杨铁虹[1]2003年在《当归多糖的分离纯化与免疫调节作用及其机理研究》文中提出目的：多糖作为一类重要的生物反应调节剂，在抗肿瘤、抗衰老和免疫调节等方面具有良好的应用前景。研究证明，当归多糖具有抗辐射、抗肿瘤、促进造血等作用。然而，当归多糖的免疫调节作用及其机理尚有待阐明，本研究采用甘肃岷县当归[Angelica sinensis (Oliv.) Diels]，分离纯化当归多糖，对此进行研究。 方法：(1)新鲜当归，清洗、机械捣碎、乙醇回流萃取总挥发油成分；残渣经水煮、醇沉提取当归多糖；经透析、除蛋白、冷冻干燥得到白色粉末状当归总多糖(AP-0)；再经常压凝胶过滤柱层析分离得到不同当归多糖组分。(2)采用改良苯酚-硫酸法测定总糖含量，间羟基联苯法测定糖醛酸含量，Serva Blue-G染料结合法测定蛋白质含量，HPLC法测定重均分子量，当归多糖组分经叁氟乙酸完全水解后应用纸色谱分析单糖组成，溴化钾压片测定红外光谱；水溶液测定紫外光谱。(3)小鼠sc环磷酰胺或ig氢化可的松复制免疫抑制模型，ip AP-0，连续7天，碳粒廓清法测定单核巨噬细胞吞噬功能，进行外周血白细胞和股骨髓有核细胞计数，测定胸腺、脾脏重量计算脏体系数；用绵羊红细胞免疫小鼠，比色法测定血清溶血素IgG、IgM含量。(4)MTT法测定当归多糖组分AP-3对小鼠脾淋巴细胞、腹腔MΦ增殖反应以及混合淋巴细胞反应的影响；免疫磁珠法分离T、B淋巴细胞，测定AP-3对T、B细胞增殖的影响；AP-3与小鼠脾细胞共同体外培养72h，流式细胞术观察CD4~+细胞比例的变化。(5)体外培养小鼠脾细胞，加入不同浓度的AP-3，酶联免疫法测定上清液中IL-2、IFN-γ含量，定量RT-PCR法测定细胞内IL-2、IFN-γ mRNA的表达变化。 第＠罗臣大亏玛士功兔生学（抢支一 结果：O）所得 3个当归多糖组分 AP八，AP毛和 APS，水溶性强、表观性状好。（）AP刀总糖含量67．9％，糖醛酸含量26．7％，蛋白质含量0．8％；APl总糖82．3％，糖醛酸18．l％，蛋白质0．5％，重均分子量＊3－sl）X旷；AP－2总糖 73．7％，糖醛酸 38．l％，蛋白质 0．3％，重均分子量＊－22）X旷；AP上总糖 68．3％，糖醛酸 37．5％，蛋白质 0．7％，重均分子量0－7）XIO＼ 当归多糖各组分在单糖组成上没有明显差别，主要出o，Ara和 Glwt组成；红外光谱呈典型的多糖类吸收光谱，在 770血’有 D－葡萄糖毗哺环的吸收峰，在840cm－’有a－型的C打平伏键吸收峰，提示糖链构型是 a－D叩哺型葡萄糖；＊）在… 10～100 m沙g剂量范围内，当归多糖能对抗环磷酚胺或氢化可的松引起的小鼠脾萎缩，能增加正常小鼠脾脏重量，而对于正常及兔疫抑制小鼠胸腺无明显影响；能显着促进正常及免疫抑制小鼠碳粒廓清率；能够对抗环磷酚胺或氢化可的松引起的白细胞数和股骨髓有核细胞数的降低，对正常小鼠白细胞数和股骨髓有核细胞数无明显影响；不仅对正常小鼠血清溶血素IgG、lgM的生成有较强的抑制作用，还与环磷酚胺或氢化可的松有一定的协同作用。O）在30～300 lgitTll范围内，当归多糖主要组分 AP习能显着促进小鼠脾淋巴细胞。巨噬细胞、混合淋巴细胞和T淋巴细胞的增殖反应，而对B细胞增殖则有一定的抑制作用；显着增加培养的脾细胞中＊＊矿细胞的比例；m当归多糖组分AP3呈时间、剂量依赖性显着增加培养脾脏淋巴细胞上清液中IL上的含量及细胞内mRNA的表达，而对IFN－Y，则呈先升高后降低。 结论：＊）当归多糖的主要组分AP上是均一性多糖，重均分子量低，范围窄，具有潜在药用价值。O）当归总多糖能增强正常小鼠非特异性免疫功能，能对抗环磷酚胺和氢化可的松引起的免疫抑制，而对体液免疫功能则有较强的抑制作用；O）当归多糖组分AP上能增强巨噬细胞和T淋巴细胞的功能，而对B细胞的增殖具有抑制作用；表明当归多糖促进小鼠非特异性免疫和细胞免疫功能是直接激活巨噬细胞、T淋巴细胞，而 4 筹＠罗庄丈学埔士村惠生官幢伦支一其抑制体液免疫则可能与直接抑制B淋巴细胞有关。O当归多糖升高h七和IFN1可能与其调节机体免疫功能密切相关。
杜玲[2]2010年在《钝顶螺旋藻两个生态种多糖的抗菌、抗肿瘤活性及其机理的研究》文中指出本论文以鄂尔多斯高原碱湖钝顶螺旋藻和非洲Chad湖钝顶螺旋藻为材料,分离、提取、纯化和鉴定了其多糖,并对多糖的抗菌、抗肿瘤活性及其作用机理进行了比较研究,以期为鄂尔多斯高原碱湖钝顶螺旋藻及其多糖产品的开发、新的抗肿瘤药物的筛选和寻找天然的抗生素替代品及动物免疫增强剂奠定理论和应用研究基础。论文研究内容分四部分:(1)采用传统的水提醇沉法、叁氯乙酸除蛋白法和活性炭脱色法提取并初步纯化了钝顶螺旋藻两个生态种多糖,SephadexG-100凝胶柱层析法进一步分离纯化得到了鄂尔多斯高原碱湖钝顶螺旋藻多糖ESP和非洲Chad湖钝顶螺旋藻多糖FSP。纸层析法、紫外光谱法、比旋光度法和SephadexG-100凝胶柱层析法检验ESP和FSP都为均一的多糖组分;低温冷冻干燥后ESP为乳白色絮状结晶,FSP为黄色絮状结晶,二者均为易溶于水的水溶性多糖。硫酸-苯酚法测定ESP和FSP的多糖含量分别为89.75%和62.87%;非糖成分检测发现ESP和FSP中残留的非糖成分主要为灰分,其次为少量蛋白质,初步推断这两种多糖均为蛋白结合多糖。在上述研究基础上采用SephadexG-150凝胶柱层析、TLC、HPLC、IR、NMR等技术方法分别对ESP和FSP进行了分子量和结构的研究。结果:ESP和FSP的分子量分别为77625 D和85114 D。ESP糖链的连接方式主要为[α-Glc(1→4)-]n,还有少量的α-Glc(1→6)-、α-Fuc(1→2)-和β-Xyl(1→3)-,-α-Rha为末端糖基;构成其糖链的单糖主要是α-吡喃型的已糖,占比例最大的是葡萄糖,其次为鼠李糖和少量的阿拉伯糖、木糖、半乳糖、甘露糖和果糖。