关键词：原发免疫性血小板减少症；淋巴细胞亚群
原发免疫性血小板减少症（primary immune thrombocytopenia，ITP），既往亦称为特发性血小板减少性紫癜，是一种获得性自身免疫性出血性疾病，约占出血性疾病总数的1／3，成人发病率为5／10万～10／10万，其机制为细胞免疫及体液免疫介导的血小板破坏过多及血小板生成减少[1]。近年来研究表明，T、B 淋巴细胞异常共同参与了ITP 的发病[2]。且国内外已有相关研究证实淋巴细胞亚群的检测有助于ITP的诊断、指导治疗及判断预后的临床价值[3-4]。现分析本院40例ITP患者淋巴细胞亚群检测结果并报告如下：
1 材料与方法
1.1 临床资料
1.1.1 研究对象 全部为黑龙江省医院血液科门诊及住院初诊急性ITP 患者，诊断根据临床血象和骨髓检查确诊，符合张之南《血液病诊断及疗效标准》[5]。其中，男8例，女32例，年龄23-80岁，中位年龄42岁。20例正常对照为我院体检中心提供，其中，男5例，女15例，年龄20-70岁，中位年龄39岁。2组在性别、年龄具有可比性，差异无统计学意义（P>0.05）。
1.1.2 主要试剂和仪器 淋巴细胞亚群试剂盒、红细胞裂解液、贝克曼流式细胞仪FC500 为美国贝克曼库尔特公司产品。
1.2 方法
1.2.1淋巴细胞亚群检测方法 采集治疗前患者空腹外周静脉血2.0mL，EDTA-K2 抗凝后备用。取2支FACS 专用试管，各加入50μL 充分混匀的抗凝全血，分别加入20μL CD3/CD8/CD45/CD4 抗体和20μL CD3/CD16+56/CD45/CD19标记的抗体。涡旋混匀，室温避光放置15-20 min。取出加入450μL溶血素，充分混匀，避光放置15 min。24h内上机进行检测。结果以阳性细胞百分率表示。对照组的淋巴细胞亚群的检测方法同ITP 组。
1.2.2 治疗方法 新诊断ITP患者参照成人原发免疫性血小板减少症诊断与治疗中国专家共识[1]应用糖皮质激素及丙种球蛋白，或联合应用达那唑、环孢素、吗替麦考酚酸酯、促血小板生成素等治疗。
1.3 疗效判定 采用2016版《成人原发免疫性血小板减少症诊断与治疗中国专家共识》疗效判断[1]：①完全反应（CR）：治疗后PLT≥100×109/L、无出血症状。②有效（R）：治疗后PLTI>30 ×109/L、至少比基础血小板计数增加2倍、无出血症状。③无效（NR）：治疗后PLT<30×109/L者血小板计数增加不到基础值的2倍或者有出血症状。在定义CR或R时，应至少检测2次，其间至少间隔7 d。完全反应率与有效率之和为总有效率。
1.4 统计学方法 采用SPSS 17.0 统计软件。计量资料以x±s表示，组间比较采用t 检验。P<0.05 为差异有统计学意义。
2 结果
2.1治疗前ITP组与对照组比较 NK细胞（CD3-CD16+CD56+）百分比明显减低，B淋巴细胞（CD3-CD19+）百分比增高，总T淋巴细胞（CD3+）百分比减低，辅助/诱导性T细胞（CD3+CD4+）百分比减低，抑制/杀伤性T细胞（CD3+CD8+）百分比增高，CD4+/CD8+比值减低，差异有统计学意义（P ＜ 0.05）。见表1。
表1 治疗前ITP组与对照组比较x±s（%）
ITP是一种免疫介导的血小板减少症，关于其发病机制的研究主要集中于T淋巴细胞及B淋巴细胞异常、巨核细胞成熟障碍及血小板破坏加速等方面。CD19是与B细胞分化、活化、增殖及抗体产生的重要膜抗原，是鉴定B细胞的标志之一。T淋巴细胞按细胞膜表面分化抗原及其功能不同，可分为CD3+CD4+T淋巴细胞（诱导性T 细胞Ti/辅助性T细胞Th）和CD3+CD 8 +T淋巴细胞（抑制性T细胞Ts /细胞毒性T细胞Tc），Ti淋巴细胞能影响Th淋巴细胞和Ts淋巴细胞的成熟，Th淋巴细胞能促进CD19 +B淋巴细胞、CD 3 +CD8+T淋巴细胞活化增殖，Ts淋巴细胞能抑制CD19+B淋巴细胞的合成分泌抗体，负性调节Tc淋巴细胞介导的特异性细胞毒性作用，Tc淋巴细胞对带有特异性抗原的靶细胞有直接杀伤作用。CD16+56+是自然杀伤（natural killer，NK）细胞的特异性标志，NK细胞对B细胞分化有抑制作用，能调节吞噬作用和抗体依赖细胞介导的细胞毒作用。以上免疫细胞比例失调就会引起自身免疫病的发生。已有研究表明，淋巴细胞亚群的失衡在ITP的发生、发展过程中起重要作用[3-4，6-7]。
