潜江市公共检验检测中心 潜江 433100
【摘 要】目的：建立羊踯躅根中原儿茶酸和原儿茶醛的含量测定方法。方法：采用HPLC法，色谱柱为Thermo C18色谱柱（ 4.6 mm×150 mm，5μm）；流动相为甲醇-0.1%甲酸溶液（7：93）；流速为 1.0ml/min；进样量10μl；检测波长 280 nm；柱温23℃。结果：原儿茶酸与原儿茶醛分别在10.65~106.50μg/ml和5.28~52.80μg/ml浓度范围内与其峰面积成良好的线性关系，r分别为0.9992和0.9990。平均回收率分别为98.3%和102.1%，RSD分别为0.99%和1.01%。结论：本方法操作简便，重复性和准确性较好，适合作为羊踯躅根中原儿茶酸和原儿茶醛的含量测定方法。
【关键词】羊踯躅根；原儿茶酸；原儿茶醛；高效液相色谱法
Determination of Protocatechuic Acid and Protocatechuic Aldehyde in the Root of Rhododendron Molle G. Don by HPLC
Zhang Mengjie，Zhang Changgong，Wang Teng，Wang Huijuan，Zhu Xiaoqiang（ Department of pahrmacognosy，College of Pharmacy，Tongji Medical College，Huazhong University of Science and Technology，Wuhan 430030，China）
[Abstract] Objective：To develop a method for determination of Protocatechuic acid and Protocatechuic Aldehyde in the Root of Rhododendron Molle G. Don by HPLC. Method：A Thermo C18 column（ 4.6 mm×150 mm，5μm）was used at 23℃. The Mobile phase consisted of methanol-o.1% Aqueous formic acid（7：93）. The flow rate was 1.0ml/min and the injection volume is 10μl. The detection wavelength was 280nm. Results：The linear ranges were 10.65~106.50μg/ml（r=0.9992）for Protocatechuic Acid and 5.28~52.80μg/ml（r=0.9990）for Protocatechuic Aldehyde. The average recoveries were 98.3 % and 102.1 %，and the RSD% were 0.99 % and 1.01 %. Conclusions：the method is simple to operate with good repeatability and accuracy. It can be used to the Determination of Protocatechuic Acid and Protocatechuic Aldehyde in the Root of Rhododendron Molle G. Don.
[Key words] the Root of Rhododendron Molle G. Don；Protocatechuic Acid；Protocatechuic Aldehyde；HPLC
羊踯躅根是杜鹃花科羊踯躅属植物羊踯躅Rhododendron Molle G. Don的干燥根及根茎。羊踯躅的花、果实、根及根茎均可入药。根及根茎的毒性较花与果实要小[1]，有较好的药用和研究价值。研究表明，羊踯躅根有解热镇痛、祛风除湿、降压等作用[2]，在其含量测定方面，仅有关于八厘麻毒素的含量测定的报道[3]。本文首次利用HPLC法对其中原儿茶酸、原儿茶醛的含量进行分析研究。
1.仪器与材料
Agilent1100高效液相色谱仪（ G1322A排气阀，G1311A泵，G1316A柱温箱，G1314A紫外检测器）；Agilent色谱工作站；原儿茶酸对照品（中国药品生物制品检定所，批号：110810-200205）；原儿茶醛对照品（中国药品生物制品检定所，批号：110809-200604）；甲醇为色谱纯；水为娃哈哈纯净水；其余试剂均为分析纯；实验用羊踯躅根经生药学教研室张长弓副教授鉴定为杜鹃花科植物羊踯躅（Rhododendron Molle G. Don）的干燥根及根茎。
2.方法与结果
2.1 色谱条件：色谱柱为Thermo C18色谱柱（ 4.6 mm×150 mm，5μm）；流动相为甲醇-0.1%甲酸溶液（7：93）；流速为 1ml/min；进样量10μl；检测波长 280 nm；柱温23℃。
2.3.2 精密度试验：
取同一原儿茶酸、原儿茶醛混合对照品溶液，连续进样五次，记录峰面积。结果原儿茶酸RSD为0.94%，原儿茶醛RSD为1.15%。表明仪器的精密度良好。
2.3.3稳定性试验：
取同一供试品溶液，分别在0h、1h、2h、3h、6h、12h进样，记录峰面积。结果供试品中原儿茶酸RSD为1.49%，原儿茶醛RSD为1.38%。表明供试品溶液在12h内稳定性良好。
2.3.4重复性试验
精密称取羊踯躅根粉末5份，按照“供试品溶液的制备”项下的方法处理，然后进样，记录峰面积。结果羊踯躅根中原儿茶酸的平均含量为0.030%，RSD为1.27%，原儿茶醛的平均含量为0.013%，RSD为1.75。表明该方法重复性良好。
2.3.5加样回收试验
精密称取已知含量的同一批号样品6份，加入适量原儿茶酸、原儿茶醛对照品，按照“供试品溶液的制备”项下的方法处理，然后进样分析，原儿茶酸平均回收率98.3%，RSD为1.00%，原儿茶醛平均回收率102.1，RSD为0.97%。表明本方法可靠。
2.4 含量测定
取样品3份，按照“供试品溶液的制备”项下的方法处理，然后进样，记录峰面积。结果见表2。
3.讨论
本试验考察了甲醇-磷酸-水、甲醇-醋酸-水、乙腈-甲酸-水，甲醇-甲酸-水等流动相系统[4，5]。最后根据峰型及出峰情况，选择了甲醇-甲酸-水系统，然后调整甲醇-甲酸-水的比例，确定流动相为甲醇-0.1%甲酸溶液（7：93）。在此条件下，原儿茶酸、原儿茶醛的保留时间均较理想。现阶段在羊踯躅根含量测定方面仅有关于八厘麻毒素的报道。本文首次尝试利用高效液相色谱法同时测定羊踯躅根中原儿茶酸和原儿茶醛的含量，并建立了羊踯躅根中原儿茶酸和原儿茶醛的含量测定方法，该方法操作简便，重复性和准确性良好，可以作为羊踯躅根中原儿茶酸及原儿茶醛的含量测定方法，对制定羊踯躅根药材质量标准具有参考意义。
参考文献：
[1] 罗新舟，李弘韬，黄念桃.羊踯躅根的生药学研究[J].时珍国医国药，1988，9（5）：435.
[2] 曾凡波，孙仁荣，罗永焱等.羊踯躅根药理作用研究[J].中国中西医结合杂志，1995年基础研究特集：312-315.
[3] 陈东升，黄艳兵. 薄层扫描法测定羊踯躅根及果实中八厘麻毒素的含量[J].中国医药学报，1998，13（5）：69-70.
[4] 张志斌，吴佩颖，祁庆等. HPLC 测定复方四季青片中原儿茶酸、原儿茶醛的含量[J].中成药，2004.9，26（9）：719-721.
[5] 张丽，冯锋，柳文媛. HPLC法测定不同产地虎耳草中没食子酸、原儿茶酸和虎耳草素的含量[J].西北药学杂志，2011.4，26（2）.
作者简介：张梦洁，1988年09月生，湖北潜江，女，硕士研究生，初级，检验员。
论文作者:张梦洁
论文发表刊物:《中国蒙医药》2019年第7期
论文发表时间:2019/11/7
标签：儿茶论文; 中原论文; 含量论文; 甲醇论文; 溶液论文; 甲酸论文; 色谱论文; 《中国蒙医药》2019年第7期论文;