黑龙江省医院 150036
关键词：原发免疫性血小板减少症 淋巴细胞亚群
原发免疫性血小板减少症（primary immune thrombocytopenia，ITP），既往亦称为特发性血小板减少性紫癜，是一种获得性自身免疫性出血性疾病，约占出血性疾病总数的1／3，成人发病率为5／10万～10／10万，其机制为细胞免疫及体液免疫介导的血小板破坏过多及血小板生成减少［1］。近年来研究表明，T、B 淋巴细胞异常共同参与了ITP 的发病［2］。且国内外已有相关研究证实淋巴细胞亚群的检测有助于ITP的诊断、指导治疗及判断预后的临床价值［3-4］。但将该检测项目具体应用于临床的系统分析报道较少，现分析本院20例ITP患者淋巴细胞亚群检测结果并总结如下：
1 材料与方法
1.1 临床资料
1.1.1 研究对象：全部为黑龙江省医院血液科门诊及住院初诊急性ITP 患者，诊断根据临床血象和骨髓检查确诊，符合张之南《血液病诊断及疗效标准》［5］。其中，男4例，女16例，年龄25~88 岁，中位年龄48岁。
1.1.2 主要试剂和仪器：淋巴细胞亚群试剂盒、红细胞裂解液、贝克曼流式细胞仪FC500 为美国贝克曼库尔特公司产品。
1.2 方法
淋巴细胞亚群检测方法：采集外周静脉血2.0mL，EDTA-K2 抗凝后备用。取2 支FACS 专用试管，各加入50 μL 充分混匀的抗凝全血，分别加入20μL CD3/CD8/CD45/CD4 抗体和20 μL CD3/CD16+56/CD45/CD19 标记的抗体。涡旋混匀，室温避光放置
15~20 min。取出加入450 μL 溶血素，充分混匀，避光放置15 min。24 h 内上机进行检测。结果以阳性细胞百分率表示。
2 结果
20例ITP患者12例存在淋巴细胞亚群异常，阳性率60%。其中，NK细胞（CD3-CD16+CD56+）百分比为（2.1-20.8）%，参考值为（7-40）%，减低8例，阳性率40%；B淋巴细胞（CD3-CD19+）百分比为（8.9-47.3）%，参考值为（5-18）%，增高8例，阳性率为40%；总T淋巴细胞（CD3+）百分比为（46.5-80.9）%，参考值为（50-84）%，减低2例，阳性率10%；辅助/诱导性T细胞（CD3+CD4+）百分比为（23.7-44.1）%，参考值为（27-51）%，减低2例，阳性率10%；抑制/杀伤性T细胞（CD3+CD8+）百分比为（21.9-46.1）%，参考值为（15-44）%，增高1例，阳性率5%；CD4+/CD8+比值为（0.64-1.82），参考值为（0.71-2.78），减低2例，阳性率10%。
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3 讨论
ITP是一种免疫介导的血小板减少症，关于其发病机制的研究主要集中于T 淋巴细胞及B 淋巴细胞异常、巨核细胞成熟障碍及血小板破坏加速等方面。CD19是与B 细胞分化、活化、增殖及抗体产生的重要膜抗原，是鉴定B 细胞的标志之一。T 淋巴细胞按细胞膜表面分化抗原及其功能不同，可分为CD 3 + CD 4 + T 淋巴细胞（诱导性T 细胞Ti /辅助性T 细胞Th）和CD 3 + CD 8 +T 淋巴细胞（抑制性T 细胞Ts /细胞毒性T 细胞Tc），Ti 淋巴细胞能影响Th 淋巴细胞和Ts 淋巴细胞的成熟，Th 淋巴细胞能促进CD 19 + B 淋巴细胞、CD 3 +CD 8 + T 淋巴细胞活化增殖，Ts 淋巴细胞能抑制CD19 + B 淋巴细胞的合成分泌抗体，负性调节Tc 淋巴细胞介导的特异性细胞毒性作用，Tc 淋巴细胞对带有特异性抗原的靶细胞有直接杀伤作用。CD16+56+是自然杀伤（natural killer，NK）细胞的特异性标志，NK 细胞对B 细胞分化有抑制作用，能调节吞噬作用和抗体依赖细胞介导的细胞毒作用。以上免疫细胞比例失调就会引起自身免疫病的发生。已有研究表明，淋巴细胞亚群的失衡在ITP的发生、发展过程中起重要作用［3-4，6-7］。