FSP糖链的连接方式为α-Glc(1→6)-和α-Xyl(1→2),-β-Xyl、-β-Gal和-α-Rha为末端糖基;构成其糖链的主要是α-或β-型的吡喃葡萄糖,其次是鼠李糖和少量的木糖、甘露糖、半乳糖和阿拉伯糖。(2)采用管碟法研究了ESP和FSP这两种多糖的体外抗菌活性。结果:ESP和FSP均有抑菌作用,但抑制效果与多糖浓度、细菌种类有关。ESP在20 mg/mL和40 mg/mL添加量时均表现出对痢疾杆菌有较明显的抑制作用,抑菌圈分别为14.17 mm和12.16 mm。FSP表现为在20 mg/mL添加量时对痢疾杆菌、假单孢绿脓杆菌和变形杆菌有抑制作用,抑菌圈分别为12.13 mm、9.10 mm和9.07 mm。(3)采用S180腹水瘤动物模型,考察了ESP和FSP对小鼠体内S180腹水瘤的抑制作用,同时采用MTT和ELISA等实验技术方法检测了ESP和FSP对肿瘤鼠脾淋巴细胞增殖及免疫细胞因子水平的影响,初步探讨了ESP和FSP对荷瘤小鼠免疫增强作用的分子机制。结果:ESP和FSP均能改善荷瘤小鼠的生存质量,抑制小鼠S180移植性肿瘤的生长,缩小肿瘤在体内的浸润范围,延长小鼠的生存时间,中剂量的作用效果最明显,对荷瘤小鼠的生命延长率分别达到50.67%和52.00%。对免疫功能的影响表现为,能在一定程度上降低肿瘤小鼠的脏器损伤,提高肿瘤小鼠的胸腺和脾脏指数,进而提高小鼠的免疫功能;在抑制肿瘤生长的同时,ESP和FSP还能够提高荷瘤小鼠血清IL-2、TNF-α和IFN-γ水平。在体外,ESP和FSP均能够促进ConA诱导的荷瘤小鼠脾淋巴细胞的增殖反应。ESP和FSP中剂量组的对荷瘤小鼠免疫细胞因子、脾淋巴细胞增殖和免疫器官指数的影响最明显。以上分析表明,适宜剂量的ESP和FSP对S180腹水型肿瘤有明显的抑制作用,并能增强荷瘤小鼠由T细胞主导的细胞免疫功能,提高机体的免疫调节作用,免疫调节可能是其抗肿瘤作用的机制之一。(4)采用MTT法研究了ESP和FSP体外对小鼠肉瘤S180,小鼠白血病细胞L1210、人慢性髓性白血病细胞K562和小鼠淋巴瘤细胞YAC-1生长的影响;采用流式细胞术(flow cytometry,FCM)研究ESP和FSP对S180细胞周期和细胞凋亡的影响。结果:ESP和FSP高、中、低叁个剂量组对小鼠肉瘤细胞S180、小鼠白血病细胞L1210、人慢性髓性白血病细胞K562、小鼠淋巴瘤细胞YAC-1的体外增殖均有不同程度的抑制作用;但是,仅ESP和FSP中剂量组对K562的抑制率超过了30%,分别为35.88%和33.98%。ESP和FSP均表现出中剂量的对这4种肿瘤细胞体外增殖活性的抑制作用最明显,但其对S180、YAC-1和K562的抑制作用均显着低于CTX组(P<0.05)。与黄芪糖组相比,仅ESP和FSP中剂量组对K562和FSP中剂量组对YAC-1细胞增殖活性的抑制作用显着高于黄芪糖组(P<0.05)。FCM结果显示,ESP和FSP均能引起细胞周期时相的改变,阻滞S180细胞于G1期,诱导细胞凋亡,并以中剂量组的作用效果最为明显(P<0.05)。
扈瑞平[3]2010年在《沙葱多糖的分离、纯化和结构鉴定及其生物学活性的研究》文中提出沙葱(Allium mongolicum Regel)是内蒙古草原生长量大且为羊喜食的牧草。天然植物多糖具有抗菌、抗病毒、增强免疫力和促进动物生长等作用,是确保饲料和动物性食品安全以及人体健康的理想添加剂。论文通过四部分内容研究了沙葱多糖的提取、纯化和结构,结合体内和体外试验对沙葱多糖的生物学活性进行了较为系统的研究,并从分子水平初步探讨了其免疫调节机制。为开发沙葱资源和绿色、安全的动物免疫佐剂或饲料添加剂提供理论和科学依据。第一部分沙葱多糖的提取、纯化和结构鉴定。采用热水浸提法提取了沙葱多糖,优化了沙葱多糖活性炭脱色的工艺。研究了活性炭添加量、脱色时间和脱色温度对沙葱多糖脱色效果的影响,通过正交试验确定了沙葱多糖活性炭脱色的最佳工艺参数,即脱色温度80℃,活性炭添加量1.0%,吸附时间40 min,在此条件下,脱色率为93.25%,多糖损失率为18.79%。对脱色后的沙葱多糖进行SephadexG-100柱层析纯化并测定其分子量,采用紫外光谱、纸层析、比旋光度法和凝胶柱层析法检验纯度;硅胶薄层层析(TLC)、高效液相色谱(HPLC)鉴定单糖组成,红外光谱(IR)和核磁共振(NMR)进行结构解析。结果表明,纯化后的沙葱多糖(SCSP)是一种白色疏松、易溶于水、分子量为5.89×104 D的均一组分中性多糖,是由L-Rha、D-Glc、D-Gal叁种吡喃糖构成的杂多糖,糖链的主要连接方式为α-Glc(1→4)、[α-Glc(1→4)-]n和端基α-Rha。第二部分SCSP的体外抑菌试验。采用琼脂扩散法比较了沙葱多糖(SCSP)、沙葱鲜汁及黄芪多糖(HQSP)在体外对大肠杆菌、痢疾杆菌、金黄色葡萄球菌、白色葡萄球菌、假单胞绿脓杆菌、变形杆菌的抑菌作用。结果表明,20 mg/mL和40 mg/mL的SCSP对以上6种细菌均有一定的抑制作用,尤其对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的抑菌效果较为明显,最大抑菌圈直径分别为13.3 mm、9.9 mm;HQSP对以上细菌均无任何抑制作用;沙葱鲜汁的抑菌效果更为显着,对6种细菌均有较强的抑制作用,抑菌圈直径均≥8 mm,尤其对肠道细菌痢疾杆菌的抑菌效果最为显着,最大抑菌圈直径为21.2 mm。第叁部分SCSP的抗肿瘤作用。体外采用MTT法,研究了不同浓度的SCSP对S180、L1210、YAC-1、K562和A549 5种细胞株的抑制作用;通过体内饲养试验研究了SCSP对S180腹水瘤小鼠肿瘤的抑制作用和免疫调节作用。