杨广承[1]2002年在《周围神经缺血后相关神经元凋亡及神经营养因子动态变化的研究》文中指出目的：本研究通过应用光镜、免疫组织化学和TUNEL染色方法，探讨大鼠坐骨神经缺血后相关脊髓节段和背根节神经元的凋亡及NGF、GDNF表达的变化。探讨神经元凋亡与神经营养因子之间的相互关系，以期为周围神经缺血性神经病的机理及临床治疗提供理论依据。 方法：本实验选用成年Wister大鼠，无菌开腹结扎大鼠单侧髂总动脉制作坐骨神经缺血模型，分别于术后3天、5天、7天、14天、21天和28天时用4％多聚甲醛灌流固定，取腰髓4、5、6节段和双侧第4、5、6腰脊神经节，后固定，常规石蜡包埋、切片，分别进行免疫组织化学及TUNEL染色，光镜下分析结果。 结果：术后随时间的推移，缺血症状的演变，腰髓前角运动神经元及背根节神经元免疫组织化学染色及TUNEL染色结果如下：1．NGF 免疫阳性产物位于细胞浆中，棕黄色，颗粒状，弥漫分布，免疫阳性细胞为中小型神经元，术后早期无变化，5天时阳性率较对照侧开始显着降低，7天时达到最低点，后逐渐复原，至术后28天时与对照侧无明显差异。2．GDNF 在正常侧腰髓前角运动神经元和背根节神经元较少表达，免疫阳性产物位于细胞浆中，颗粒状，弥漫分布，神经元周围胶质细胞及部分神经纤维亦着色。术后3天时，实验侧GDNF表达 中文摘要较对照侧显着升高，并达到峰值。随时间进展缓慢下降，术后 14天时接近正常水平。3．T舰L法染色检测神经元凋亡结果 免疫反应产物位于细胞核，棕黄色，或深黄色，呈阳性反应的凋亡细胞典型表现为体积明显缩小，核致密，染色质边集。术后3天时，背根节神经元凋亡率显着性升高，术后7大时达到峰值，后缓慢下降，28天时接近对照侧水平。腰髓前角运动神经元在术后3大时凋亡率无变化，5天时开始有显着性提高，14大时达到最大值，后逐渐下降，28大时较对照侧仍显着性增高。 结论：在周围神经缺血的过程中，在腰髓前角运动神经元和背根节神经元中NGF表达率均随时间延长而减少，NGF 的表达减弱时，神经元凋亡率升高，两者间呈负相关。GD呷在早期升高，对脊髓神经元起保护作用。周围神经缺血性损伤对背根节感觉神经元的影响较脊髓运动神经元明显，其相关神经元的凋亡与神经营养因子的变化密切相关，NGF、GDW均对神经无有保护作用。神经缺血导致相关神经元胞体中神经营养因子含量减少，是神经元凋亡的主要原因。
杨广承, 薛景凤, 刘爱雅, 徐晓青, 王玉红[2]2009年在《周围神经缺血后相关神经元凋亡及神经生长因子动态变化的研究》文中研究表明目的探讨大鼠坐骨神经缺血后相关脊髓节段和背根节神经元的凋亡及神经生长因子(NGF)表达的变化,以期为周围神经缺血性神经病的机制及临床治疗提供理论依据。方法结扎大鼠单侧髂总动脉制作坐骨神经缺血模型,分别于术后3、5、7、14、21、28d用4%多聚甲醛灌流固定,取腰髓L4～6节段和双侧第4～6腰脊神经节固定,分别进行免疫组织化学及TUNEL染色检测神经元的NGF和凋亡表达,同体对照。结果坐骨神经缺血的不同时间段L4～6脊髓前角运动神经元及背根节神经元可见凋亡神经元细胞,背根节神经元凋亡率术后3d时显着性升高,术后7d时达到峰值后缓慢下降,后期接近对照侧水平。腰髓前角运动神经元在术后5d时开始有显着性提高,14d时达到最大值后逐渐下降,后期较对照侧仍显着性增高。腰髓前角运动神经元及背根节神经元NGF的表达5d时阳性率较对照侧开始显着降低,7d时达到最低点后逐渐复原,至术后28d时与对照侧无明显差异。结论周围神经缺血性损伤导致相关神经元胞体中NGF含量减少,与神经元凋亡相关。缺血性损伤对背根节感觉神经元的影响较脊髓运动神经明显。
杨广承, 薛景凤, 刘爱雅, 徐晓青, 王玉红[3]2010年在《周围神经缺血后相关神经元凋亡及GDNF表达的动态变化》文中指出目的为周围神经缺血性疾病发生机理的研究及临床治疗提供依据。方法结扎大鼠单侧髂总动脉制作坐骨神经缺血模型,分别于术后3、5、7、14、21及28 d取腰髓L4~L6节段和双侧第4~6腰脊神经节固定,采用免疫组织化学及TUNEL染色法检测GDNF表达及神经元凋亡情况;同体对照。结果缺血不同时间段实验侧脊髓前角运动神经元及背根节感觉神经元均可见凋亡细胞,感觉神经元凋亡率术后3 d显着升高,7 d时达峰值,后缓慢下降,后期接近对照侧水平;运动神经元凋亡率术后5 d显着升高,14 d达最大值,后逐渐下降,后期较对照侧仍显着性增高。术后3 d实验侧运动神经元及感觉神经元GDNF阳性率显着升高并达峰值,后逐渐下降,术后14 d两侧无显着性差异。实验侧运动神经元GDNF阳性率升高幅度明显大于感觉神经元。结论周围神经缺血性损伤导致的GDNF变化与神经元凋亡相关,缺血性损伤对感觉神经元的影响较运动神经元明显。
