湖南省麻阳苗族自治县食品药品工商质量监督管理局 419400
【摘 要】目的 分析高效液相色谱法（HPLC）对生脉胶囊中人参皂苷Rg1和Re含量的测定方法。方法 采用HPLC法，以人参皂苷Rg1和Re为对照品对生脉胶囊中的人参皂苷Rg1和Re含量进行测定，其中色谱柱：Agilent 1100-C18柱（4.6 mm×250mm，5μm），流动相：乙腈-0.1%磷酸溶液（体积比为22：78），柱温：30℃，波长：203nm，流速：1.0 mL/min。结果人参皂苷Rg1、Re分别在0.0412μg～0.412μg、0.1618μg ~1.623μg范围内峰面积与各自含量保持着良好线性关系。其各自平均回收率分别为97.90%、98.32%，RSD分别为1.58%、1.70%；精密度试验显示二者的RSD分别为1.22%、1.06%。结论 高效液相色谱法可作为测定生脉胶囊中人参皂苷Rg1和Re含量的方法，其具有操作简单、准确度高等优点。
【关键词】高效液相色谱；生脉胶囊；人参皂苷；Rg1；Re；含量测定
[Abstract] objective to analyze the HPLC method for the determination of Rg1 and Re contents of ginsenoside in shengmai capsules. Methods HPLC method was used to ginseng saponin Rg1 and Re as reference substance of opposite vein capsule ginseng saponin Rg1 and Re content are measured，the chromatographic column：Agilent 1100 - C18 column（4.6 mm * 250 mm，5 microns），mobile phase：acetonitrile - 0.1% phosphoric acid solution（volume ratio of only 8），column temperature：30 ℃，wavelength：203 nm，the flow rate：1.0 mL/min.Results Rg1 and Re of ginsenoside maintained a good linear relationship between the peak area and their content in the range of 0.0412 ig-0.412 ig-ig-0.1618 ig-1.623 ig-igg respectively. Their average recovery rates were respectively 97.90% and 98.32%，and RSD was 1.58% and 1.70% respectively. The precision test showed that the RSD of the two was 1.22% and 1.06% respectively. Conclusion HPLC can be used to determine the content of ginsenosides Rg1 and Re in shengmai capsules.
[Key words] high performance liquid chromatography；Shengmai capsule；Ginsenoside；Rg1. Re；Content determination
生脉胶囊是临床常用的中成药，属于补益剂，其主要功效在于益气复脉、养阴生津，主要用于气阴两亏、心悸气短、脉微自汗等症状[1]。方中的君药为人参，研究指出人参的主要活性成分有20多种[2]，而2010版的《中国药典》更是将其中的人参皂苷Rg1和Re作为评价药品治疗和给药剂量的重要指标[3]。本研究拟用高效液相色谱法（HPLC）对生脉胶囊中人参皂苷Rg1和Re含量进行测定，现具体报告如下。
1 仪器与试剂
仪器：美国Agilent 1200高效液相色谱仪（北京京科瑞达科技有限公司），VWD普通紫外分光检测器（上海齐羿电子科技有限公司）、四元及真空脱气泵、Sartorius BP211电子分析天平、自动进样器、Bolong超清清洗机（上海波龙电子设备有限公司）、多效蒸馏水机等。试剂与标准品：人参皂苷Rg1及Re对照品均由中国药品生物制品检定所提供，（批号分别为110726-201022、110761-201127）；生脉胶囊为正大青春宝药业有限公司生产药品，（规格：0.3g/s，批号：20150805、20150811、20150816）；甲醇为国产分析纯；注射用水。
2 方法与结果
2.1 制备对照品溶液、供试品溶液及阴性样品溶液
分别量取对照品人参皂苷Rg1及Re对照品各10g，将其置于10ml甲醇中充分溶解制成混合对照品溶液，精密量取1ml置于4ml甲醇中充分溶解制成对照品溶液，置于冰箱低温（4℃）保存待用。