结果表明,SCSP高、中剂量组对S180、YAC-1、K562细胞株均有显着抑制作用(P<0.05),SCSP各剂量组对L1210和A549细胞株无显着抑制作用(P>0.05);高、中、低叁个剂量组的SCSP均能够改善S180腹水瘤小鼠的生存状态,提高其生存质量,抑制腹水的形成,延长存活期,此外,还可以提高小鼠的胸腺、脾脏指数及血清IL-2、TNF-α和IFN-γ的含量,尤其以高剂量组的作用效果最为显着(P<0.05)。第四部分SCSP对正常小鼠的免疫调节作用及机理。研究饲喂SCSP对正常小鼠各项免疫指标和免疫细胞分泌细胞因子及基因表达的影响。结果表明,1.25 mg/mL的SCSP能显着提高正常小鼠的免疫器官指数(P<0.05),12.5 mg/mL的SCSP可显着提高小鼠血清IgM、IgG的含量(P<0.05);100~200μg/mL的SCSP作用72 h,能显着促进小鼠脾淋巴细胞的增殖(P<0.05),50~150μg/mL的SCSP作用72 h,可显着增强小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬功能(P<0.05),50~200μg/mL的SCSP能显着提高小鼠NK细胞对YAC-1的杀伤作用(P<0.05),但SCSP各剂量组对正常小鼠骨髓细胞和胸腺淋巴细胞的增殖无显着影响(P>0.05);100、150μg/mL的SCSP能显着增强ConA对正常小鼠脾淋巴细胞分泌IL-2的诱导作用及LPS对正常小鼠腹腔巨噬细胞分泌TNF-α的诱导作用(P<0.05);经RT-PCR技术分析,这两个浓度的SCSP体外能显着促进小鼠脾淋巴细胞IL-2和腹腔巨噬细胞TNF-αmRNA的表达(P<0.05)。整体试验证明,提取的沙葱多糖较纯,含量达87.23%。沙葱多糖体外具有较广普的抗菌活性,对S180腹水瘤有明显的抑制作用,能够促进正常小鼠的特异性和非特异性免疫功能,也能通过诱导免疫细胞产生相关细胞因子及促进细胞因子在mRNA水平的表达来调节动物的免疫机能。
王庆奎[4]2012年在《当归多糖对点带石斑鱼非特异性免疫力的影响》文中研究说明当归多糖（Angelica sinensis polysaccharide，ASP）对哺乳动物具有免疫调节作用，但对水产动物是否具有免疫调节作用尚未见报道。本文首先从中草药当归Angelica sinensis (Oliv.) Diels中提纯当归多糖，并对当归多糖亚组分进行结构分析。然后通过喂食、腹腔注射和体外试验研究当归多糖对点带石斑鱼（Epinephelus malabaricus）非特异性免疫力的影响，为当归多糖在水产养殖上的应用提供理论依据。本论文主要研究内容和结论概况如下。用水煮醇沉法从中草药当归中提取当归粗多糖，乙醇、丙酮脱色、Sevag法除蛋白质，透析、冻干得当归多糖P0。将当归多糖P0溶液用DE-52纤维素柱层析，依次用蒸馏水、0.1M NaCl、0.2MNaCl、0.4M NaCl洗脱得当归多糖P1、P2、P3和P4四种亚组分。采用高效液相色谱、红外光谱和甲基化法研究当归多糖P1、P2、P3分子量和结构。结果表明：当归多糖P1、P2、P3和P4中蛋白质分别为2.21%、1.38%、2.53%和2.34%，总糖分别为95.10%、94.73%、81.68%和79.51%，还原糖分别为5.75%、4.85%、4.86%和4.77%。当归多糖P1、P2、P3分子量分别为4.12×105Da，2.34×105Da和1.94×105Da。当归多糖P1、P2、P3的单糖组成分别为Glc:Xyl:Gal=18:3:1，GlcA:Glc:Xyl:Gal=7:8:3:2和Glc:Xyl=28:1。当归多糖P1、P2、P3的单糖残基均为β构型的吡喃环。当归多糖P1中Glcp为1→3,6、1→3和1→连接，Xylp和Galp为1→3连接；当归多糖P2中GlcAp为1→3连接，Glcp为1→3,6、1→3和1→连接，Xylp和Galp为1→3连接；当归多糖P3中Glcp为1→6、1→4、1→3,6、1→3和1→连接，Xylp为1→3连接。为研究当归多糖对点带石斑鱼非特异性免疫力和抗病力的影响，将当归多糖P0按0、500、3000mg/kg添加到饲料中，喂食点带石斑鱼4、8、12周后取样。结果表明：当归多糖P0能显着提高点带石斑鱼血液白细胞吞噬能力，血清溶菌酶（LZM）活力，头肾白细胞呼吸爆发活力、增殖活力和吞噬能力，降低Edwardsiella tarda攻毒后点带石斑鱼的累积死亡率。用3000mg/kg的当归多糖P0连续喂食12周，点带石斑鱼非特异性免疫力和抗病力最高。将当归多糖P0按0、500、3000mg/kg添加到饲料中，连续喂食101d，研究当归多糖P0对点带石斑鱼生长和非特异性免疫力的影响。结果表明：当归多糖P0对点带石斑鱼摄食、生长、体表黏液抗菌活力、血清一氧化氮（NO）、总蛋白、白蛋白、白蛋白/球蛋白（A/G）值影响不显着（p>0.05）；低剂量的当归多糖P0能显着提高体表黏液LZM活力，而高剂量的当归多糖P0能显着提高血液白细胞数、NBT阳性细胞数，并能提高血液白细胞吞噬率和血清LZM活力；当归多糖P0能极显着降低点带石斑鱼E. tarda攻毒后的累积死亡率，500、3000mg/kg组的免疫保护率分别为45%、69%。为研究当归多糖亚组分对点带石斑鱼非特异性免疫力的影响，将当归多糖P1、P2、P3按20mg/kg体重的剂量腹腔点带石斑鱼，以当归多糖P0做对照，以无菌PBS做空白，在注射前和注射后第3、7、14、21、28d取样。结果发现：当归多糖P0及其亚组分能显着提高点带石斑鱼体表黏液LZM活力、血液白细胞数和NBT阳性细胞数、血清LZM活力、NO含量和A/G值。当归多糖P0能显着提高点带石斑鱼体表黏液抗菌活力，而各多糖亚组分对黏液抗菌活力影响不显着。