曾静, 王本国[4]2014年在《周围神经缺血后GDNF表达的变化及与神经元凋亡的相关性》文中指出目的探讨周围神经缺血后胶质细胞源性神经营养因子的表达变化以及神经元的凋亡率在周围神经缺血性神经病中的发病机制。方法随机选择Wistar大鼠的一侧作为实验侧,另一侧为对照侧。将大鼠经腹腔麻醉后,从腹部进刀,将实验侧的髂总动脉后进行双重结扎,对照侧不做任何手术,造成大鼠实验侧坐骨神经缺血,于大鼠术后3、5、7、14、21、28 d各取6只,用TUNEL法测神经元的凋亡,免疫组化的方法测胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)的表达阳性率。结果运动神经元的凋亡率在术后3 d时没有明显的变化,在5 d时凋亡率较对照侧显着升高,且凋亡率在术后14 d时达到高峰,随后逐渐下降,但是在观测的时间内仍然高于对照侧。而感觉神经元在术后3 d就发生明显的凋亡,在术后7 d时达到高峰,而到观测时间的28 d时降至对照侧水平;运动神经元中GDNF的表达阳性率在术后3 d就明显增高,然后逐渐降低,到14 d时与对照侧相比差异无统计学意义。而感觉神经元的变化趋势则与运动神经元相同。结论周围神经缺血可导致相关神经元胞体中的神经元凋亡,且感觉神经元对缺血性损伤的敏感度较运动神经元更高。
李登[5]2014年在《神经营养素-3（NT-3）对大鼠坐骨神经离断后腰脊神经节损伤保护作用的实验研究》文中进行了进一步梳理背景：神经营养素家族(neurotrophins，NTs）是一类重要的神经营养因子家族，具有重要的维持神经细胞存活和再生的作用，神经营养素-3（NT-3）是其第3个成员，具有广泛的神经营养活性。脊神经节为感觉神经节，内含许多假单极神经元胞体和平行排列的神经纤维束，主要参与肢体的感觉功能。腰脊神经节损伤的修复，是目前医学领域有待解决的难题。目的：本实验通过对大鼠坐骨神经离断来建立腰脊神经节损伤的模型，阐述实验性神经营养素-3（NT-3）在促进腰脊神经节损伤后神经功能恢复方面的作用，为临床治疗腰脊神经节损伤提供理论依据。方法：SD大鼠54只，雌雄不限，随机平均分为叁组：假手术组、NT-3治疗组和对照组。假手术组仅仅显露坐骨神经；NT-3治疗组于梨状肌孔下10mm处将坐骨神经锐性离断后逐层缝合，每天皮下注射1ml神经营养素-3（NT-3）(10ug／m1）；对照组每天皮下注射与治疗组相同体积的生理盐水。术后对大鼠进行一般观察，于术后4周取大鼠腰脊神经节进行尼氏体染色、HE染色观察脊神经节神经元的病理形态学变化、局部炎症反应情况及Bcl-2、Bax表达阳性率，检测脊神经节神经细胞凋亡情况。结果：一般观察：大鼠坐骨神经离断后，术侧下肢均呈现足下垂畸形、跛行步态等运动功能障碍，随着时间的推进先后出现足趾红肿、散开、皮肤干燥、部分皮毛脱落、溃疡、自噬足趾、肌肉萎缩等失神经营养现象，NT-3治疗组上述现象较对照组略显轻微。NT-3治疗组见近端新生神经直径较对照组粗大。尼氏体染色：坐骨神经切断后，对照组尼氏体溶解消失，数量明显减少，脊神经节神经元着色明显变浅，胞体肿胀，轮廓欠清晰，神经细胞数量明显减少；而NT-3治疗组脊神经节神经细胞染色较假手术组轻度变淡，脊神经节神经元形态结构基本正常，数量减少不明显。HE染色观察：术后对照组脊神经节神经元数量减少、神经元细胞体呈现水肿、空泡样变性、尼氏体溶解神经元染色较淡、核固缩，并有典型细胞凋亡存在，NT-3治疗组脊神经节神经元细胞体水肿变性及凋亡程度较对照组减轻，神经元染色较深。Bcl-2、Bax免疫组化检测：免疫组化Bcl-2、Bax阳性染色为棕黄色，假手术组未见或仅见少量阳性细胞。对照组染色较深，Bcl-2、Bax阳性细胞数较假手术组明显增高（P<0.05），表明损伤严重。 NT-3治疗组Bcl-2、Bax阳性细胞表达数显着低于对照组（P<0.05），表明NT-3对神经节的保护作用明显。结论：坐骨神经离断可以引起腰脊神经节损伤，脊神经节神经元死亡方式主要为细胞凋亡；神经营养素3在维持脊神经节神经元存活、抑制细胞凋亡方面发挥着重要的神经营养性作用。
佚名[6]2010年在《神经发育、损伤和再生》文中提出1.电针对坐骨神经修复中相应脊髓前角细胞变化的形态学观察武煜明蔡恩丽陈滟唐柱生云南中医学院解剖教研室昆明650500应用电针治疗周围神经损伤是一种行之有效方法。本实验用选用Wistar大白鼠96只,对96只大鼠同时进行定位、定量和定时的坐骨神经钳夹手术制造坐骨神经损伤的动物模型并随机分成电针组(32只),西药组(32只)和对照组(32只)。对术后4组分别进行相应的治疗。(1)电针组:采用类比法取穴取"环跳"穴