我们回顾性分析本单位20例初诊ITP淋巴细胞亚群数据发现，有60%患者存在异常，提示淋巴细胞亚群的比例失衡可能参与ITP的发生，该检测项目对于辅助诊断ITP起一定作用。其中，40%患者B淋巴细胞比例增高，提示ITP机制主要是B 淋巴细胞的激活，产生大量抗体，引起血小板生存时间缩短，同时抑制骨髓巨核细胞，使其成熟障碍，血小板减少。另有研究证实，NK 细胞对B 细胞分化有抑制作用，并且激活的NK 细胞能够抑制ITP 的自身免疫反应［8］。本研究发现40%患者NK细胞比例减低，提示部分ITP患者是NK细胞数量减少，导致对B 淋巴细胞激活、增殖、分化和抗体应答的抑制能力下降，从而使B淋巴细胞异常活化导致ITP发生。另外，细胞免疫也参与ITP的发生、发展，Th/Ts细胞的平衡在ITP的发生发展过程中也起重要作用[6]。本研究发现2例ITP患者总T淋巴细胞及辅助/诱导性T细胞百分比减低，1例抑制/杀伤性T细胞百分比增高，2例CD4+/CD8+比值减低，虽阳性率不高，但对于指导临床治疗可能有一定指导意义（针对细胞免疫用药）。总之，细胞免疫与体液免疫紊乱在ITP 发病中发挥重要作用，淋巴细胞亚群紊乱参与了ITP 的发病，对其检测可作为ITP 的辅助诊断指标，在指导治疗方面可能有一定的意义。
参考文献：
［1］中华医学会血液学分会血栓与止血学组.成人原发免疫性血小板减少症诊断与治疗中国专家共识.中华血液学杂志，2012，33，975 - 977.
［2］CINES DB，LIEBMAN HA． The immune thrombocytopenia syndrome：A disorder of diverse pathogenesis and clinical presentation ． Hematol Oncol Clin North Am，2009，23（6）：1155-1161．
［3］孙雄飞，陈卫布，林海清，等.成人特发性血小板减少性紫癜淋巴细胞亚群研究.血栓与止血学，2012，18，155-157.
［4］甘思林，孙慧，张秋堂.淋巴细胞亚群在成人特发性血小板减少性紫癜中的变化及临床意义［J］.临床血液学杂志，2009，22（9）：500-501.
［5］张之南.血液病诊断及疗效标准［M］.3 版.北京：科学出版社，2007：172-176.
［6］Mcmillan R，Wang L，Tomer A，et al.Suppression of in vitro megakaryocyte
production by antiplatelet autoantibodies from adult patients with chronic ITP.Blood，2004，103（4）：1364-1369.
［7］ZHANG J，MA D，ZHU X，et al． Elevated profile of Th17，Th1 and Tc1 cells in patients with immune thrombocytopenic purpura.Haematologica，2009，94（9）：1326-1329．
［8］Johansson U，Macey MG，Kenny D，et al． The role of natural killer T（NKT）cells in immune thrombocytopenia：is strong in vitro NKT cell activity related to the development of remission? Br J Haematol，2005，129：564-565．
作者单位：150036 黑龙江省医院血液内科
通信作者：王英慧
论文作者:王丽茹,王英慧（通讯作者）,杜英,赵金花,王鑫
论文发表刊物:《健康世界》2016年2期供稿
论文发表时间:2016/4/13
标签：淋巴细胞论文; 细胞论文; 抗体论文; 患者论文; 免疫性论文; 免疫论文; 抑制论文; 《健康世界》2016年2期供稿论文;