我们分析本单位40例初诊ITP淋巴细胞亚群数据发现，治疗前ITP组与对照组比较，NK细胞（CD3-CD16+CD56+）百分比明显减低，总T淋巴细胞（CD3+）百分比减低，辅助/诱导性T细胞（CD3+CD4+）百分比减低，抑制/杀伤性T细胞（CD3+CD8+）百分比增高，CD4+/CD8+比值减低，B淋巴细胞（CD3-CD19+）百分比增高，并且差异有统计学意义（P ＜ 0.05）。提示淋巴细胞亚群的比例失衡可能参与ITP的发生，该检测项目对于辅助诊断ITP起一定作用。其中，B淋巴细胞比例增高，提示ITP机制主要是B淋巴细胞的激活，产生大量抗体，引起血小板生存时间缩短，同时抑制骨髓巨核细胞，使其成熟障碍，血小板减少。另有研究证实，NK细胞对B细胞分化有抑制作用，并且激活的NK细胞能够抑制ITP的自身免疫反应[8]。本研究发现NK细胞比例减低，提示部分ITP患者是NK细胞数量减少，导致对B淋巴细胞激活、增殖、分化和抗体应答的抑制能力下降，从而使B淋巴细胞异常活化导致ITP发生，其减低比例较高，临床指导价值较大，值得临床推广应用。另外，细胞免疫也参与ITP的发生、发展，Th/Ts细胞的平衡在ITP的发生发展过程中也起重要作用[6]。本研究发现ITP患者总T淋巴细胞及辅助/诱导性T细胞百分比减低，抑制/杀伤性T细胞百分比增高，CD4+/CD8+比值减低，以上结果提示细胞免疫也参与ITP的发生及发展，对于指导临床治疗可能有一定指导意义（针对细胞免疫用药）。总之，细胞免疫与体液免疫紊乱在ITP 发病中发挥重要作用，淋巴细胞亚群紊乱参与了ITP 的发病，对其检测可作为ITP的辅助诊断指标，在指导治疗方面可能有一定的价值。
参考文献：
［1］中华医学会血液学分会血栓与止血学组.成人原发免疫性血小板减少症诊断与治疗中国专家共识.中华血液学杂志，2016，37，89 - 93.
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［3］孙雄飞，陈卫布，林海清，等.成人特发性血小板减少性紫癜淋巴细胞亚群研究.血栓与止血学，2012，18，155-157.
［4］甘思林，孙慧，张秋堂.淋巴细胞亚群在成人特发性血小板减少性紫癜中的变化及临床意义［J］.临床血液学杂志，2009，22（9）：500-501.
［5］张之南.血液病诊断及疗效标准［M］.3 版.北京：科学出版社，2007：172-176.
［6］Mcmillan R，Wang L，Tomer A，et al.Suppression of in vitro megakaryocyte production by antiplatelet autoantibodies from adult patients with chronic ITP.Blood，2004，103（4）：1364-1369.
［7］ZHANG J，MA D，ZHU X，et al． Elevated profile of Th17，Th1 and Tc1 cells in patients with immune thrombocytopenic purpura.Haematologica，2009，94（9）：1326-1329．
［8］Johansson U，Macey MG，Kenny D，et al． The role of natural killer T（NKT）cells in immune thrombocytopenia：is strong in vitro NKT cell activity related to the development of remission? Br J Haematol，2005，129：564-565．
论文作者:王英慧,赵晶,王丽茹,董霞,史恩红,刘葳,孙巍
论文发表刊物:《健康世界》2018年20期
论文发表时间:2018/11/26
标签：淋巴细胞论文; 细胞论文; 百分比论文; 免疫性论文; 血小板论文; 抗体论文; 免疫论文; 《健康世界》2018年20期论文;