刘敬霞[7]2007年在《脑脉通联合骨髓间充质干细胞移植对脑缺血再灌注大鼠神经细胞再生的影响》文中认为背景与目的缺血性脑血管疾病的高致残率严重影响患者的生存质量，脑缺血损伤引起的神经元结构破坏和缺失是引起功能障碍的病理关键。针对脑缺血损伤引起的生化、代谢改变，保护神经元免于受损，或促进脑缺血损伤后神经细胞再生成为干预损伤、恢复功能的重要策略。目前药物性的神经保护研究和临床应用仍欠理想。骨髓间充质干细胞(bone marrow stromal stem cells，BMSCs)具有较强的增殖能力和多向分化潜能，可以分化为神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞等神经细胞，成为脑缺血损伤后神经细胞再生理想的种子来源。鉴于骨髓间充质干细胞体外诱导剂的毒副作用和体外分化后移植脑内较弱的存活能力，近年来，对体外纯化、扩增培养的骨髓间充质干细胞移植脑内以治疗脑缺血损伤成为研究的热点。因此，开展骨髓间充质干细胞移植在神经细胞再生和神经功能修复方面的研究对脑缺血损伤具有重要意义。近年来渐有中医药在骨髓间充质干细胞移植治疗脑缺血损伤的报道，但研究多集中于对其体外的诱导分化方面，所选药物以单味中药或提取物为主，而中药复方对BMSCs移植后在活体内影响其存活、分化方面的研究少见。脑梗死属中医“中风”范畴，其病机复杂，以浊毒、血瘀和气虚表现尤为突出：气虚血瘀、毒损脑络为脑梗死的主要病机。解毒降浊、益气化瘀为脑梗死的主要治法。据此研制的中药复方脑脉通(大黄川芎人参葛根)具有解毒降浊、益气活血通络功效，可对脑缺血损伤发挥保护作用。动物实验和临床观察表明，脑脉通治疗脑梗死的效果肯定，可显着改善患者的生存质量。鉴于上述，开展中医药联合骨髓间充质干细胞移植治疗脑缺血损伤研究具有重要意义。本研究从脑缺血再灌注大鼠神经细胞再生方面评价脑脉通、BMSCs移植及其联合的脑保护作用，并从脑脉通对BMSCs移植后脑组织神经营养因子水平、向神经细胞分化的比率及对促神经元突触重建的生长相关蛋白表达的影响方面探讨其可能的作用机制。方法本研究以SD大鼠为研究对象，体外全骨髓贴壁筛选培养法获取骨髓间充质干细胞；移植前48 h用Brdu对骨髓间充质干细胞进行体外标记；栓线阻塞大鼠大脑中动脉制备局灶性脑缺血再灌注动物模型；脑缺血3 h再灌注24 h由颈内动脉移植骨髓间充质干细胞悬液。动态观察移植后早期(7 d)、中期(14 d)、后期(28 d)大鼠的神经功能和生存状况变化；采用病理形态学、免疫组织化学法以及免疫组织化学双标法，从神经功能综合评分、脑组织含水量、脑梗塞灶、神经细胞超微结构变化方面观察脑脉通对骨髓间充质干细胞移植保护脑缺血损伤的影响；从神经元和神经胶质细胞特异性标志蛋白以及与之相关的神经营养因子表达的变化方面探讨脑脉通联合骨髓间充质干细胞移植对神经细胞的保护作用及可能的作用机制；观察骨髓间充质干细胞移植后在脑内的存活、迁移和分化特点以及脑脉通对其的影响；进一步从神经元突触标志性蛋白表达的变化方面观察骨髓间充质干细胞移植后对神经元突触重建的作用以及脑脉通对其作用的影响。主要研究结果如下：结果1．脑脉通联合骨髓间充质干细胞移植对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用1．1体外全骨髓贴壁筛选培养法纯化骨髓的效果理想，可在短期内获取移植所需的骨髓间充质干细胞；颈动脉移植骨髓间充质干细胞操作易行，细胞悬液少有外漏，移植途径可取。1．2脑缺血再灌注损伤后大鼠体重变化呈现由减轻到增加的趋势，且体重的变化与大鼠全身状况一致；大鼠神经功能随脑缺血再灌注时间的延长逐渐恢复；脑组织水肿程度、梗塞灶的大小及神经细胞超微结构的改变随脑缺血再灌注时间的延长出现由加重到减轻的改变。1．3骨髓间充质干细胞由颈内动脉移植对脑缺血损伤的保护作用与其移植脑内后的时间相关，BMSCs移植后早期未显出明显的保护作用；移植中期的神经功能恢复，脑组织水肿、梗塞灶大小和神经细胞超微结构有改善趋势；移植后期的神经功能恢复和神经细胞超微结构的改善明显。1．4脑脉通对脑缺血再灌注损伤不同时间的均有不同程度的改善作用；BMSCs移植联合脑脉通对脑缺血再灌注损伤的保护作用较单纯BMSCs移植的作用提前，联合应用对神经功能的修复和对神经细胞病理损伤的改善作用明显增强，且随移植后BMSCs在脑内时间的延长，联合应用的保护作用更为显着。2脑脉通联合骨髓间充质干细胞移植对大鼠脑缺血再灌注损伤神经细胞再生及神经营养因子的影响2．1随着脑缺血再灌注时间的延长，脑组织神经元和神经胶质细胞特异性标志蛋白的表达减弱；神经生长因子和胶质源性神经营养因子的变化随脑缺血再灌注时间的延长呈现先增高再降低特点。2．2 BMSCs移植后早期神经元和神经胶质细胞特异性标志蛋白无明显增高；随BMSCs移植脑内时间的延长，神经元和神经胶质细胞特异性标志蛋白的表达增强，其中神经元特异性烯醇化酶的增强较胶质纤维酸性蛋白明显，以移植后期的增强更为显着。BMSCs移植后早期对神经生长因子和胶质源性神经营养因子的水平变化无明显影响，随移植后时间的延长，其上调神经营养因子的作用增强。2．3脑脉通联合BMSCs移植后早期神经元特异性烯醇化酶的表达较单纯移植组增强；联合组后期的神经元特异性烯醇化酶和胶质纤维酸性蛋白的表达均有增强。脑脉通联合BMSCs可明显提高移植中期胶质源性神经营养因子水平，并使移植后期神经生长因子的表达明显增强。3．脑脉通对脑缺血再灌注损伤大鼠骨髓间充质干细胞移植后向神经细胞分化的影响3．1 BMSCs移植后在脑实质内和血管腔内的分布比例随移植后时间的延长而增加。