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【摘 要】目的：建立高效液相法，测定不同产地当归中阿魏酸的含量，分析产地对当归质量的影响。方法：采用高效液相色谱法对不同产地当归中的阿魏酸含量进行测定，Agilent Exlent C18柱作为规固定相（4.6mm×250mm，5μm）；流动相为乙腈-0.085%磷酸溶液，比例为17：83；检测波长选择316mm；柱温设置为35℃；流速1.0ml/min。结果：当归药材中阿魏酸在浓度范围0.00612~0.2967g/L与峰面积具有良好的线性关系，r=0.9994。回收率平均为99.23%，RSD=2.17%。结论：采用高效液相色谱法（HPLC）用于不同产地当归中阿魏酸含量的测定，具有快捷、简便、准确和灵敏的优势，可对当归质量控制提供参考。
【关键词】高效液相法；阿魏酸
当归是一种较为常用的中药材，具有活血、补血、调经、润燥和止痛等功效，2015年版《中华人民共和国药典》规定其唯一药材来源于伞形科植物当归的干燥根[1]。临床上对当归的应用较为广泛，需求量不断增加，价格也出现了持续增高的现象，但因产地的气候、管理等影响，使得当归质量有较大差异[2-3]。基于此，本研究参考相关文献，采用高效液相法对四川，陕西，云南，吉林，贵州等产地当归中的阿魏酸含量进行了测定，借以为更好的控制药物质量提供依据。
1仪器与试剂
1.1仪器
高效液相色谱仪，型号选用Agilent-1100型，以及配套仪器，生产厂家：安捷伦科技有限公司；紫外光谱检测器（Agilent-1200型）；Agilent Exlent C18柱作为规固定相：4.6mm×250mm，5μm；电子分析天平（精确到0.0001）；TU-1900紫外可见分光光度计；超声波清洗器。
1.2试剂
甲醇（色谱纯），水为超纯水，乙腈（色谱纯），其他试剂均为分析纯。阿魏酸对照品生产批号为201309，购自中国药品生物制品检定所；当归药材购自当地中药市场，经鉴定均确定为当归。
2结果与方法
2.1色谱条件选择
采用高效液相色谱法对不同产地当归药材中的阿魏酸含量进行测定，固定相：Agilent Exlent C18柱（4.6mm×250mm，5μm）；流动相：乙腈-0.085%磷酸溶液，比例为17：83；柱温设置为35℃；检测波长设置为316mm；流速1.0ml/min；进样量10.0μl。理论塔板数按阿魏酸峰值计算≥5000计。
2.2对照品溶液配制
精确称取阿魏酸对照品0.10mg，将其加入到5ml棕色容量瓶中，然后加入70%甲醇溶液定容，溶液备用。
2.3供试样品溶液配制
将不同产地当归药材研磨成粉末后，采用电子天平称取当归粉末2.0g左右，然后进行精密秤定并记录准确重量；然后将其分别置入具塞锥形瓶，准确加入20ml体积分数为70%甲醇溶液，密塞后秤定其重量，并加热回流，30min后取出，放置冷却后再次进行重量秤定，并用70%甲醇溶液补足减少的重量，充分摇匀后静置，取上清液进行过滤得到供试样品溶液。
2.4线性关系分析
精密吸取不同体积阿魏酸对照品溶液置入10ml容量瓶，吸取体积分别为100μl、200μl、500μl、1.0ml、2.0ml和5.0ml，然后加入70%甲醇溶液定容[4]。分别精密吸取10μl上述各浓度对照品溶液注入到高效液相色谱仪中，分别记录各自峰面积，以峰面积（y）与浓度（x）作标准曲线，，并进行回归分析获得回归方程y=3.1962x-5.0112，r=0.9994。并且阿魏酸在浓度范围0.00612~0.2967g/L与峰面积具有良好的线性关系。
2.5精密度分析
吸取供试样品溶液10.0μl，重复5次进样，测定其峰面积平均值，测得RSD=1.63%。结果表明，2.1中建立的测定方法具有良好的精密度，可满足测定要求。
2.6重复性分析
取5份同一批号的样品，根据“2.3供试样品配制”方法制备样品溶液，同时测定其中的阿魏酸含量，根据2.1中建立的测定方法测定阿魏酸峰面积，经结果计算，RSD=1.77%，具有良好的重复性。
2.7稳定性分析
精密吸取10μl供试样品溶液，分别于0小时、2小时、4小时、6小时、8小时、10小时与12小时进样1次于高效液相色谱仪中，连续进样5次，根据2.1色谱条件进行阿魏酸峰面积测定，经结果计算的RSD=1.54%，表明供试样品中的阿魏酸含量在12小时内是基本稳定的。
2.8回收率分析
称取约0.2g同一批号已知含量当归药材粉末样品，共称取5份样品，然后精密称定，并加入等量阿魏酸对照溶液，按照2.3供试样品配制方案进行溶液配置，精密吸取10μL注入高效液相色谱仪，测定其回收率。结果测得阿魏酸回收率平均为99.23%，RSD=2.17%。具体见表1。
2.9样品含量测定
取5个不同产地四川，陕西，云南，吉林，贵州当归药材供试样品，制成待测溶液，精密吸取10μl供试样品溶液与对照品溶液，注入到高效液相色谱仪中进行阿魏酸含量测定，结果显示，阿魏酸色谱峰与样品杂质峰可实现基线分离，理论塔板数＞5000。5个不同产地当归试样中阿魏酸（四川，陕西，云南，吉林，贵州）含量依次为：0.109%，0.122%，0.118%，0.104%，0.108%。
3 讨论
当归是一种多年生草本植物，临床上具有广泛的用途，但在环境、气候与遗传等因素的影响下，不同产地的当归有效成分种类与含量有着较大的差异[5]。阿魏酸是当归药材中的一种重要的药效成分，可起到清除自由基、抗氧化、降血脂、抗血栓、抗病毒与抗菌等效果，因此在当归质量的评价中，阿魏酸含量是主要指标之一[6]，阿魏酸含量的高低直接影响着当归临床治疗的效果。
当前，高效液相色谱法用于中药材及制剂有效成分含量的测定较为成熟，可快速和稳定的测定成分含量，为此笔者参照2015版《中华人民共和国药典》设置了本次研究的色谱条件，用于不同产地当归药材中阿魏酸含量的测定，本次研究发现，5个产地当归中阿魏酸含量依次为：陕西＞云南＞四川＞贵州＞吉林，这可能与当归药材的生长环境、管理、采收和加工方法等有关。
参考文献：
[1]申安.高效液相色谱法测定不同产地当归中阿魏酸的含量[J].中医学报，2015，30（3）：421-422.
[2]李成义，王延惠，魏学明，等.HPLC测定不同产地当归中阿魏酸的含量[J].西部中医药，2012，25（1）：34-36.
[3]苏华丽，谭梅英，张诚光.不同产地当归中阿魏酸的含量分析[J].湖南中医杂志，2013，29（7）：126-128.
[4]何玲玲.高效液相色谱法测定当归养血丸中阿魏酸含量[J].中国医药导报，2011，8（3）：60-62.
[5]晋玲，金尧，张弦飞，王振恒，吴迪，崔治家，马毅，李应东.不同产地当归药材中阿魏酸含量比较研究[J].中兽医医药杂志，2013，32（2_：12-14.
[6]苏华丽，谭梅英，张诚光.不同产地当归中阿魏酸的含量分析[J].湖南中医杂志，2013，29（7）：126-128.
论文作者:李日臻,刘运林
论文发表刊物:《航空军医》2016年第18期
论文发表时间:2016/10/18
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