山东省临沂市沂水县杨庄镇中心卫生院 山东沂水 276400
【摘 要】目的 研究IGF-1在骨肉瘤中的表达及其与临床预后的关系。方法 对65例患者切除的骨肉瘤组织进行IGF-1免疫组织化学染色，分析IGF-1的阳性表达与临床病理指标的关系，并收集患者的预后信息，将IGF-1的表达及患者的预后进行Log-rank检验，分析IGF-1与患者预后的关系。结果 IGF-1表达于肿瘤细胞的胞浆内，65例骨肉瘤患者中21例患者呈IGF-1阴性染色，44例患者呈IGF-1阳性表达。IGF-1的阳性表达与肿瘤的转移和Enneking分期有关（P<0.05）；患者随访时间为6-96月，IGF-1表达阳性患者相比较IGF-1阴性表达的患者生存时间短（P=0.007）。结论IGF-1的表达与否影响骨肉瘤患者的进程，IGF-1可能是一个指示骨肉瘤患者预后的指标。
【关键词】骨肉瘤；IGF-1；免疫组织化学；预后
Abstract：Objective To detect the expression of insulin-like growth factor（IGF-1）in osteosarcoma（OS）specimens and the association survival time.Methods 65 OS patients were adopted in this study，the expression of IGF-1 was detected by immunohistochemistry in tumor sections and the associations of clinical parameters with IGF-1 positive expression were analyzed，then Kaplan-Meier curves and log-rank test were performed to calculate the prognostic significance of IGF-1 positive expressions.Results The positive expression of IGF-1 was located in tumor plasma and associated with metastasis and Enneking ranks（P<0.05）.The clinical follow-up time was 6-96 months.Significantly shorter survival was detected with expression of IGF-1（P=0.007）.Conclusion Expression of IGF-1 affect the aggressiveness of OS and predict survival time and may serve as a more important makers of OS.
Key words：Osteosarcoma IGF-1 immunohistochemistry Prognosis
骨肉瘤是最常见的骨关节系统原发性恶性肿瘤之一，其发病年龄低，以青少年多见。骨肉瘤恶性程度高，血运丰富，容易发生远处转移，具有很高的致残率和致死率[1]。
胰岛素样生长因子家族（insulin-like growth factors，IGFs）是一类与胰岛素相似并广泛存在于组织中的多肽，可通过自分泌和旁分泌机制对细胞增殖、分化、凋亡以及肿瘤的发生发展密切相关。本文对骨肉瘤IGF-1的表达进行检测，旨在研究其在骨肉瘤发展中的作用，为疾病的治疗提供新思路[2]。
1材料与方法
1.1一般资料 本研究所有病例取自沂水中心医院 2007年2月-2015年2月间65例骨肉瘤组织，临床资料齐备、获得随访。所有骨肉瘤患者均为首次确诊，且尚未接受任何治疗。其中男性 34 例，女性 31 例；年龄8-28岁，中位年龄18岁。
1.2方法 免疫组织化学染色采用EnVision法。所有骨肉瘤组织作4µm切片，切片常规脱蜡至蒸馏水，3%过氧化氢（H2O2）室温孵育15min阻断内源性过氧化物酶，0.01M枸橼酸盐修复液（pH6.0）进行抗原微波热修复，加入一抗，4℃过夜，滴加生物素化抗兔二抗（1：100），37℃孵育DAB显色，以树脂封片。PBS替代一抗作为阴性对照。
1.3结果判定 免疫组织评分采用强度和密度相接合综合计量的方法：每张切片随机选取10个高倍镜视野进行观察，每个视野计数200个肿瘤细胞；细胞染色强度评分：0（无染色），1（弱染色），2（中等强度染色），3（强染色）；肿瘤细胞阳性率评分：0（0-9%），1（10%-25%），2（26%-50%），3（51%-75%），4（76%-100%），将染色强度评分和阳性细胞率评分二者相乘，＜8分视为低表达，≥8分视为高表达[3]。
1.4患者的随访 所选病例随访至患者死亡或截止至2015年2月，随访时间为6-96个月，自患者首发症状至死亡之间的时间定义为总体生存时间，所以死亡患者均为疾病相关性死亡。