移植后早期，大多BMSCs位于血管腔内，黏附血管内皮呈丛簇样聚集，脑实质内有少量散在的BMSCs，分布未见明显规律；移植后中期，BMSCs大多从血管壁通过血脑屏障进入脑实质内，并向缺血侧部位迁移，血管腔内可见到少数标记的BMSCs；移植后期，血管腔内未见Brdu细胞，存活的BMSCs全部由血管进入脑实质，并迁移至缺血侧，对侧少有Brdu细胞；联合脑脉通可使OBMSCs移植后在脑实质内存活的数量明显增多，但脑实质和血管腔内BMSCs的比例及进入脑实质后的迁移方向未见明显改变。3．2 BMSCs移植后向神经细胞的分化随植入时间的延长出现分化率和分化方向的改变。BMSCs移植后早期在脑实质内的分化率低，未显示出分化方向的差异性；移植后中期的分化率明显增高，以向神经胶质细胞的分化明显；移植后期，BMSCs向神经元细胞的分化明显增强，而向神经胶质细胞的分化相对减弱；脑脉通对BMSCs移植后不同阶段在促进BMSCs向神经细胞分化方面的作用具有差异性，表现为在移植中期促进神经胶质细胞分化，而移植后期则使BMSCs向神经元方向的分化增强。4．脑脉通联合骨髓间充质干细胞移植对大鼠脑缺血再灌注损伤神经元突触重建的影响4．1脑缺血再灌注损伤后神经元结构破坏，神经丝排列紊乱，变短，数量减少，稀疏，分布不均匀，且随脑缺血再灌注时间的延长而加重；促进受损后神经元突触重建的生长相关蛋白-43和标志神经元突触重建的蛋白表达减弱，且随脑缺血再灌注时间的延长呈现递减趋势。脑脉通对脑缺血再灌注早期的神经元结构受损具有保护作用，神经元突触素蛋白的表达增强，但对生长相关蛋白-43的表达无显着影响。4．2 BMSCs移植后早期对神经元结构受损未显出明显的保护作用；移植后中期，神经元突触重建特异性标志蛋白显示增加趋势；移植后期神经丝蛋白、促突触重建的生长相关蛋白-43和神经元突触素蛋白的表达增强。BMSCs对脑缺血再灌注损伤神经元突触重建的促进作用与移植脑内存活的时间相关，该作用随移植后时间的延长而增强。4．3脑脉通联合BMSCs移植可使早期神经丝蛋白表达增强、神经元结构破坏减轻；神经生长相关蛋白-43的表达提前，并增强其后期的表达；移植后期神经元突触素蛋白的表达增强。结论综合上述研究，结果提示，①体外全骨髓贴壁筛选纯化、培养和扩增BMSCs的方法可行，Brdu标记BMSCs的效果理想，由颈内动脉移植BMSCs悬液易于操作，移植后的BMSCs可在脑内存活、迁移，对脑缺血再灌注损伤具有保护作用。②脑缺血再灌注损伤后神经功能、脑组织水肿、梗塞灶大小和神经细胞超微结构改变可随脑缺血再灌注时间延长有不同程度恢复；脑脉通对脑缺血再灌注损伤不同阶段具有不同程度的保护作用，以早期的作用明显；BMSCs对脑缺血再灌注损伤的保护作用与其移植后的时间相关，移植后早期未显出明显的脑保护作用，但随着BMSCs移植脑内时间的延长，其保护作用逐渐增强。③神经细胞随脑缺血再灌注损伤时间的延长持续受损、数量减少，神经营养因子出现先增高再降低特点，其在早期的升高对神经细胞受损具有保护作用，后期水平降低则不利于神经细胞的再生和修复；脑脉通对神经细胞的保护作用与其早期和中期上调胶质源性神经营养因子、后期上调神经生长因子表达有关；BMSCs移植对保护神经细胞和上调神经营养因子表达的作用随移植后时间的延长而增强；脑脉通联合BMSCs移植可使其对神经细胞的保护作用提前，并使后期的作用增强，以对神经元的作用尤为明显，这可能与脑脉通促进BMSCs移植后上调神经营养因子表达的作用有关。④随移植后时间的延长，BMSCs逐渐从血管壁通过血脑屏障进入脑实质内存活、向缺血侧迁移，出现神经细胞分化，但未显示出分化方向的差异性；脑脉通可使移植后BMSCs在脑内的存活增强，并在促进其向神经细胞分化方面显示出差异性，表现为促进中期BMSCs向神经胶质细胞分化和后期向神经元细胞分化。⑤神经元突触重塑是其结构重建与功能修复的基础，神经元突触重塑功能随脑缺血再灌注时间的延长有减弱趋势，这可能与促进神经元突触重建生长相关蛋白的表达下调有关；脑脉通在脑缺血再灌注早期可保护神经元结构受损，后期可增强神经元突触重建；BMSCs对神经元突触重建作用随移植后时间的延长逐渐增强；脑脉通联合BMSCs可使脑缺血再灌注损伤后早期神经元突触重建提前，并可增强中期与后期的神经元突触重建，其作用可能是通过上调促神经元突触重建的生长相关蛋白-43的表达实现。因此认为，脑脉通联合BMSCs移植对脑缺血再灌注神经细胞再生具有促进作用，其作用与脑脉通使BMSCs移植后上调神经营养因子、促进向神经细胞分化及增强促神经元突触重建的生长相关蛋白表达的作用在早期提前和在后期增强有关。研究可为BMSCs移植治疗脑缺血损伤以及相关领域中药的深入研究提供科学依据，并对进一步中医药学及其与细胞治疗学应用的研究具有重要价值。
佚名[8]2003年在《《中国临床康复》2003年第7卷1～32期主题词索引》文中认为(旬刊2003年1月5日至12月25日主题词索引按汉语拼音音序排列)《内经》李建梅,王慧峰,赵鹏.从《黄帝内经》谈太极拳的机制及其应用初探(15):22355-甲氧色胺李淑惠,胡德耀,李晓辉,等.N-乙酰-5-甲氧色胺镇痛作用的实验研究(8):1277A
