瞿建江
（泰州市人民医院药学部；江苏泰州225300）
【摘要】目的：探讨米非司酮与顺铂配伍作用对卵巢癌耐药细胞株CAOV3/DDP增敏、凋亡及性激素受体的影响。方法：选取经RPMII640培养液培养的卵巢癌耐药CAOV3/DDP细胞株40株进行研究，分为4组，各10株，包括对照组（不予以任何药物）、低剂量组（低剂量米非司酮+顺铂）、中剂量组（中剂量米非司酮+顺铂）、高剂量组（高剂量米非司酮+顺铂），培养结束均实施MTT法观察，比较组间细胞增殖活力、凋亡率，以及性激素（雌激素受体、孕激素受体）阳性率。结果：低剂量组、中剂量组、高剂量组MTT法细胞存活力OD值明显低于对照组（P<0.05），且高剂量组最低（P<0.05）；四组细胞凋亡率与孕激素受体阳性率有明显差异（P<0.05），高剂量组与其余组差异最明显（P<0.05），但四组雌激素受体阳性率比较无明显差异（P>0.05）。结论：米非司酮与顺铂配伍会影响卵巢癌耐药CAOV3/DDP细胞株细胞增殖活力，而且与米非司酮浓度有关，浓度越高则抑制作用越明显；同时，米非司酮配伍顺铂会影响细胞凋亡与性激素受体，需加强重视。
【关键词】卵巢癌耐药CAOV3/DDP细胞株；米非司酮；顺铂；凋亡；性激素受体
卵巢癌属于女性常见癌性疾病，这种肿瘤疾病有着性激素依赖性，不论是内源性还是外源性雌激素、孕激素均可经受体机制诱发生成细胞生长因子，影响卵巢肿瘤发生与发展[1]。米非司酮作为不错的抗孕酮药物，可竞争性拮抗在孕激素受体[2-4]，但相关的作用机制还有待进一步研究。为了进一步探讨米非司酮与顺铂配伍作用对卵巢癌耐药细胞株CAOV3/DDP增敏、凋亡及性激素受体的影响，本文进行了研究，报道如下。
1 材料与方法
1.1 材料
本次选取经RPMII640培养液培养的卵巢癌耐药CAOV3/DDP细胞株40株进行研究，试剂则包括MTT、胰蛋白酶、RPMII640培养基、雌激素与孕激素免疫单克隆抗体试剂盒，仪器则包括MK3型酶标仪、低温离心机、CO2培养箱及激光波等。
1.2 方法
1.2.1 细胞培养：将细胞株冻存在液氮中，应用时则将其复苏即可，培养液含有RPMII640培养基，于37℃、5%CO2饱和湿度培养箱中培养，待瓶内长满后倒掉培养液，荡洗后加入胰蛋白酶液（0.25%），消化2-3min后吸弃消化液。
1.2.2 分组试验：分为四组，各10株，对照组无需任何药物处理，低剂量组予以5μg/ml米非司酮配伍2μg/ml顺铂、中剂量组予以10μg/ml米非司酮配伍2μg/ml顺铂、高剂量组予以15μg/ml米非司酮配伍2μg/ml顺铂。
1.2.3 MTT法测定细胞存活力：继续培养后待细胞悬浮生长至对数生长期，调整细胞浓度到4×103个/ml，混合均匀后加入96孔板，于5%CO2培养箱、37℃继续培养4h，高速离心后吸去上清液，震荡20min，用酶标仪测定光密度值（OD），计算其生存率。
1.2.4 雌激素与孕激素蛋白免疫荧光样品制备及测定：取单细胞悬液106/ml加入100μl的1：100鼠抗人雌激素蛋白单克隆抗体工作液中，室温下孵育半小时，然后加入10ml PBS洗涤，弃上清液后加入100μl的1：100羊抗鼠FTTC-IgG二抗工作液，室温、避光下孵育半小时，加入10ml PBS再次离心洗涤，去未结合二抗后上机检测。检测仪器为EPICSⅡ型流式细胞仪，DNA检测数据采集方式为线性，而免疫荧光检测则为对数，将结果输入计算机处理后打印。