当归多糖P0及其亚组分对点带石斑鱼非特异性免疫力具有时间—效应关系：注射当归多糖免疫指标升高，注射后28d恢复到空白组水平。注射当归多糖P0及其亚组分均能降低E. tarda攻毒后点带石斑鱼的死亡率，注射当归多糖P0组死亡率最低。单独注射当归多糖各亚组分对点带石斑鱼非特异性免疫力的提高不及当归多糖P0。为研究当归多糖亚组分对头肾白细胞免疫活性的影响，用不同浓度（0、1、10、100、1000μg/mL）的当归多糖亚组分P1、P2、P3体外孵育点带石斑鱼头肾白细胞，以当归多糖P0做对照，测定当归多糖对白细胞增殖、呼吸爆发和吞噬能力的影响。结果表明：当归多糖P0及其亚组分体外能提高点带石斑鱼头肾白细胞增殖、吞噬和呼吸爆发活力。头肾白细胞增殖和呼吸爆发活力随当归多糖P0及其亚组分剂量的增加而增强。当归多糖P0（1000μg/mL）对增殖影响显着。当归多糖P2（1-1000μg/mL）对呼吸爆发活力影响显着。头肾白细胞吞噬能力随当归多糖P0及其亚组分剂量的增加呈显着的先升高后下降的趋势。当归多糖P0、P1为100μg/mL时吞噬能力最高，当归多糖P2和P3在10μg/mL时吞噬能力最高。总之，当归多糖P0及其亚组分P1、P2、P3通过提高体液和细胞免疫的方式提高点带石斑鱼非特异性免疫力和抗病力。各亚组分单独作用时对点带石斑鱼非特异性免疫力的提高不及当归多糖P0。当归多糖亚组分在结构和分子量上的差异可能是造成其免疫活性不同的原因。β吡喃环单糖残基是当归多糖具有生物学活性的基础。
李巍巍[5]2009年在《荔枝多糖的提取分离纯化及其免疫调节作用研究》文中认为荔枝属无患子科,是重要的热带亚热带代表性水果,自上世纪九十年代开始在广东、广西、福建、海南等地发展迅速。目前中国是荔枝的主产国,面积与产量均居世界第一,荔枝面积约900万亩,产量130万吨,分别占世界荔枝总面积的84.5%和总产量的70.5%。荔枝汁液丰富,果肉香味浓郁,营养丰富,据中医记载,荔枝果肉有补脾、益肝、养血、悦颜之功效。虽然人们认识到荔枝的滋补功能已有几百甚至上千年的历史,但关于其保健作用的物质基础和作用机制国内外研究及报道甚少,其具体的功能因子和作用机制不清楚。对荔枝多糖(Litchi polysaccharide,简称LCP)的提取、分离纯化及免疫调节活性进行深入系统的研究,可以揭示荔枝滋补健身的物质基础和作用机理,也为荔枝的深加工提供方向和思路,以期为后续研究奠定基础,为LCP保健品的开发提供理论基础和技术指导。本研究探讨LCP的最佳提取工艺参数,并考察所得LCP对正常小鼠免疫功能的影响,对LCP进行分离纯化,并对分离所得的各个组分进行活性评价,逐步筛选鉴定出荔枝活性多糖,在此基础上,对荔枝活性多糖的分子组成和结构进行鉴定。主要研究结果如下:1.LCP提取工艺的优化:通过响应面分析法对LCP的提取工艺条件进行了优化,结果表明:以荔枝干为材料,LCP的最佳提取工艺条件为pH8.2,微波功率559W,提取时间10.8min,水/料比22.7:1,在此提取条件下,LCP得率可达24.02%,LCP得率是热水提取法的5～6倍。2.LCP的免疫调节活性评价:采用正常小鼠动物模型评价LCP的免疫调节活性,结果表明,与正常对照组相比,LCP 50mg/(kg·d)剂量组可显着提高NK细胞活性和ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化能力;100、200mg/(kg·d)剂量组可显着提高小鼠血清溶血素水平;100mg/(kg·d)剂量组可显着提高小鼠胸腺指数。提示50、100mg/(kg·d)剂量组LCP对小鼠的免疫调节具有一定的增强作用。采用体外小鼠脾淋巴细胞培养增殖实验进一步评价LCP的免疫调节活性,结果表明,100μg/mL剂量LCP体外能够显着增强淋巴细胞增殖,200μg/mL剂量LCP协同ConA、LPS能够刺激淋巴细胞增殖,且呈现剂量依赖性。3.LCP的分离纯化及各级分的体外免疫调节活性评价:比较Sevage法、酶法和酶-Sevage法叁种LCP脱蛋白工艺方法,结果表明,酶-Sevage法脱蛋白效果较好。采用DEAE-52纤维素柱层析、Sephadex G-100凝胶柱层析对LCP进行分级纯化,并结合各分离组分在不同浓度条件下对小鼠脾淋巴细胞增殖作用的影响比较,分离得到活性组分LCP2a,经纯度鉴定证明其为均一成分。以LPS+LCP及单独LCP对小鼠脾细胞增殖的促进作用作为LCP的免疫活性跟踪指标,比较各LCP级分对小鼠脾淋巴细胞增殖作用的影响,结果表明,LCP经DEAE-52纤维素柱分级后得到的级分LCP1和LCP2之间,各剂量组之间LCP2活性均较LCP1有极显着差异(P＜0.01),故将LCP2作为重点组分,进一步用葡聚糖凝胶柱制备亚级分LCP2a。LPS+LCP2a组和LCP2a组在25ug/mL剂量时增殖作用最强,与其它剂量组之间有显着性差异,表明LCP2a在低浓度时可以促进脾淋巴细胞的增殖。4.LCP的结构初析:分析LCP的理化性质,结果表明,LCP是一种不含单糖、多酚和蛋白质的非淀粉类多糖。HPGPC法测定LCP组分LCP3、LCP2a、LCP2b、LCP1的相对分子量分别为4.81×10~5、3.20×10~4、3.08×10~4、5.61×10~5Dal。LCP2a主要是由葡萄糖、甘露糖、半乳糖、阿拉伯糖、木糖、鼠李糖、核糖组成的杂多糖,高碘酸钠氧化和Smith降解结果表明,其含有1→6位糖苷键,且1→6糖苷键占6%,1→3、1→2和1→6糖苷键的比为:68.4:25.5:6.1。本研究创新点:率先建立LCP的的微波协同萃取和分离纯化工艺新方法,其LCP提取率较传统方法显着提高;首次从整体动物水平发现并确证了LCP的免疫调节活性,并明确了其量效关系;以体外小鼠脾淋巴细胞增殖作用为活性跟踪指标,分离出免疫调节活性强的4个LCP组分,并分析了其相对分子量,明确了其中最强活性组分的单糖组成和糖苷键构成。本研究结果对LCP的后续研究有重要价值,可以揭示荔枝滋补健身的物质基础和作用机理,为LCP保健品的开发提供理论基础和技术指导。对于LCP免疫调节的量效及构效关系目前研究尚不完善,需进一步深入研究,探讨其免疫作用的机理。