任秀君[9]2007年在《针刺对高血脂合并脑缺血大鼠神经干细胞和神经营养因子的影响》文中提出研究目的:高脂血症(hyperlipidemia,HLP)由血中脂蛋白合成与清除紊乱所致,表现为血浆脂蛋白异常、血脂增高等,属于祖国医学的“痰浊”“瘀血”范畴。它是动脉粥样硬化等心脑血管疾病发生的重要危险因素,有效地防治HLP是防治心脑血管疾病的重要途径。脑血管疾病是目前严重危害人类健康的主要疾病之一。在我国死于脑血管病者居叁大死因首位。其中缺血性脑血管疾病占60%～80%。脑血管病具有发病率高、致残率高、死亡率高的“叁高”特点,是威胁人类尤其是中老年人健康的常见病、多发病。为了减少和延缓中风的发生,减轻中风后机体状态,从高血脂阶段早期进行针刺干预,是针刺防治中风的新视角,具有重要流行病学研究意义。高血脂与中风,神经干细胞与神经营养因子之间的关系是目前研究尚未进行探讨的部分,本研究试图通过建立高血脂合并脑缺血动物模型,并观察针刺的影响,探讨在高血脂阶段积极早期进行针刺干预,是否可通过升高神经营养因子的合成与分泌,从而促进神经干细胞的增殖、迁移和分化,促进脑损伤的修复和再生。研究方法:应用大鼠喂养经典高脂饲料,化学诱导大脑中动脉血栓闭塞制造高血脂合并脑缺血模型。将动物随机分为八组:正常对照组、高血脂模型组、高血脂治疗组、脑缺血模型组、脑缺血治疗组、高血脂合并脑缺血模型组、高血脂合并脑缺血治疗Ⅰ、Ⅱ组。高血脂治疗组用电针叁阴交、丰隆穴治疗10天。脑缺血治疗组用针刺人中、百会穴治疗7天。高血脂合并脑缺血治疗Ⅰ、Ⅱ组,先给大鼠喂养高脂饲料造成高血脂模型,治疗Ⅰ组电针叁阴交、丰隆穴10天后,两组同时电针叁阴交、丰隆穴,针刺人中、百会穴,7天后处死。正常对照组和模型组均不针刺。用生化方法检测各组治疗前后血脂四项。应用神经行为学指标观察治疗前后神经症状的改善情况。实验结束用免疫组化方法检测海马区和额叶皮层脑缺血病理改变、室管膜下区和大脑额叶皮层nestin、PCNA、vimentin、Tuj-1表达情况。用酶联免疫法(ELISA)检测右侧大脑匀浆中神经元特异性烯醇化酶(NSE)、神经生长因子(NGF)、脑源性神经营养因子(BDNF)、碱性成纤维生长因子(bFGF)浓度。实验结果:1高血脂合并脑缺血模型的建立本实验选用经典高脂饲料喂养6周造成高脂血症大鼠模型,在此基础上用大脑中动脉FeCl3刺激血栓性闭塞法造成局灶性脑缺血,最终造成高血脂合并脑缺血模型。预实验结果显示,与同时段正常对照组比较,高血脂组4周、6周CHO、LDL-C、TG升高有显着差异,P<0.01,HDL-C没有显着差异。说明高脂饲料喂养4-6周可以造成大鼠高血脂模型。由于高血脂形成时间较长,饲养6周的高血脂症大鼠模型更近似于人类高血脂症的病理变化,正式实验定为6周。正式实验,42天,高脂饮料喂养的各组大鼠的CHO和LDL-C、TG与正常对照组大鼠比较,升高有显着性差异,P<0.01。HLD-C降低有显着性差异,P<0.01。证明高血脂症大鼠造模成功,可以进行实验。52天脑缺血造模后,在MCAO清醒(术后约1h)后,在1～2h内观察模型动物有脑缺血模型出现的神经功能缺失症状,各组大鼠在造模后1～2h的神经症状行为在评定上均有阳性反应,与正常对照组比较均有显着性差异p<0.01。HE染色结果可见,实验组动物脑缺血造模后,缺血灶出现在额叶,位置比较恒定,缺血灶内细胞排列散乱,并见大量神经元变性坏死,出现脑水肿表现,海马区大量神经元变性坏死,排列紊乱,各组有不同程度的神经元脱失现象等病理改变,说明本实验的脑缺血模型制作是成功的。本实验首次建立高血脂合并脑缺血的动物模型,此模型成功率高,死亡率小,重复性好,充分模拟了人类疾病的病理及生理改变。2正常大鼠血脂、HE染色结果、神经干细胞、NSE、神经营养因子的表达正常大鼠CHO 51.92±9.46mg/dL, HDL-C 26.80±8.16 mg/dL,LDL-C 30.50±8.19 mg/dL,TG47.98±12.18 mg/dL。HE染色结果显示,大鼠右侧海马区和额叶皮层神经细胞排列清楚,细胞形态清晰。神经干细胞标志,nestin、PCNA、vimentin、Tuj-1阳性细胞,在正常大鼠右侧脑内表达较少,在前脑背外侧伸展、侧脑室外侧壁可观察到散在的nestin、PCNA、vimentin、Tuj-1的阳性细胞(背外侧伸展nestin:阳性细胞数63±9.40;面密度0.62±0.10%;光密度0.50±0.03%。PCNA:阳性细胞数185±10.60;面密度1.93±0.11%;光密度1.22±0.07%。vimentin:阳性细胞数95±6.31;面密度0.61±0.04%;光密度0.34±0.02%。Tuj-1:阳性细胞数56±7.69;面密度0.96±0.13%;光密度0.22±0.03%。侧脑室外侧壁:nestin:阳性细胞数41±5.61;面密度0.35±0.05%;光密度0.23±0.03%。PCNA:阳性细胞数114±22.79;面密度1.25±0.25%;光密度0.94±0.19%。