1.3 观察指标
观察记录组间细胞增殖活力、凋亡率，以及性激素（雌激素受体、孕激素受体）阳性率，并对比分析。
1.4 统计学处理
将本次研究的相关数据录入EXCEL表格中，计数资料用百分比（%）表示，予以卡方（χ2）检验，而计量资料则用均数（ ）表示，予以t检验，以P<0.05作为统计学有意义的标准。
2 结果
低剂量组、中剂量组、高剂量组MTT法细胞存活力OD值明显低于对照组（P<0.05），且高剂量组最低（P<0.05）；四组细胞凋亡率与孕激素受体阳性率有明显差异（P<0.05），高剂量组与其余组差异最明显（P<0.05），但四组雌激素受体阳性率比较无明显差异（P>0.05）。详细数据分析见表1。
表1 四组细胞增殖活力、凋亡率、雌激素受体阳性率及孕激素受体阳性率比较（ ）
注：与对照组相相较，*P<0.05；与低剂量组相较，#P<0.05；与中剂量组相较，△P<0.05
3 讨论
卵巢癌是女性三大恶性肿瘤疾病之一，病死率却高居首位，且有60-70%卵巢上皮性癌患者在就诊时已为晚期，治疗及预后极差，严重影响患者生存质量。因其早期诊断难度较大，以顺铂为主的联合化疗、肿瘤细胞减灭术等则属于其常用疗法，但化疗患者约有80%会发生获得性耐药，尤其是对顺铂的耐药性会明显影响效果，五年生存率不足50%[25]。为了进一步探讨米非司酮配伍顺铂对卵巢癌耐药细胞株CAOV3/DDP增敏、凋亡及性激素受体的影响，本次研究针对经RPMII640培养液培养的卵巢癌耐药CAOV3/DDP细胞株40株进行研究，分为4组，各10株，包括对照组、低剂量组、中剂量组、高剂量组，结果显示低剂量组、中剂量组、高剂量组MTT法细胞存活力OD值明显低于对照组（P<0.05），且高剂量组最低（P<0.05）；四组细胞凋亡率与孕激素受体阳性率有明显差异（P<0.05），高剂量组与其余组差异最明显（P<0.05），但四组雌激素受体阳性率比较无明显差异（P>0.05）。从研究结果可以看出，随着米非司酮浓度升高，卵巢癌耐药CAOV3/DDP细胞株抑制作用越明显，可见米非司酮可提高顺铂化疗敏感度，与米非司酮的浓度有一定剂量相关，同时随着米非司酮浓度升高，细胞凋亡率明显上升，而孕激素阳性率则显著下降，揭示米非司酮的增敏与抑制性激素分泌，以及卵巢癌细胞凋亡等密切相关，应加强重视。
【参考文献】
[1] 吴若冰,程通,张雅丽等.米非司酮对人耐药卵巢癌细胞增殖、凋亡及其对紫杉醇敏感性的影响[J].中国癌症杂志,2012,22(2):114-119.
[2] 秦棠妮, 王丽莉. 米非司酮对卵巢癌细胞的增敏作用及其机制的研究[J]. 南方医科大学学报, 2002, 22(4):344-346.
[3] 史欣, 叶连红, 李东红. 米非司酮抑制卵巢癌细胞紫杉醇耐药性产生的研究[J]. 实用癌症杂志, 2013, 28(5):465-468.
[4] 王立英, 邢盈. 米非司酮对卵巢癌耐药细胞株COC1/DDP凋亡及相关基因表达的影响[J]. 中外健康文摘:医药月刊, 2008:388-390.
[25] 柳杨.米非司酮在抑制卵巢癌细胞紫杉醇耐药产生的作用[J].中国现代药物应用,2015,15(3):257-258.
论文作者:瞿建江
论文发表刊物:《医师在线》2016年5月第10期
论文发表时间:2016/7/9
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