田苏阳[6]2016年在《当归多糖的提取、化学修饰、抗氧化活性及其结构的研究》文中指出当归作为一种传统中药,不但在妇科疾病方面起到重要作用,而且在补血造血、降血脂、抗肿瘤、抗氧化等方面也具有重要的作用。多糖是当归的一种重要有效成分,它有多种生物活性与功能,比如抗氧化、抗衰老、抗肿瘤及免疫活性等。本研究以当归为原材料,采用超声波辅助法对当归多糖ASP进行提取,利用单因素和正交实验确定合适的因素和水平,基于单因素和正交实验的结果,利用响应面法对实验提取条件进一步优化,从而确定最优化的超声提取当归多糖的条件。对提取的当归多糖ASP进行四种化学修饰,并对化学修饰前后ASP的抗氧化活性进行研究。对抗氧化活性强的多糖进行进一步的分离纯化、结构初步鉴定以及生物活性研究。主要内容及结果如下：(1)对超声提取当归多糖的条件进行优化。其中,单因素实验确定因素的最佳水平分别为：料液比1：40g/mL、超声提取时间25min、超声提取功率400W和超声辐射方式10：15s/s；正交实验选择出合适的叁个单因素,它们对提取率影响的关系是：料液比>超声提取时间>超声提取功率；基于单因素和正交的实验结论设计了响应面实验,得到了当归多糖提取条件的二次回归方程：Y=21.64+0.62X_1+0.81X_2-0.74X_3+0.47X_1X_2-0.48X_1X_3+0.67X_2X_3-1.41X_1~2-0.77X_2~2-1.63X_3~2式中X_1是料液比,X_2是超声提取时间,X_3是超声提取功率,Y是当归多糖提取率的理论值。实验结果证明该方法可以优化超声提取当归多糖,且最佳条件为：料液比1：43.31g/mL、超声提取时间28.06min和超声提取功率396.83W,当归多糖的提取率为21.89±0.21%。(2)对ASP进行硫酸化、磷酸化、羧甲基化和乙酰化四种化学修饰得到多糖S-ASP、P-ASP、C-ASP及Ac-ASP,利用傅里叶变换红外光谱仪测得各修饰多糖均存在相应的特征吸收峰,即四种化学修饰成功。对化学修饰前后的五种当归多糖ASP、S-ASP、P-ASP、C-ASP及Ac-ASP的抗氧化活性实验表明：修饰后的多糖总还原能力和清除羟基自由基的能力无明显增强,但清除超氧阴离子自由基、DPPH自由基和抑制Fe~(2+)诱发的脂质过氧化反应的能力均有显着增强,且P-ASP清除超氧阴离子自由基的能力最强,呈现一定的量效关系,表明化学修饰后的当归多糖具有一定的抗氧化活性。(3)对磷酸化修饰的超声提取的当归多糖P-ASP采用DEAE-52阴离子交换柱和Sephadex G-150凝胶柱进行分离和纯化,得到纯的当归多糖组分P-ASP0。对P-ASPO进行溶解性、颜色反应、紫外光谱(UV)、红外光谱(IR)、高效液相色谱(HPLC)、高碘酸氧化、刚果红实验(Congo red)、核磁共振(NMR)、激光粒度仪、原子力显微镜(AFM)以及环境扫描电镜(SEM)等检测。HPLC结果表明,P-ASPO为均一多糖,相对分子量为1.415×10~4Da；紫外光谱图证明P-ASPO不含有蛋白质和核酸；红外光谱图中,在1057.16cm~(-1)波长的特征峰证明磷酸化修饰成功,866.20cm~(-1)波长的特征峰证明多糖存在β-葡萄吡喃糖,740.62cm~(-1)波长的特征峰证明多糖为α-构型,529.87cm~(-1)波长的特征峰证明多糖为吡喃糖环结构。核磁共振图谱同样证明P-ASPO以α-构型为主,即二者结论是一致的。Congo red实验表明多糖P-ASPO有和Congo red结合的螺旋结构。AFM结果表明P-ASPO为多分枝状的链型结构,并且P-ASPO单链的高度为1nm左右。SEM显示多糖P-ASPO有片状、棒状和颗粒状叁种形态。(4)对P-ASPO进行体外清除超氧(O_2~-·)阴离子自由基、羟基(·OH)自由基和DPPH自由基叁种抗氧化活性的研究以及体外抑制α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶活性的测定,结果证明P-ASPO对O_2~-·自由基的清除能力最显着；其次是DPPH自由基；对·OH自由基的清除能力最小。P-ASPO有一定的抑制α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶活性的能力,并且对α-葡萄糖苷酶的抑制率高于对α-淀粉酶的抑制率。
刘文娟[7]2018年在《当归多糖以Galectin-3为靶点诱导白血病细胞凋亡的构效关系研究》文中进行了进一步梳理目的:当归Angelica sinensis(Oliv.)Diels作为祖国的传统中药应用于血液疾病和妇科疾病等的治疗由来已久。多糖为当归的主要活性成分之一,研究发现当归多糖具有显着的抗氧化、抗肿瘤、促进造血、免疫调节、防辐射等生物活性。已有文献报道,当归多糖对白血病细胞增殖可产生显着的抑制,并诱导其凋亡,在治疗白血病过程中发挥了攻补兼施的独特疗效。本课题组前期研究也表明,当归酸性多糖(特别是AAPS-2Ⅰ组分)有对白血病细胞增殖的直接抑制作用,且较当归中性多糖组分强。此外,前期实验也提示,Galectin 3(Gal-3)可能是当归多糖诱导白血病细胞发生凋亡的作用靶点。