vimentin:阳性细胞数48±11.85;面密度1.05±0.26%;光密度0.58±0.14%。Tuj-1:阳性细胞数35±4.69;面密度0.88±0.12%;光密度0.45±0.06%。)正常对照组大脑右侧额叶皮层相应区域表达更少。(nestin:阳性细胞数14±3.47;面密度0.11±0.03%;光密度0.09±0.02%。PCNA:阳性细胞数58±6.52;面密度0.64±0.07%;光密度0.39±0.04%。vimentin:阳性细胞数56±6.46;面密度0.22±0.03%;光密度0.11±0.01%。Tuj-1:阳性细胞数13±5.14;面密度0.08±0.03%;光密度0.05±0.02%。)右侧大脑匀浆中NSE(41.70±3.47 ng/dL)及神经营养因子NGF(79.36±7.07 pg/ml)、BDNF(5.66±0.86μg/L)、bFGF(51.20±6.05 ng/L)含量呈基础表达。3针刺对实验性高血脂大鼠的治疗作用3.1针刺对实验性高血脂大鼠血脂的作用经针刺治疗后,和高血脂模型组相比,高血脂治疗组大鼠的CHO、LDL-C、TG降低有极显着差异,P<0.01。HLD-C升高有极显着差异,P<0.01。说明针刺能降低实验性高血脂大鼠CHO、LDL-C、TG,升高HLD-C,调节血脂水平。3.2针刺对实验性高血脂大鼠右侧大脑SVZ和额叶皮层神经干细胞的作用nestin、PCNA、vimentin、Tuj-1在实验性高血脂造模后大鼠脑内表达较少,在室管膜下区SVZ、背外侧角可观察到散在的nestin、PCNA、vimentin、Tuj-1的阳性细胞,额叶皮质表达更少,与正常对照组相比,其阳性细胞数、面密度、光密度没有显着差异,P>0.05。针刺对实验性高血脂大鼠nestin、PCNA、vimentin、Tuj-1表达影响不大。3.3针刺对高血脂大鼠右侧脑组织匀浆中NSE的作用高血脂造模后,右侧脑匀浆中NSE浓度与正常脑匀浆中NSE浓度没有显着差异,P>0.05,说明高血脂本身不能影响右侧脑组织中NSE的分泌与合成。高血脂大鼠治疗组和模型组之间没有显着差异,说明针刺不能影响实验性高血脂大鼠NSE的分泌。3.4针刺对实验性高血脂大鼠右侧脑组织匀浆中神经营养因子的作用与正常对照组比较,高血脂模型组大鼠大脑匀浆中NGF、BDNF、bFGF含量明显降低,P<0.05或P<0.01;与高血脂模型组比较,针刺治疗组BDNF显着升高,P<0.05,NGF、bFGF没有显着差异,P>0.05,但有升高的趋势。实验结果提示高血脂可降低大鼠大脑中NGF、BDNF、bFGF的分泌与合成,针刺可升高高血脂状态某些神经营养因子的含量,如BDNF。4针刺对实验性脑缺血大鼠的治疗作用4.1针刺对实验性脑缺血大鼠脑缺血后神经行为评分和脑缺血病理改变的作用59天,与正常对照组比较,脑缺血模型组和脑缺血治疗组神经症状评分升高有极显着性差异,p<0.01;与脑缺血模型对照组比较,脑缺血治疗组的神经症状评分降低有极显着性差异,p<0.01。HE染色结果显示,脑缺血治疗组缺血区周围组织水肿减轻,无明显的细胞空泡变性,细胞核正常。海马CA3区结构完整的神经细胞明显增多,变性坏死细胞较少,细胞周围间隙明显缩小,血管病变主要以内皮细胞肿胀,空泡形成为主。说明针刺治疗对局灶性脑缺血大鼠具有显着的治疗作用。4.2针刺对实验性脑缺血大鼠脑缺血后缺血侧SVZ和额叶皮层神经干细胞的作用脑缺血后,大鼠缺血侧前脑室管膜下区(背外侧伸展、侧脑室外侧壁)、缺血区额叶皮层nestin、PCNA、vimentin、Tuj-1强表达,并有多层阳性细胞,背外侧角可见大量的nestin、PCNA、vimentin、Tuj-1阳性细胞,并向外形成了背外侧伸展,脑缺血区可见散在的nestin、PCNA、vimentin、Tuj-1表达。与正常对照组比较,脑缺血模型组、治疗组nestin、PCNA、vimentin、Tuj-1阳性细胞个数、面密度、光密度升高均有极显着差异,P<0.01;与脑缺血模型组比较,脑缺血治疗组各项升高均有极显着差异,P<0.01。脑缺血后存在神经干细胞的增殖,并有一部分神经干细胞有向胶质细胞和神经元祖细胞定向分化的趋向。针刺后各项指标高于脑缺血组。说明针刺可提高实验性脑缺血大鼠大脑侧脑室背外侧伸展、侧脑室外侧壁、缺血区nestin、PCNA、vimentin、Tuj-1的表达。针刺结果显示,针刺可促进大脑SVZ和额叶皮层神经干的增殖,并能促进神经干细胞向胶质细胞和神经元祖细胞定向分化,同时可能促进神经干细胞从SVZ区向缺血区迁移。4.3针刺对实验性脑缺血大鼠缺血侧脑组织匀浆中NSE的作用与正常组相比,脑缺血模型组大脑匀浆中NSE含量明显上升,有极显着性差异,P<0.01;与脑缺血模型组相比,脑缺血治疗组大脑匀浆中NSE含量降低有极显着差异,P<0.01。实验结果提示:脑缺血后,脑匀浆中NSE浓度显着升高,说明出现脑损伤。针刺可降低NSE浓度,从而减轻脑损伤。