1.5统计分析 用SPSS 11.0进行统计分析，结果以± s表示。IGF-1的表达和临床病理指标的联系比较用χ2检验；Kaplan-Meier方法和Log-rank 检验比较IGF-1不同表达状态生存率的差异，单因素分析有意义的指标进入Cox多因素分析，以P<0.05认为有统计学差异。
2结果
2.1骨肉瘤中IGF-1的表达和临床病理指标的联系
免疫组织化学染色结果显示IGF-1阳性信号定位于肉瘤细胞的胞浆内。本组骨肉瘤病例中IGF-1总体阳性表达率为67.7%（44/65），IGF-1的表达与患者性别、年龄、病理分级、肿瘤直径无关（均P>0.05）；而与肿瘤转移和Enneking分期有关（均P<0.05），如表1所示。
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3讨论
骨肉瘤也叫成骨肉瘤，是常发生于20岁以下青少年或儿童的一种恶性骨肿瘤，主要累及股骨下端及胫骨上端。尽管临床有手术切除、术后放化疗等综合治疗手段的应用但患者5年生存率及其治疗后生活质量不容乐观。进一步探索骨肉瘤发病的分子机制，寻找判断患者预后的新的指标和寻找新的治疗靶点成为当前临床及基础科研工作的重点。
IGF-1是由70个氨基酸组成的单链小分子多肽，主要由肝脏通过内分泌、自分泌和旁分泌的途径合成，具有强烈促有丝分裂效应，既可刺激细胞增殖、分化、成熟，又能抑制细胞凋亡。研究发现乳腺癌、胃癌、结肠癌和前列腺癌等肿瘤中IGF-1的阳性表达在肿瘤的恶性转变和进展中发挥重要作用[4]。目前关于IGF-1在骨肉瘤中的研究相对较少，Burrow等采用RT-PCR的方法检测了48例骨肉瘤患者中IGF-1 mRNA的表达以及和肿瘤转移的关系，发现骨肉瘤组织中有IGF-1的高表达但IGF-1mRNA的高表达和肿瘤的转移并不存在相关性。
Scotlandi等在骨肉瘤细胞系中采用曲妥珠单抗他莫昔芬阻断IGF-1受体的方法发现抑制IGF-1受体通路可以抑制肿瘤细胞的生长。目前尚缺少IGF-1蛋白表达和临床病理指标预后的研究。
本实验中，我们通过免疫组织化学染色的方法观察了骨肉瘤中IGF-1的表达，发现IGF-1在骨肉瘤细胞中具有较高的表达率（67.7%，44/65）且在发生远处转移的患者和Enneking分期高的患者中呈现高表达，这说明IGF-1的表达可能促进了骨肉瘤转移的发生。尽管本组病例中我们没有发现IGF-1的阳性表达与肿瘤病理分级之间有统计学意义的联系，但是我们可以看到在高病理级别的肿瘤中IGF-1具有更高的表达率。
单因素分析显示，高表达IGF-1的患者预后差（P<0.05），多因素分析结果表明：在骨肉瘤患者中IGF-1与预后密切相关，是具有独立预后意义的指标，提示IGF-1可能成为骨肉瘤患者理想的抗体疗法靶标。目前，完全人免疫球蛋白G1抗体cixutumumab能够高亲和性的结合于IGF-1R，通过阻断受体抑制配体依赖性受体活化和信号传导，在人肿瘤移植动物模型实验中取得了良好的效果；一个采用单克隆抗体靶向针对 IGF-1R 的I期临床研究中，研究者注意到在胸腺上皮细胞肿瘤患者中对 IGF-1R 进行抑制能带来临床获益，复发性胸腺瘤患者中，Cixutumumab 单药治疗能被患者很好的耐受，并且治疗有效。
总之，本研究结果显示：在骨肉瘤组织标本中检测IGF-1的表达有利于骨肉瘤患者病情的评估和判断，为针对IGF-1通路靶向药物的应用提供了理论基础。
参考文献：
[1]Marina N，Gebhardt M，Teot L，Gorlick R.Biology and therapeutic dvances for pediatric osteosarcoma[J].The Oncologist.2004；9（4）：422-441.
[2]刘洁，周国兴，刘求梅，等.IGF-1、IGF-1 R、P-Akt和survivin在结肠癌组织中表达的意义及其相关性术[J].广东医学，2011，32（11）：1428-1431.
[3]Rajkumar T，Stamp GW，Pandha HS，Waxman J，Gullick WJ（1996）Expression of the type 1 tyrosine kinase growth factor receptors EGF receptor，c-erbB2 and c-erbB3 in bladder cancer.J Pathol 179：381-385.
[4]Janssen JA，Varewijck AJ.Insulin analogs and cancer：a note of caution.Front Endocrinol（Lausanne）.2014，5（26）5：79.
论文作者:惠中生
论文发表刊物:《航空军医》2015年10期
论文发表时间:2015/12/22
标签：患者论文; 骨肉瘤论文; 肿瘤论文; 阳性论文; 组织论文; 细胞论文; 病理论文; 《航空军医》2015年10期论文;