本课题拟通过1)分析活性多糖AAPS-2Ⅰ的结构特征;2)建立AAPS-2Ⅰ多糖片段的制备方法,制备AAPS-2Ⅰ的酶降解和酸水解片段;3)筛选可以与Gal-3结合的AAPS-2Ⅰ多糖片段;4)测定AAPS-2Ⅰ及其片段对白血病细胞K562增殖的抑制和凋亡的诱导作用;5)综合分析AAPS-2Ⅰ活性片段的结构特征与诱导白血病细胞凋亡的构效关系五个方面的研究层层深入解析当归酸性多糖AAPS-2Ⅰ抑制白血病K562细胞增殖,并诱导其发生凋亡的活性核心结构特征,进一步阐明AAPS-2Ⅰ发挥白血病细胞增殖抑制作用的靶点和治疗白血病的药效基础,为祖国传统医药的临床研究和新药的开发提供更多生物学实验数据和研究依据。方法:(1)AAPS-2Ⅰ的结构特征分析:HPSEC法测定当归酸性多糖AAPS-2Ⅰ的纯度和分子量,苯酚-硫酸法、硫酸-咔唑法、考马斯亮蓝法分别测定AAPS-2Ⅰ的总糖含量、糖醛酸含量和蛋白含量,HPLC法测定AAPS-2Ⅰ的单糖组成,1D和2D NMR解析AAPS-2Ⅰ糖残基类型和连接方式;(2)AAPS-2Ⅰ多糖片段的制备:酶降解法和酸水解法分别制备AAPS-2Ⅰ的酶降解片段和酸水解片段;(3)固相结合法、MST法测定8种当归均一性多糖及AAPS-2Ⅰ多糖片段与Gal-3的亲和力;(4)CCK-8法测定8种当归均一性多糖及AAPS-2Ⅰ多糖片段对白血病细胞K562的增殖抑制,AnnexinV-FITC/PI双染法测定各均一性多糖及AAPS-2Ⅰ多糖片段作用后白血病细胞K562的凋亡率;(5)HPLC法测定AAPS-2Ⅰ活性片段的单糖组成,NMR分析AAPS-2Ⅰ活性片段的结构。结果:(1)HPSEC实验结果表明,AAPS-2Ⅰ为分子量6.5×10~4 Da的均一性多糖;AAPS-2Ⅰ的总糖含量,糖醛酸含量和蛋白含量分别为96.37%,36.87%和1.08%;其单糖组成及摩尔比Man︰Rha︰GalA︰Glc︰Gal︰Ara(0.2︰0.4︰0.2︰1.0︰3.9︰2.4),此外,还含有痕量的GlcA和Fuc;NMR解析发现AAPS-2Ⅰ结构中主要含有α-L-1,5-Araf、α-L-1,3,5-Araf、T-α-Araf、β-D-1,4-Galp、β-D-1,3-Galp、T-α-Glcp、α-L-1,2-Rhap7种糖残基。(2)建立了AAPS-2Ⅰ酶降解和酸水解片段的制备工艺,分别用β-半乳糖酶、β-甘露聚糖酶、果胶酶和鼠李糖酶4种酶对AAPS-2Ⅰ进行降解,得到了Galase-1、Galase-2、Galase-3、Galase-4、Manase-1、Manase-2、Pecase-1、Pecase-2、Rhaase-1和Rhaase-2共10种酶降解片段;分别用0.5、1.0、2.0 M TFA水解AAPS-2Ⅰ,透析得到3种酸水解片段AAPS-2Ⅰ-0.5-R、AAPS-2Ⅰ-1-R和AAPS-2Ⅰ-2-R。经纯化,获得的13种均一性降解片段分子量831.7~2.5×10~4 Da。(3)MST研究发现在8种当归均一性多糖中,AAPS-2Ⅰ、AAPS-2Ⅱ和AAPS-1Ⅰ可以与Gal-3结合,解离常数(Kd)分别为:93.5±33μM、510.3±106μM和166±4.46μM,AAPS-2Ⅰ酶水解片段中Galase-4、Pecase-1、Rhaase-2与Gal-3有结合,Kd分别为24.5±12μM、166.7±120μM和596±146μM,酸水解片段均与Gal-3无结合作用;固相结合实验进一步证实Galase-4、Pecase-1和Rhaase-2与半乳糖竞争性结合Gal-3,IC_(50)分别为179±18 mg/L、182±17 mg/L和189±29 mg/L。(4)CCK-8法测定当归各均一性多糖及AAPS-2Ⅰ多糖片段对K562细胞的增殖抑制作用,结果显示在8种均一性多糖中,AAPS-2Ⅰ抑制作用最强,其酶降解片段Galase-4可进一步增加抑制作用,IC_(50)可达44.23 mg/L,且呈浓度依赖性关系;AnnexinV-FITC/PI双染色法测定当归各均一性多糖及AAPS-2Ⅰ多糖片段对K562凋亡的影响,结果发现,AAPS-2Ⅰ可显着地诱导K562细胞发生凋亡,其酶降解片段Galase-4能进一步促进白血病细胞K562发生凋亡。(5)AAPS-2Ⅰ可能的糖链结构含有:→2)-Rhap-(1→3)-Galp-(1→)-T-Glcp,→5)-Arap-(1→4)-Galp-(1→,→5)-Araf-(1→3,5)-Araf-(1→3)-T-Araf;与Gal-3亲和作用最强的酶降解片段Galase-4结构中含有→3)-Galp-(1→4)-Manp-(1→主链,→4)-Glcp-(1→5)-Araf-(1→支链;AAPS-2Ⅰ-0.5-R主要的糖链连接方式为:→4)-Manp-(1→4)-Glcp-(1→)-GlcpA。通过比较AAPS-2Ⅰ及其活性片段、酸水解片段的单糖组成和糖链连接方式,初步确定当归多糖抗白血病的构效关系:酸性;GlcA和Rha为非必须糖残基;→3)-Galp-(1→4)-Manp-(1→主链,→5)-Araf-(1→支链是重要的活性单元;多糖酸化降解后活性丧失。结论:本研究初步解析了AAPS-2Ⅰ的结构特征,其主要含有α-L-1,5-Araf、β-D-1,4-Galp、β-D-1,3-Galp和α-L-1,2-Rhap糖残基;建立了AAPS-2Ⅰ酶降解和酸水解片段的制备工艺并制备得到了13种AAPS-2Ⅰ多糖片段;发现8种当归均一性多糖中,AAPS-2Ⅰ对白血病细胞K562的增殖抑制作用最为显着,可通过结合Gal-3产生白血病细胞凋亡诱导作用;其酶降解片段Galase-4对Gal-3的亲和力、K562细胞的凋亡率和增殖抑制作用均进一步增强,表明Galase-4是主要“活性单元”。进一步解析活性片段Galase-4的结构,发现当归酸性多糖AAPS-2Ⅰ诱导白血病细胞凋亡的作用主要由糖链结构决定,而与其分子量大小无显着关系。→3)-Galp-(1→4)-Manp-(1→主链,→5)-Araf-(1→支链是AAPS-2Ⅰ诱导白血病细胞K562发生凋亡的重要活性结构。