4.4针刺对实验性脑缺血大鼠脑缺血后缺血侧脑组织匀浆中神经营养因子的作用与正常组相比,脑缺血模型组缺血侧脑组织匀浆中NGF、BDNF、bFGF含量明显上升,有显着性差异,P<0.05;与脑缺血模型组相比,脑缺血治疗组缺血侧脑组织匀浆中NGF、bFGF含量升高有显着差异,P<0.05或P<0.01。实验结果提示脑缺血后,缺血侧脑组织匀浆中NGF、BDNF、bFGF浓度显着升高,说明脑缺血后,自身可分泌神经营养因子,从而产生一定的脑保护作用。针刺可通过促进缺血侧大脑NGF、bFGF的分泌与合成,加强脑保护作用。5针刺对实验性高血脂合并脑缺血大鼠的治疗作用5.1针刺对实验性高血脂合并脑缺血大鼠血脂的作用经针刺治疗后,与正常对照组比较,高血脂合并脑缺血模型组、高血脂合并脑缺血模型治疗Ⅰ组、Ⅱ组CHO、LDL-C升高有极显着性差异,P<0.01;高血脂合并脑缺血模型组、高血脂合并脑缺血模型治疗Ⅱ组TG升高,有极显着性差异,P<0.01;与高血脂合并脑缺血模型组比较,治疗Ⅰ组CHO、TG、LDL-C降低有显着性差异,P<0.01或P<0.05,治疗Ⅱ组没有显着差异,P>0.05;与治疗Ⅰ组比较,治疗Ⅱ组CHO、LDL-C、TG没有显着差异,P>0.05;HDL-C,各组之间比较没有显着差异,P>0.05,但与42天比较,治疗Ⅰ组HDL-C升高有显着差异,P<0.01。本实验表明,针刺可降低高血脂合并脑缺血大鼠CHO、TG、LDL-C水平,升高HDL-C水平,高血脂合并脑缺血模型治疗治疗Ⅰ组疗效好于治疗Ⅱ组,从而说明从高血脂阶段积极介入针刺治疗,可更好、更有效地调节血脂水平。5.2针刺对实验性高血脂合并脑缺血脑缺血后神经行为评分和脑缺血病理改变的作用与合并模型组比较,合并治疗组神经症状评分显着降低,p<0.05;与合并治疗Ⅰ组比较,Ⅱ组没有显着差异,p>0.05,说明针刺治疗对局灶性脑缺血大鼠具有显着的治疗作用。针刺后缺血区HE结果显示,针刺后缺血区周围组织水肿减轻。高血脂合并脑缺血治疗Ⅰ组水肿程度最轻,无明显的细胞空泡变性,细胞核正常。海马CA3区结构完整的神经细胞明显增多,变性坏死细胞较少,细胞周围间隙明显缩小,血管病变主要以内皮细胞肿胀,空泡形成为主。说明电针在高血脂成模后积极治疗可减轻脑损害。5.3针刺对实验性高血脂合并脑缺血大鼠缺血侧SVZ和额叶皮层神经干细胞的作用高血脂合并脑缺血模型组前脑侧脑室背外侧伸展、侧脑室外侧壁、额叶缺血区nestin、PCNA、vimentin、Tuj-1阳性细胞的表达弱于单纯脑缺血模型组。与正常对照组比较,高血脂合并脑缺血模型组、高血脂合并脑缺血治疗Ⅰ组、Ⅱ组阳性细胞个数、面密度、光密度升高均有极显着差异,P<0.01;与高血脂合并脑缺血模型组比较,高血脂合并脑缺血治疗Ⅰ组、Ⅱ组阳性细胞个数、面密度、光密度升高均有极显着差异,P<0.01;与高血脂合并脑缺血治疗Ⅰ组比较,高血脂合并脑缺血Ⅱ组各项降低有极显着差异,P<0.01。实验结果提示高血脂可减弱脑缺血后nestin、PCNA、vimentin、Tuj-1阳性细胞的表达。即高血脂可减弱脑缺血后神经干细胞的增殖,迁移和分化。针刺可提高高血脂合并脑缺血模型大鼠大脑侧脑室背外侧伸展、侧脑室外侧壁、缺血区nestin、PCNA、vimentin、Tuj-1的表达。高血脂合并脑缺血治疗Ⅰ组比Ⅱ组各项表达要强,说明在高血脂阶段介入治疗,更能提高nestin、PCNA、vimentin、Tuj-1表达。针刺结果显示,针刺可促进高血脂合并脑缺血模型大鼠大脑SVZ和额叶皮层神经干的增殖,并能促进神经干细胞向胶质细胞和神经元祖细胞定向分化,同时可能促进神经干细胞从SVZ区向缺血区迁移。说明在高血脂阶段介入治疗,更能促进神经干细胞的增殖,分化和迁移。5.4针刺对实验性高血脂合并脑缺血大鼠缺血侧脑组织匀浆中NSE的作用与正常对照组和脑缺血模型组比较,高血脂合并脑缺血模型组大脑匀浆中NSE含量显着上升,有显着性差异,P<0.05,P<0.01。与正常对照组相比,合并各组缺血侧大脑匀浆中NSE含量明显上升,有极显着性差异,P<0.01;与合并模型组比较,合并治疗Ⅰ组、Ⅱ组下降有显着差异P<0.01,P<0.05;与高血脂合并脑缺血模型治疗Ⅰ组比较,Ⅱ组升高有显着差异P<0.05。实验结果提示,高血脂合并脑缺血可加重脑缺血后脑损伤,针刺可减低高血脂合并脑缺血大鼠的脑损伤,尤其在高血脂阶段介入针刺治疗的治疗Ⅰ组疗效远远好于治疗Ⅱ组。5.5针刺对实验性高血脂合并脑缺血大鼠缺血侧脑组织匀浆中神经营养因子的作用与正常对照组、脑缺血模型组比较,高血脂合并脑缺血模型组NGF、BDNF、bFGF降低有极显着差异,P<0.01;与高血脂合并脑缺血模型组比较,治疗Ⅰ组和治疗Ⅱ组NGF、bFGF上升有显着差异P<0.01;与高血脂合并脑缺血治疗Ⅰ组比较,Ⅱ组NGF、BDNF降低有显着差异P<0.01。实验结果提示:高血脂可降低脑缺血后脑自身的保护作用,针刺可通过促进NGF、BDNF、bFGF的分泌和合成,从而起到脑保护的作用。针刺治疗Ⅰ组的NGF、BDNF高于Ⅱ组,说明在高血脂阶段积极进行针刺治疗可更好的提高神经营养因子分泌,从而起到脑保护的作用。