入气管后迅速将鼠板竖起，使大鼠处于直立位，旋转鼠板使药物均匀分布于大鼠两肺。
3.观察指标
3.1造模后，治疗组每日腹腔注射地塞米松（5 mg/ml）0.4 ml，对照组和博来霉素组每日经腹腔注射生理盐水0.4 ml。分别于第7天、第14天和第28天分批处死动物进行检测。
3.2肺泡灌洗液细胞分类 大鼠处死后，立即取肺组织，称取全肺重量，然后夹闭左肺，右侧注入3 ml生理盐水行肺泡灌洗3次后回收（右肺置-80℃冻存备用）。回收液1 500 r/min离心10 min，取沉淀细胞涂片，瑞氏染色后行细胞分类。
3.3肺组织病理切片 左肺置入4%甲醛固定，经HE染色切片观察肺组织破坏及修复情况。
3.4羟脯氨酸检测 取-80℃保存备用的肺组织经80℃烘干后，置入带螺旋盖玻璃试管中，加入6 N盐酸6 ml，120℃密闭水解24 h或更长时间，开盖120℃加热至盐酸全部挥发，按肺组织质量加入双蒸水使各阶段肺组织浓度相等，以Bergman法[2]测定羟脯氨酸含量。由于羟脯氨酸占胶原含量的12.2%（w/w）[3]，测量结果以肺组织总胶原含量表示。
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二、结果
病理切片显示博来霉素组大鼠肺泡间隔明显增宽，较多纤维母细胞增生及炎性细胞浸润，后期肺组织实变；治疗组各期病理变化较博来霉素组明显减轻，且在后期肺泡壁有恢复的倾向。肺泡灌洗液中性粒细胞博来霉素组和治疗组大鼠在第7天时达到峰值，但治疗组低于博来霉素组（P <0.05），第14天时明显低于博来霉素组（P <0.01）；肺胶原总量博来霉素组和治疗组在第14天时达到峰值，但博来霉素组明显高于对照组（P <0.01），治疗组则明显低于博来霉素组（P <0.01）。
三、讨论：
肺纤维化的进展需要肺泡上皮细胞和间质细胞、炎症细胞、炎症介质、细胞因子及细胞外基质的复杂的相互作用。有研究[4]发现DXM能促进肺纤维化大鼠的肺巨噬细胞凋亡，减少炎性细胞因子的产生而抑制肺纤维化。而肖永久[7]等的研究同样也证实了DXM通过抑制肺部炎性细胞在肺组织中的聚集、浸润，以及纤维细胞增殖导致的胶原分泌增加而有效防治肺纤维化。地塞米松对肺纤维化的作用一直存在争议，Segel通过博来霉素诱导肺纤维化的模型，比较不同剂量的地塞米松治疗效果，发现结果并不支持地塞米松用来预防或者缓解肺纤维化[5]。但Tabata证实了AT地塞米松能直接抑制IL-6剌激肺成纤维细胞的增生，减少放射线诱导的肺成纤维细胞分泌的IL-6及受体。同样通过放射线照射和博来霉素诱导的肺纤维化模型，证实了地塞米松通过减少IL-6，TGF-β的分泌以及依赖其增生转化的作用具有预防放射线诱导的肺纤维化的形成，缓解了博来霉素诱导的肺纤维化[6]。而造成实验结果的差异除了模型形成的时间不同以外，地塞米松的使用方式也存在差异。我们参照Tabata的方法，通过HE和Masson染色以及羟脯氨酸观察博来霉素诱导的肺纤维化的模型，证实了地塞米松能够减轻肺泡炎、肺纤维化的形成。博来霉素组大鼠肺组织进行性破坏直至实变与治疗组大鼠日趋恢复的现象，提示糖皮质激素在防治纤维化的过程中起到了重要的作用。
参考文献：
[1]Steinman L.A brief history of T（H）17，the first major revision in the T（H）1/T（H）2 hypothesis of T cell-mediated tissue damage.Nat Med.2007.13（2）：39-45.
[2]Braun RK，Ferrick C，Neubauer P，et al.IL-17 producing gammadelta T cells are required for a controlled inflammatory response after bleomycin-induced lung injury[J].Inflammation，2008，31（3）：167-79.
[3]Sun L，Louie MC，Vannella KM，et al.New concepts of IL-lO-induced lung fibrosis：fibrocyte recruitment and M2 activation in a CCL2/CCR2 axis[J].Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol，2011，300（3）：1341-53.
[4]李惠萍，李霞，何国钧，等.地塞米松对博莱霉素致肺间质纤维化大鼠肺内炎性细胞的影响.复旦学报（医学版），2004，31（4）：378-382.
[5]Segel MJ，Or R，Tzurel A，et al.All-trans-retinoic acid（ATRA）is of no benefit in bleomycin-induced lung injury.Pulm Pharmacol Then 2001.14（5）：403-7.
[6]Tabata C，Kadokawa Y，Tabata R，et al.All-trans-retinoic acid prevents radiation- or bleomycin-induced pulmonary fibrosis.Am J Respir Crit Care Med.2006.174（12）：1352-60.
黑龙江省自然科学基金项目，课题编号H201370
论文作者:韩杨1,鲍文华2（通讯作者）
论文发表刊物:《健康世界》2015年11期供稿
论文发表时间:2016/2/2
标签：霉素论文; 肺泡论文; 细胞论文; 大鼠论文; 组织论文; 佳木斯论文; 羟脯氨酸论文; 《健康世界》2015年11期供稿论文;