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取30粒生脉胶囊，研磨成粉末并充分混匀，精密称取3g置于锥形容量瓶中，加入浓度为70%的乙醇溶液25ml，密塞后进行常规超声处理30min，超声参数设置：功率250W，频率50kHz，离心后行滤过处理。取如上浓度乙醇溶液20ml对容器等进行充分清洗，蒸干处理后，加注射用水至残渣中使其溶解，经水饱和的正丁醇振摇混匀后提取5次，提取剂量依次为20ml、20ml、20ml、15ml、15ml，将如上提取液混匀置于水浴中蒸干，加适量甲醇以促进残渣充分溶解，混匀后导入容量瓶内，加适量甲醇稀释至10ml；混匀后经0.45m微孔滤膜滤过处理后取续滤液制成供试品溶液，置于冰箱低温（4℃）保存待用。阴性样品溶液制备参照生脉胶囊处方剔除人参以外药材及相关辅料，按生脉胶囊工艺及供试品溶液制备方法制备。
2.2 色谱条件
色谱柱：Agilent 1200-C18柱（4.6 mm×250mm，5μm），流动相：乙腈-0.1%磷酸溶液（体积比为22：78），柱温：30℃，检测波长：203nm，流速：1.0 mL/min。
2.3 线性关系
分别精密吸取1μL、5μ、10μL、15μL、20μL、25μL、30μL混合对照品溶液注入液相色谱仪内，于上述色谱条件下对峰面积进行分析、测定。其中峰面积为纵坐标，对照品溶液含量为横坐标，分析后得到回归方程：Y1（人参皂苷Rg1峰面积）=4615.25X-126.31（X为人参皂苷Rg1含量），相关系数r=0.9998；Y2（人参皂苷Re峰面积）=3906.13X-225.62（X为人参皂苷Re含量），相关系数r=0.9998。人参皂苷Rg1、Re分别在0.0412μg～0.412μg、0.1618μg ~1.623μg范围内峰面积与各自含量保持着良好线性关系。
2.4 稳定性及加样回收率试验
取生脉胶囊20150805同批次供试品，参照2.1方法制备供试品溶液，同上试验法每间隔2h进样10μL进行一次含量测量，共测量6次，结果显示人参皂苷Rg1峰面积RSD值为1.58%，人参皂苷Re峰面积RSD为1.70%，二者在8h内的稳定性均较好。另取适量生脉胶囊20150805同批次供试品，研磨成细粉，按1.5g/份剂量精密称取6份，分别加入适量人参皂苷Rg1、人参皂苷Re对照品，参照2.1方法制备加样回收试验所需供试品溶液，每次进样10μL，结果显示人参皂苷Rg1、人参皂苷Re的平均加样回收率分别为97.90%、98.32%。
2.5 精密度试验
取20150805批次生脉胶囊样品，参照2.1方法制备供试品溶液，同上试验方法分别重复进行6次以上试验，6μL/次，测得各次峰面积。通过分析，人参皂苷Rg1峰面积相对标准偏差（RSD）为1.22%，人参皂苷Re峰面积RSD为1.06%，二者RSD均＜2.0%，精密度良好。
3 讨论
3.1 色谱柱的选择
参照《中国药典》2010版中相关试验测定证实，HPLC法的色谱柱越短，其所需流速及流动量就越小，因此本文于该方法下分别选用15cm、25cm色谱柱分别进行分离，分析显示两种长度色谱柱对人参皂苷Rg1、人参皂苷Re的分离度均≥1.5倍，故本文选用15cm作为色谱柱长度[4]。
3.2 流动相的选择
本文采用不同比例（9：1、3：1、2：1、1：1）的三氯甲烷、乙醚混合溶液进行提取脱脂预实验，结果提示二者按照3：1混合、提取、脱脂后于液相色谱仪下检测出的干扰成分最少，此比例下脱脂较佳[5]。根据相关资料报道采用乙腈-水洗脱法进行人参含量测定，分离效果不佳，笔者分别选用乙腈-0.1%磷酸、乙腈-0.05%磷酸（22：78）进行分析，结果显示前者对样品的分离较佳。进一步对乙腈浓度进行分析，结果显示乙腈浓度在19%～30%时，人参皂苷Rg1、人参皂苷Re分离度得到明显提高[6]。
3.3 提取条件的选择
预实验中将层析法提取法和萃取提取法进行了对比，结果显示后者对人参皂苷Rg1、人参皂苷Re的选择性高、干扰性小、专属性好，采用该方法制备供试品效果更佳。
参考文献：
[1]李文波. 生脉胶囊对冠心病心绞痛的疗效和安全性分析[J]. 中西医结合心血管病电子杂志，2016，4（24）：91-91.
[2]张加雄，王凌，苏永林，等. HPLC法同时测定生脉散配方颗粒中人参皂苷Rg1和Re的含量[J]. 西南国防医药，2017，27（9）：916-918.
[3]祝洪艳，张力娜，王国丽，等. 高效液相色谱法同时测定人参健脾丸中人参皂苷Rg1、Re、Rb1和酸枣仁皂苷A、B的含量[J]. 中国药学杂志，2016，51（9）：751-756.
[4]杨磊，张曼华，蔡虎志，等. HPLC测定温阳振衰颗粒中人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1含量[J]. 中国中医药信息杂志，2017，24（4）：75-78.
[5]黄晓燕，罗时，李瑞莲，等. HPLC法测定血络通胶囊中人参皂苷Rg1、人参皂苷Re和人参皂苷Rb1的含量[J]. 中国药师，2017，20（12）：2248-2250.
[6]孙彩华，付迎，蒋毅超. 高效液相色谱法对生脉胶囊中人参皂苷Rg1和Re的含量测定[J]. 中国医药导报，2016，13（1）：9-12.
论文作者:黄红梅
论文发表刊物:《中国蒙医药》2018年第7期
论文发表时间:2018/8/29
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