实验结论:1高血脂合并脑缺血模型的建立是成功的。2高血脂本身并不能影响实验性高血脂大鼠右侧室管膜下区和右侧额叶皮层神经干细胞的增殖、迁移与分化,和右侧脑匀浆中NSE的表达,但能降低右侧大脑匀浆中神经营养因子,如NGF、BDNF、bFGF的分泌。3脑缺血能增强实验性脑缺血大鼠缺血侧室管膜下区和额叶皮层神经干细胞的增殖、迁移与分化,促进缺血侧脑组织中NSE的分泌,促进缺血侧脑组织中NGF、BDNF、bFGF的分泌与合成。4高血脂合并脑缺血,可减弱脑缺血后室管膜下区和右侧额叶皮层神经干细胞的增殖、迁移与分化,促进缺血侧脑组织NSE的分泌,降低缺血侧脑组织NGF、BDNF、bFGF的分泌,减弱大脑的自我保护作用。5针刺“丰隆”、“叁阴交”,可降低实验性高血脂大鼠CHO、TG、LDL-C,升高HDL-C水平。针刺不能影响实验性高血脂大鼠高血脂后大脑右侧室管膜下区和额叶皮层神经干细胞的增殖、迁移与分化,和右侧脑组织中NSE的分泌,但能促进右侧脑组织中BDNF的分泌与合成。6针刺“百会”“人中”可改善实验性脑缺血大鼠神经行为症状评分,改善脑缺血状态,降低缺血侧NSE的分泌,增强实验性脑缺血大鼠缺血侧大脑室管膜下区和额叶皮层神经干细胞的增殖、迁移与分化,促进大脑缺血侧脑组织NGF、bFGF的分泌与合成。7针刺可降低高血脂合并脑缺血大鼠CHO、TG、LDL-C水平,升高HDL-C水平,改善高血脂合并脑缺血模型大鼠神经行为症状评分,改善脑缺血状态,可提高高血脂合并脑缺血后缺血侧室管膜下区和缺血区神经干细胞的增殖、迁移与分化,降低缺血侧脑组织中NSE的分泌,促进缺血侧脑组织中神经营养因子NGF、BDNF、bFGF的分泌与合成。8从高血脂阶段积极介入针刺治疗,可更好、更有效地调节血脂水平,改善脑缺血状态,明显提高高血脂合并脑缺血后缺血侧室管膜下区和缺血区神经干细胞的增殖、迁移与分化,降低缺血侧大脑NSE的分泌,促进缺血侧大脑匀浆中神经营养因子NGF、BDNF、bFGF的分泌与合成。9针刺能通过促进缺血侧脑组织NGF、BDNF、bFGF的分泌,降低NSE分泌,促进神经干细胞的增殖、迁移和分化,从而促进神经元的修复和再生。综上所述本实验结果显示,神经营养因子和神经干细胞增殖、迁移、分化之间存在必然联系。在实验性脑缺血和实验性高血脂合并脑缺血大鼠脑缺血造模后,神经营养因子含量的升高,往往同神经干细胞的增殖同时出现,所以猜测本实验脑缺血后是神经营养因子的升高促进了神经干细胞的增殖、迁移和分化。实验结果表明,针刺作为一种治疗手段在一定程度上促进了神经营养因子的分泌,从而最终促进了脑缺血后神经干细胞增殖、迁移、分化,尤其在高血脂阶段针刺治疗可减轻脑缺血后损伤,促进神经元的修复与再生。
佚名[10]2006年在《神经系统疾病》文中研究说明1．锰中毒对幼鼠学习记忆能力的影响葛晓东蓝玲龚健古杨伯宁谭国鹤广西医科大学人体解剖学教研室南宁 530021 为探讨锰中毒对幼鼠学习记忆的影响,本实验用2周龄SD小鼠(8-10 g)40只,随机分组成4组,每组10 只,其中3组为低、中、高剂量染毒组,分别腹腔注射氯化锰(5 mg／kg、20 mg／kg、50 mg／kg体重);一组为对照组,腹腔等量注射生理盐水。连续5 d,在第6天开始采用Morris水迷宫幼鼠进行空间辨别性学习记忆能力的测试,并观测其量效关系,同时每天对其身长(尾长不计)、体重进行测量观察其变化。结果表明:与生理盐水对照组比较,中、高剂量染毒组的幼鼠在定位航行实验中找到平台的时间(潜伏期)显着延长,而低剂量组未见有显着性差异;空间探索实验中,各染毒组找到平台区域的次数
参考文献：
[1]. 周围神经缺血后相关神经元凋亡及神经营养因子动态变化的研究[D]. 杨广承. 河北医科大学. 2002
[2]. 周围神经缺血后相关神经元凋亡及神经生长因子动态变化的研究[J]. 杨广承, 薛景凤, 刘爱雅, 徐晓青, 王玉红. 河北医药. 2009
[3]. 周围神经缺血后相关神经元凋亡及GDNF表达的动态变化[J]. 杨广承, 薛景凤, 刘爱雅, 徐晓青, 王玉红. 山东医药. 2010
[4]. 周围神经缺血后GDNF表达的变化及与神经元凋亡的相关性[J]. 曾静, 王本国. 中国老年学杂志. 2014
[5]. 神经营养素-3（NT-3）对大鼠坐骨神经离断后腰脊神经节损伤保护作用的实验研究[D]. 李登. 郑州大学. 2014
[6]. 神经发育、损伤和再生[C]. 佚名. 中国解剖学会2010年年会论文文摘汇编. 2010
[7]. 脑脉通联合骨髓间充质干细胞移植对脑缺血再灌注大鼠神经细胞再生的影响[D]. 刘敬霞. 北京中医药大学. 2007
[8]. 《中国临床康复》2003年第7卷1～32期主题词索引[J]. 佚名. 中国临床康复. 2003
[9]. 针刺对高血脂合并脑缺血大鼠神经干细胞和神经营养因子的影响[D]. 任秀君. 北京中医药大学. 2007
[10]. 神经系统疾病[C]. 佚名. 中国解剖学会2006年年会论文文摘汇编. 2006