孙文平[8]2006年在《叁种药用植物类水溶性多糖对小鼠免疫调节作用及其规律的研究》文中提出多糖是自然界中含量最丰富的生物聚合物。植物多糖作为生命物质的组成成分之一,普遍存在于植物细胞壁中。大量研究表明,它广泛参与了细胞的各种生命现象及生理过程的调节,如免疫细胞间信息的传递与感受,细胞的转化、分裂及再生等活动。药用植物多糖是增强机体免疫的物质基础,对促进和恢复机体免疫机能的作用极为明显。具有增强机体免疫功能、抗肿瘤、抗病毒、抗衰老、抗氧化、抗辐射、降血脂、降血糖、刺激造血等多种生物学功效,而且几乎没有毒性。本文将药用植物多糖作为抗原,探讨其对小鼠免疫功能调节的生物学功效,为多糖在免疫调节功能方面的应用开发提供科学依据。方法本实验研究从药典(2005年版)中选取当归、白术、制白附子叁种药用植物,按植物化学方法从中提取出水溶性多糖;将可溶性淀粉多糖作为“标准”多糖对照;将伤寒杆菌菌体多糖作为细菌多糖对照。以昆明种小白鼠为研究对象,分别给予多糖抗原免疫刺激,采用ELISA检测方法,检测小鼠血清中的相应抗体及交叉抗体,探讨植物类水溶性多糖对小鼠免疫功能的调节作用。结果药用植物类水溶性多糖能刺激小鼠产生特异性IgG类抗体。1.相应抗体检测试验ELISA法检测OD值,当归多糖组与对照组相比较有极显着性升高(P <0.01);白术多糖组与对照组相比较有极显着性升高(P <0.01);制白附子多糖组与对照组相比较有显着性升高(P <0.05);淀粉多糖组与对照组相比较有极显着性升高(P <0.01)。2.交叉抗体试验(1)当归多糖抗原能与白术多糖和制白附子多糖抗体产生交叉反
纪鹏[9]2012年在《当归及其不同炮制品多糖的提取、分离纯化和成分分析》文中研究表明本研究以当归中多糖物质为研究对象，对生当归及其炮制品进行比较分析。采用单因素分析法、正交分析及响应面分析法对当归多糖的提取条件进行优化；然后采用叁种方法除蛋白，采用两种方法除色素，并进行比较分析，透析后应用DEAE-52纤维素柱进行分离纯化，然后采用紫外检测法和葡聚糖~(-1)00色谱柱层析法对当归多糖不同级成分进行纯度鉴定，然后采用苯酚-硫酸反应、水合茚叁酮反应、碘-碘化钾反应、molish反应与斐林试剂反应进行理化性质检验，最后采用薄层色谱法、红外光谱法、气质联用分析法对其进行比较分析；在以上工作的基础上，对生当归及其不同炮制品的多糖进行比较分析；并以甘肃岷县等当归主产区75个样品中所含当归多糖为对象，应用红外光谱进行分析，并采用数据挖掘软件对所得红外光谱数据进行判别分析。实验结果如下：1.当归多糖最佳提取条件是：加水量837.6mL/100g，浓缩后溶液体积为229.12mL，最终含乙醇浓度百分数为65.80%，回流提取时间120min，在此条件下当归多糖的实际得率为10.3972%，和理论预测最佳当归多糖得率相比低0.0433%。2.生当归多糖除蛋白最佳方法为木瓜蛋白酶法结合Sevage法，除色素最佳方法为H2O2法；生当归多糖再经透析、DEAE-52柱层析得到5级成分，其得率分别为：7.6%、18.7%、12.1%、2.65%、23.8%。纯度鉴定结果显示均为均一成分，理化性质检验显示均为糖类物质。薄层色谱分析当归多糖5级成分，显示当归多糖样品中均含有葡萄糖与阿拉伯糖，少许半乳糖。红外光谱分析结果显示生当归多糖中中性糖含量较少，Wasp-5中-COOH成分含量很高，Wasp-5与Wasp-2确定含有吡喃环结构，Wasp-5与Wasp-2确定含有β-型多糖，Wasp-5与Wasp-2确定含有α-型多糖成分。GC-MS分析生当归多糖各级成分为：WASP~(-1)中单糖组成为山梨糖、阿拉伯糖、葡萄糖、半乳糖，摩尔比例为0.039:0.295:0.655:0.011；WASP-2中单糖组成为山梨糖、阿拉伯糖、葡萄糖、半乳糖，摩尔比例为0.051:0.455:0.053:0.441；WASP-3中单糖组成为山梨糖、阿拉伯糖、葡萄糖、半乳糖，摩尔比为0.104:0.419:0.099:0.378；WASP-4中单糖组成为葡萄糖与半乳糖，摩尔比例为0.360:0.640；WASP-5中仅含有葡萄糖。3.生当归、酒当归、油当归、土当归、当归炭经提取后，多糖得率依次为8.95%、9.01%、8.78%、7.96%、6.98%。薄层色谱分析表明生当归及其不同炮制品的多糖中均含有葡萄糖与阿拉伯糖，少许半乳糖。红外光谱分析表明各种当归炮制品中酸性多糖成分含量从高到低依次为油当归多糖、当归炭多糖、土当归多糖、生当归多糖、酒当归多糖，吡喃环糖成分含量从高到低依次为生当归多糖、油当归多糖、土当归多糖、当归炭多糖、酒当归多糖，进一步推断出生当归及其不同炮制品中均含有α-型糖苷键与β-型糖苷键，其含量从高到低为当归炭多糖、生当归多糖、油当归多糖、土当归多糖、酒当归多糖。GC-MS分析结果显示生当归中单糖组成为阿拉伯糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖，摩尔比为0.509:0.061:0.089:0.341；土当归中单糖组成为山梨糖、阿拉伯糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖，摩尔比为0.041:0.373:0.032:0.352:0.202；酒当归中单糖组成为山梨糖、阿拉伯糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖，摩尔比为0.046:0.399:0.023:0.271:0.261；油当归中单糖组成为山梨糖、阿拉伯糖、葡萄糖、半乳糖，摩尔比为0.043:0.368:0.306:0.283；当归炭中单糖组成为山梨糖、阿拉伯糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖，摩尔比为0.061:0.454:0.037:0.216:0.232。4.根据红外光谱中差异明显的1800-800cm-1波段光谱数据，采用spssclementine数据挖掘软件中的过滤节点随机抽取60%的样品作为训练集进行炮制品种类判别分析，结果显示判别率高达100%，说明模型建立准确。余下的40%样品作为验证集，应用建好的模型对不同炮制品种类判别分析，结果显示仅有一个产地的土当归判错为生当归，判错率仅为3.2%。
王惠国[10]2008年在《安络小皮伞多糖的提取及其免疫调节作用研究》文中研究说明中医对菌类本草的认识,是依据中医药的理论体系来阐述的,由于菌类本草具有独特的调理先天之本“肾”和后天之本“脾”的作用,所以受到了不少中医药学者的重视与运用。菌类本草中不少药物具有“扶正补虚”的作用,可广泛运用于精神不振、身倦体乏、咳嗽咳血、气短自汗、畏寒肢冷、久病虚羸、舌淡、脉沉细无力等气虚、阳虚、血虚、阴虚、阴阳俱虚的患者。安络小皮伞是一种分布于我国吉林、辽宁等地的担子菌纲真菌,是一种长期被民间食用和药用的菌类本草。本研究以安络小皮伞多糖( Marasmius androsaceus polysaccharide,MAP)粗品为原料,进行免疫活性多糖的提取、纯化并对分离纯化得到的各个安络小皮伞多糖组分进行了免疫活性评价,筛选出具有明显免疫活性的安络小皮伞多糖组分MAP60,在此基础上,就MAP60对免疫抑制小鼠非特异性免疫、特异性免疫功能的影响进行了研究,并采用分子生物学技术手段研究其免疫调节作用机制。1.安络小皮伞多糖的提取工艺研究目的:安络小皮伞多糖最佳提取条件的确定。方法:相关研究表明,影响多糖提取率的主要因素有乙醇浓度、提取温度、提取时间等。为确定安络小皮伞水溶性多糖的最佳提取条件,本实验首先采用乙醇浓度为60%～100%,水提温度为50℃～90℃,水提时间为1 h～5 h,进行单因素试验,以确定提取条件范围。根据单因素实验结果,将醇沉浓度、水提温度、水提时间叁项作为考察因素,进行响应面分析,确定最佳提取条件。对提取到的粗多糖继续进行纯化,再对纯化后多糖进行乙醇分级,得到3个安络小皮伞多糖组分:MAP40、MAP60、MAP80。结果:通过单因素试验和响应面分析,确定了安络小皮伞多糖的最佳提取条件:醇沉浓度为90%、水提温度为80℃、水提时间为5 h。结论:当采取最佳的提取条件提取安络小皮伞多糖时,此时安络小皮伞多糖得率最高,可以达到51.44%。2.安络小皮伞多糖免疫活性组分的筛选目的:对安络小皮伞多糖中具有免疫调节作用的组分进行筛选。方法:对MAP40、MAP60、MAP80组分进行体外免疫活性测定,分别检测其对T淋巴细胞、B淋巴细胞、腹腔巨噬细胞增殖能力的影响。结果:MAP40对T淋巴细胞、B淋巴细胞、腹腔巨噬细胞增殖作用不明显,MAP60、MAP80均具有协同有丝分裂原促进T淋巴细胞增殖并提高腹腔巨噬细胞增殖的功能。结论:MAP60、MAP80是MAP的免疫活性组分。考虑到提取成本及多糖含量等因素,选取MAP60组分继续深入研究其免疫活性。3.MAP60免疫活性研究目的:检测MAP60的免疫活性。方法:采取皮下注射环磷酰胺的方法诱导免疫抑制模型。用非特异性免疫及体液免疫、细胞免疫的相关指标,评价MAP60对环磷酰胺诱导的免疫功能低下小鼠免疫功能的影响。结果:皮下注射环磷酰胺后,小鼠的非特异性免疫、细胞免疫和体液免疫功能均有所抑制。免疫抑制小鼠腹腔注射MAP60后,MAP60可以增强免疫抑制小鼠非特异性免疫功能如提高吞噬细胞的吞噬功能、提高免疫抑制小鼠脾指数、提高免疫抑制小鼠淋巴细胞水平;增强免疫抑制小鼠的细胞免疫功能如提高迟发超敏反应能力和淋巴细胞转化率;增强免疫抑制小鼠的体液免疫功能如提高抗体分泌水平。结论:MAP60可以提高免疫抑制小鼠的非特异性免疫、细胞免疫、体液免疫功能,能有效拮抗环磷酰胺对小鼠免疫功能的抑制作用。4.MAP60免疫调节作用机制的探讨目的:从分子和基因水平分析MAP60的作用机制。方法:采用酶联免疫吸附实验对免疫抑制小鼠血清及淋巴细胞培养液中IL-1、IL-2、TNF-α、IFN-γ的分泌水平进行检测,通过反转录聚合酶链反应检测MAP60对免疫抑制小鼠脾细胞中IL-2 mRNA、IFN-γmRNA和腹腔巨噬细胞中IL-1 mRNA、TNF-αmRNA表达的影响。结果:MAP60可以提高IL-1、IL-2、TNF-α、IFN-γ在外周血中和免疫细胞培养上清液中的水平,提高腹腔巨噬细胞中IL-1mRNA、TNF-αmRNA的表达,提高小鼠脾细胞中IL-2mRNA、IFN-γmRNA的表达。结论:MAP60在转录水平促进细胞因子的分泌和表达可能是其发挥免疫调节作用的部分机制。
参考文献：
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[4]. 当归多糖对点带石斑鱼非特异性免疫力的影响[D]. 王庆奎. 中国海洋大学. 2012
[5]. 荔枝多糖的提取分离纯化及其免疫调节作用研究[D]. 李巍巍. 华中农业大学. 2009
[6]. 当归多糖的提取、化学修饰、抗氧化活性及其结构的研究[D]. 田苏阳. 陕西师范大学. 2016
[7]. 当归多糖以Galectin-3为靶点诱导白血病细胞凋亡的构效关系研究[D]. 刘文娟. 中国人民解放军空军军医大学. 2018
[8]. 叁种药用植物类水溶性多糖对小鼠免疫调节作用及其规律的研究[D]. 孙文平. 大连医科大学. 2006
[9]. 当归及其不同炮制品多糖的提取、分离纯化和成分分析[D]. 纪鹏. 甘肃农业大学. 2012
[10]. 安络小皮伞多糖的提取及其免疫调节作用研究[D]. 王惠国. 辽宁中医药大学. 2008